驴皮成纤维细胞的体外培养研究

试验旨在比较不同培养方法对驴皮成纤维细胞培养的效果,以便建立其体外高效快速的培养体系。采集6~7岁健康的新疆驴真皮组织,分别用组织块贴壁法和双酶消化法对驴皮成纤维细胞进行原代培养,并检测分析细胞的生长特点、生长速度、细胞周期与支原体污染等指标。结果显示,双酶消化法（0.25%胰酶处理1 h,再用0.5%胶原蛋白酶Ⅰ处理6 h）培养驴皮组织3 d后,成纤维细胞进入了对数增殖期,而组织块贴壁法则需要15 d;细胞周期经流式分析发现,处于G0/G1期与S+G2+M期的细胞均约为50%,其余5.17%细胞处于凋亡期,表明大多细胞处于分裂增殖的活跃期,细胞具有很强的活力;试验中培养的细胞均无支原体污染。综上,应用双酶消化法可快速、高效地建立驴皮成纤维细胞体外培养体系。     

鸡胚成纤维细胞原代培养及应用

原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方向。     

鸡胚成纤维细胞原代培养与纯化的初探

本文利用鸡胚成纤维细胞(CEF)进行原代培养与纯化,了解鸡胚成纤维细胞在一定生理状态下所需的各种条件,从而控制培养基的成分,选择最适合于鸡胚成纤维细胞生长的各种因素。在此实验中消化液的浓度及消化的时间是关键,此外实验过程的无菌也是保证实验成功的重要因素。     

早胜牛胚胎和耳缘成纤维细胞分离培养与鉴定

为了建立早胜牛胚胎和耳缘成纤维细胞体外分离培养体系,采用植块法和酶消化法制备这两种组织成纤维细胞。结果显示,用植块法制备了耳缘成纤维细胞,组织块直径较小的成活率较高且生长速度较快;用酶消化法制备了胚胎和耳缘两种组织成纤维细胞,复苏后细胞的存活率:胚胎(96.8%)＞耳(94.7%)。2种组织成纤维细胞生长曲线均呈"S"型,胚胎组织(倍增时间29.7 h)生长速度快于耳组织(倍增时间31.2 h)。用免疫组织化学染色鉴定证实,分离培养的成纤维细胞中间丝被染成棕黄色,波形蛋白呈阳性反应。     

陆川猪耳部成纤维细胞的体外培养

本研究建立陆川猪耳部成纤维细胞的体外培养体系,采用组织块培养法可以获得陆川猪耳部成纤维细胞。用0.25%胰蛋白酶＋0.02%EDTA消化液消化细胞、用含有10%FBS的DMEM对细胞进行培养,能很好的支持陆川猪耳部成纤维细胞的生长。传3代后,观察到培养的细胞形态逐渐均一,为典型的成纤维细胞,绝大部分呈梭形或不规则三角形...     

绵羊耳成纤维细胞的体外培养

用组织块法和冷消化法对绵羊耳成纤维细胞在含血清培养液(RPMI—1640)中进行原代和传代培养，探讨动物体细胞培养模式，并对正常细胞形态进行观察。结果表明组织块法和冷消化法培养可获得比较均一、稳定的细胞群，细胞呈典型的成纤维形态，并成功进行传代培养，建立了绵羊耳成纤维细胞系。     

鸽胚胎嗉囊成纤维细胞的分离培养及鉴定

为探究鸽嗉囊成纤维细胞的体外分离及培养方法,研究选择17日胚龄的鸽嗉囊组织,采用胰酶消化法和组织块贴壁培养法进行原代细胞分离,通过差速贴壁法纯化成纤维细胞.通过细胞形态观察、生长曲线测定和免疫荧光反应对细胞类型进行鉴定.结果 表明,采用胰酶消化法分离培养30 h后细胞开始生长,采用组织块贴壁培养法的细胞培养72 h后开...     

牛胎儿成纤维细胞的培养及性别鉴定

为了探索和建立牛胎儿成纤维细胞体外分离培养及性别鉴定的技术方法,试验取自怀孕40 d的奶牛胎儿耳组织用组织块贴附法进行原代培养和传代培养,用倒置相差显微镜观察成纤维细胞形态;根据牛Y染色体上的性别决定区域(SRY)基因序列设计合成1对PCR引物作为性别鉴定引物, 同时根据牛403 bp的β-珠蛋白基因序列设计1对引物作为内参照引物,建立PCR 反应体系进行性别鉴定.结果表明:分离的成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、增殖;阳性对照和第1牛胎儿成纤维细胞系PCR鉴定扩增得到255 bp的片段和403 bp的β-珠蛋白基因片段,第2,3牛胎儿成纤维细胞系和母牛血液PCR扩增只得到403 bp的β-珠蛋白基因片段,通过电泳证明PCR产物255 bp的片段为SRY基因片段,说明有255 bp扩增带的细胞系为雄性;无255 bp扩增带的细胞系为雌性.结果说明该方法所获得的牛胎儿成纤维细胞可在体外稳定培养,利用PCR鉴定牛胎儿性别具有简单、快速、准确的特点,可应用于基因克隆动物研究中体细胞系的早期性别鉴定.     

种公牛耳组织成纤维细胞的分离与培养

哺乳动物细胞培养始于20世纪50年代,发展至今已成为生物、医学研究和应用中广泛采用的技术方法.近年来,体细胞克隆技术得到迅速发展,不同细胞类型供体的克隆动物相继产生.     

芒硝对驴皮成纤维细胞增殖、凋亡的影响

为研究不同浓度的芒硝对体外培养的驴皮成纤维细胞增殖、凋亡的影响,本试验采用组织块法体外培养驴皮成纤维细胞,并用HE、Masson染色鉴定;再添加高（2 000、1 500 μg/mL）、中（1 000、500、250 μg/mL）和低浓度（100、50、10 μg/mL）芒硝体外培养驴皮成纤维细胞,用MTT和Caspase-3法分别检测成纤维细胞增殖率和凋亡率;最后用实时荧光定量PCR、ELISA法检测不同浓度（1 500、250、10 μg/mL）芒硝培养液中影响驴皮成纤维细胞胶原蛋白合成的相关基因表达量及蛋白浓度。结果显示,培养5 d时,驴皮成纤维细胞开始从组织块边缘爬出,25 d后长满培养皿;HE染色呈典型的梭形,驴皮成纤维细胞中胶原纤维经Masson染色呈蓝色。中浓度芒硝培养液组成纤维细胞的增殖率显著高于高、低浓度组（P<0.05）,相应地,中浓度组的凋亡因子Caspase-3活性显著低于其他两组（P<0.05）。相比于24 h,芒硝作用于成纤维细胞48 h能显著提高胶原蛋白合成相关基因的表达量（P<0.05）,250 μg/mL浓度的效果最佳。综合上述结果,组织块培养法易于分离培养驴皮成纤维细胞,250 μg/mL浓度的芒硝在48 h能显著提高驴皮成纤维细胞的增殖率及其胶原蛋白合成相关基因的表达量,此结果可为芒硝促进驴皮成纤维细胞的增殖作用以及驴皮伤口愈合机制的研究提供理论依据。     

猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞培养方法的研究

为了研究猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞的分离培养体系,根据取样组织的不同,筛选出最佳的培养方法,试验以猪胎儿和耳皮肤为试验材料,用4种不同的培养分离方法,即胰酶热消化法、胰酶冷热结合消化法、胰酶室温消化法和组织块培养法,分离培养猪胎儿成纤维细胞和耳皮肤成纤维细胞,对比培养效果,筛选出最佳的培养方法。结果表明:胰酶室温消化法分离的猪胎儿成纤维细胞存活率显著高于胰酶热消化法和胰酶冷热结合消化法(P<0.05),细胞贴壁效果好,且操作简单;猪耳皮肤成纤维细胞原代培养中,胰酶热消化法和胰酶室温消化法分离的细胞数量少,组织块培养法所需的组织量少,且较胰酶冷热结合消化法操作简单。试验中培养的细胞呈典型的成纤维细胞形态,生长曲线呈"S"型,经冻存复苏后生长状态良好,说明胰酶室温消化法是猪胎儿成纤维细胞较好的培养方法,胰酶热消化法和胰酶室温消化法是猪耳皮肤成纤维细胞原代培养的理想培养方法。     

天祝白牦牛5种组织成纤维细胞的制备及培养特性研究

为建立天祝白牦牛肌肉、胚胎、肾脏、耳、肝脏等5种组织成纤维细胞体外制备、分离、培养成纤维细胞的方法,采用组织块法和酶消化法制备这5种组织成纤维细胞。结果显示:用组织块法成功制备了耳组织成纤维细胞,组织块直径较小的成活率较高且生长速度较快。用消化法成功制备5种组织成纤维细胞,复苏后较冻存前细胞存活率有所下降,但均保持在90%以上,复苏后细胞的存活率:胚胎>耳>肌肉>肾脏>肝脏。5种组织成纤维细胞在离体培养条件下的生长曲线均呈"S"型,生长速度:肌肉>胚胎>肾脏>耳>肝脏。结果表明:用消化法成功地从天祝白牦牛5种组织中体外制备、分离和培养了成纤维细胞,用组织块法成功地体外制备了耳组织成纤维细胞。     

牦牛胎儿成纤维细胞的分离培养

采用30d胚龄左右的牦牛胚胎，用2种不同的消化液消化后，将所得的牦牛胎儿成纤维细胞（yakembryonicfibroblasts，YEF）培养于不同血清含量的RPM11640培养液中，并接种于2种不同材质的培养瓶表面，对YEF的分离方法、培养所需胎牛血清（FBS）添加量和不同基质表面对YEF生长的影响进行了研究。结果表明，含150mL／LFBS的RPMI1640培养基最适合YEF生长，可传代27次以上；经用RPMI1640和D-Hank’S液配制的2．5g／L胰蛋白酶消化，所得的YEF的细胞活率差异不显著（P〉0．05），其原代细胞在含100mL／L胎牛血清的RPMI1640培养液中的贴壁率差异极显著（P〈0．01）；不同生长基质对YEF的形态没有显著影响。     

草原红牛胎儿成纤维细胞的分离培养及性别鉴定

为了获得高质量的草原红牛胎儿成纤维细胞,试验以发育40 d的草原红牛胎儿为材料,采用组织块贴壁法及胶原酶消化法分离纯化草原红牛胎儿成纤维细胞,并绘制生长曲线,再以SRY基因为模板设计性别鉴定引物,通过对已知性别草原红牛血液基因组PCR扩增检验所设计引物的性别特异性,最后采用基因组PCR方法鉴定分离得到的成纤维细胞的性别。结果表明:成功分离纯化出草原红牛胚胎成纤维细胞,经基因组PCR检验该细胞株性别为雄性。     

关于成纤维细胞培养的几点体会

动物细胞培养是动物细胞工程的一项基本技术,它是细胞融合、细胞拆合、细胞凋亡研究、染色体导入和基因转移等项技术的基础。同时动物的细胞还是医学研究尤其是肿瘤学研究的极其重要的材料。因此做好细胞培养就显得至关重要。下面,笔者就成纤维细胞培养,谈谈自己的体会。1成纤维细胞培养方法成纤维细胞的培养可以采用组织块培养法和消化培养法,消化培养法可以在较短时间内获得大量细胞,但其操作比较繁琐,污染机会较大,因此如果在时间允许的情况下,多采用组织块培养法获取细胞。目前组织块培养法一般操作程序是:对组织块先采用粗切,再使用细…     

成鼠耳皮成纤维细胞的体外培养

该研究为获取转基因研究所需的大量供体细胞，进行了以成鼠耳皮组织为材料的成纤维细胞的培养工作。实验改进了胰蛋白酶消化的程序，成功地分离和培养了成鼠耳皮成纤维细胞。细胞形态正常且生长迅速。     

人胎肝细胞培养中清除成纤维细胞的简易方法

原代培养的人胎肝细胞中很容易混杂成纤维细胞，甚至取而代之，故而在从胎肝细胞培养中选择性地抑制、清除成纤维细胞是培养成功与否的关键。我们使用组织培养常用药品，根据细胞生长的不同状况，采取自然沉降或低速离心、部分消化与完全消化等方法，在消除成纤维细胞、纯化胎肝细胞中取得了较为满意的效果；且操作方便，易于推广应用。     

天祝白牦牛胚脸成纤维细胞分离培养与鉴定

为了研究牦牛胚胎成纤维细胞分离培养及鉴定方法,试验采取60日龄白牦牛胚胎,用组织块法分离纯化、传代培养,用免疫组织化学方法进行鉴定.结果表明:用组织块培养的成纤维细胞呈梭形,属典型成纤维细胞,免疫组织化学染色有95%以上细胞中间丝波形蛋白呈棕色着染(阳性).说明所培养的细胞为比较纯净的成纤维细胞.     

新生猪肌组织成纤维细胞的分离培养和鉴定

研究建立了猪肌组织成纤维细胞体外培养的模型,采用组织块培养方法获得了新生猪肌组织成纤维细胞并进行体外培养.观察细胞形态,通过绘制细胞的生长曲线来研究肌组织成纤维细胞的生长规律,利用RT-PCR和免疫细胞化学染色对所获得的细胞进行鉴定,再用双荧光素酶检测系统来检测细胞的转染效率.通过形态学观察、RT-PCR和免疫细胞化学染色结果表明,已成功培养了猪肌组织成纤维细胞,纯度达90%以上.     

不同来源的牛皮肤成纤维细胞原代培养效果对核移殖胚发育的影响

培养延边黄牛不同部位(耳部和腹部)和不同品种(黑白花、利木赞、延边黄牛)耳部的皮肤成纤维细胞,观察原代培养效果并用其核移植,探讨原代培养效果与囊胚发育率的关系。以组织块贴壁率、组织块发育率、组织块的细胞贴壁率作为原代培养效果的衡量标准;传3～5代后进行核移植,分别统计囊胚发育率。结果表明:延边黄牛腹部皮肤的生长效果明显好于耳部皮肤,并且囊胚发育率高于耳部皮肤。利木赞牛皮肤生长效果明显好于延边黄牛和黑白花,延边黄牛与黑白花差异不显著。与之对应,利木赞囊胚发育率显著高于延边黄牛与黑白花,延边黄牛与黑白花差异不显著。