家畜线粒体DNA限制性片段长度多态性的研究与应用

在阐述线粒体DNA的特点及其限制性片段长度多态性的基础上,介绍了线粒体DAN多态性的研究现状及在家畜育种中的应用,并指出线粒体DNA限制性片段多态分析在家畜品种资源研究中的意义。     

应用PCR-RFLP方法对四川猪圆环病毒的检测与分型研究

根据GenBank中猪圆环病毒(PCV)的基因序列,设计并合成了1条引物,建立聚合酶链反应限制性酶切片段长度多态性分析(PCR RFLP)方法,对PK-15细胞、IBRS 2细胞以及疑似猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)、猪皮炎肾炎综合征(PDNS)的病料进行了PCV检测,以及血清型的鉴定。结果表明:IBRS 2细胞和1个PMWS病料检测出PCV 1的基因片段,1个PMWS病料和1个PDNS病料检测出PCV 2基因片段。证明应用PCR RFLP快速检测PCV是可行的,为PCV的检测、分型以及PCV相关疾病的诊断奠定了基础。     

PCR-RFLP方法在蛔虫种间鉴别上的应用

研究应用PCR－RFLP方法初步鉴别了4种不同蛔虫。从猪蛔虫、人蛔虫、犬弓首蛔虫及鸡蛔虫中分别提取基因组DNA，通过PCR扩增得到长度分别约为450bp、450bp、530bp、550bp的PCR产物。经与国外报道相比较，确认完整扩增出4种蛔虫的第二内部转录间隔区（ITS－2）片段。PCR产物经限制性内切酶HaeⅢ和Hinf I酶切鉴定，通过产生的特异性片段首先可以区分犬弓首蛔虫与鸡蛔虫。通过对4种蛔虫的基因组DNA进行扩增，得到长度分别约为980bp、980bp、1050bp、1070bp的PCR产物。经与国外报道相比较，确认完整扩增出4种蛔虫的ITS－1、ITS－2及5.8S核糖休DNA。PCR产物经限制性内切酶HaeⅢ酶切鉴定，通过产生的特异性片段可以区分出猪蛔虫与人蛔虫。通过PCR－RFLP分析，初步推测猪蛔虫与人蛔虫仍为两个独立虫种，但尚需进一步研究确认。     

区别鹅细小病毒和番鸭细小病毒的PCR-RFLP方法的建立

根据GenBank登录的鹅细小病毒（GPV）和番鸭细小病毒（MDPV）非结构蛋白（NS）基因特征,本研究设计1对特异性引物对GPV和MDPV基因组DNA进行PCR扩增,目的片段大小均为810 bp,并对PCR产物进行切胶回收。用EcoRⅠ酶对GPV和MDPV特异性胶回收产物进行酶切鉴定,结果显示MDPV经EcoRⅠ酶切后琼脂糖凝胶电泳检测片段为2段,大小为530和280 bp;而GPV经EcoRⅠ酶切后琼脂糖凝胶电泳检测片段大小不变。本研究建立了一种快速区别GPV和MDPV感染的检测方法,可对番鸭感染水禽细小病毒的情况进行快速鉴别诊断。     

山羊痘病毒疫苗株与野毒株PCR-RFLP鉴别方法的建立及应用

为了建立区分疫苗株与广西分离株的检测方法,根据GenBank上的山羊痘病毒序列设计1对引物,用来扩增山羊痘病毒P32基因,通过对国内疫苗株及6株广西分离株的P32基因进行克隆、测序比较发现,所有广西分离株核苷酸651位的碱基全部由T变为C,647位~652位核苷酸构成由TGTATA变异为TGTACA,多了1个限制性内切酶Bsp1407Ⅰ位点,因此用特异性引物扩增出739 bp的目的片段后,再用限制性内切酶Bsp1407Ⅰ进行酶切分析,疫苗株可以切成135 bp和604 bp 3个片段,广西分离株可以切成135、226、378 bp 3个片段。结果表明,所建立的PCR-RFLP方法可以区分疫苗株和广西分离株。     

鸡快慢羽分子鉴定方法的建立及其应用

利用找到的鸡快羽和慢羽基因,采用双重PCR方法建立了一种高效的鸡快、慢羽分子鉴定方法,在快慢羽自别雌雄鸡群体当中验证表明准确率达100%。采用该方法和经典表型鉴定方法对同一群鸡进行快慢羽判定,结果发现,除表型鉴定为微长型的个体与分子鉴定结果符合率为94.1%外,其它羽型符合率均达100%。对该鸡群快、慢羽个体早期生长速度比较研究发现,除出壳重差异不显著、第1周差异显著(P0.05),在其后各周,快、慢羽个体间体重差异均极显著(P0.01)。     

动物mtDNA标记的研究方法与应用

对动物mtDNA的结构和遗传特征、mtDNA标记的研究方法、提取mtDNA的关键步骤、近年来动物mtDNA标记的应用进行了综述,并对mtDNA标记在应用中存在的问题提出了完善方法。     

T-RFLP技术及其在动物胃肠道微生物群落多样性研究中的应用

随着分子生物学技术的飞速发展,越来越多的新兴研究手段应用于胃肠道微生态系统的研究之中。介绍了末端限制性片段长度多态性技术(T-RFLP)的基本原理、操作流程和优缺点,并总结了该技术在动物胃肠道微生态研究中的应用现状。     

家鸡Mx基因多态性及其诱变修饰的研究

研究采用错PCR-RFLP的方法对家鸡14个品种的Mx基因变异性分布进行了探索;并利用PCR突变技术将Mx基因全长cDNA第2032位碱基由G突变为A(即631位氨基酸的改变),并将突变的Mx基因插入真核表达载体pcDNA3.0,转染COS-I细胞,进行RT-PCR与间接免疫荧光(IFA)鉴定,研究结果显示,14个品种Mx基因的2032位点存在2个等位基因(A、G),3种基因型(AA、AG、GG),其中鹿苑鸡、狼山鸡、斗鸡未发现AA型个体,茶花鸡未发现GG个体;并成功对Mx基因进行PCR诱变修饰和构建了能够表达鸡Mx基因的重组真核表达载体,为其体内外表达及生物学活性的进一步研究奠定了基础.     

吉林市周边猪场猪源弓形虫感染情况调查及分离株基因型初步鉴定

为了解吉林市周边猪场弓形虫的感染情况及其基因型分型,试验于2019年10月份—2020年9月份在吉林市周边9个养猪场采集326份血清样本,利用ELISA方法进行血清中弓形虫抗体检测,计算猪场弓形虫阳性率。利用动物试验进行阳性虫株的分离并进行细胞培养,利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法在SAG3、GRA6和L358 3个位点进行分离虫株的基因型初步鉴定。结果表明：吉林市周边猪场血清学检测弓形虫平均阳性率为28.31%;分离得到1株虫株,命名为JLpig1株。临床分离株JLpig1在位点GRA6处表现为基因Ⅰ型和基因Ⅱ型;在位点SAG3处表现为基因Ⅰ型和基因Ⅱ型;在位点L358处表现为基因Ⅱ型和China1型(Toxo DB#9株)。初步判断吉林分离株JLpig1是强毒株或中毒株可能性较大,以基因Ⅱ型为主。说明吉林市周边猪场弓形虫病感染较为普遍,且感染率较高,应提高猪场人员对猪弓形虫病的认识,加强对猪场猪弓形虫病的防控。     

用DNA指纹技术研究Zmu-1:DHP豚鼠的群体遗传结构

为了鉴定Zm u-1∶DHP新品系豚鼠的遗传组成,试验以Jeffreys 33.6和33.15探针,分别与Zm u-1∶DHP和DHP 2个品系豚鼠基因组DNA的H in fⅠ和H aeⅢ酶切限制性片段进行Sou thern杂交,绘制豚鼠DNA指纹图,分析豚鼠基因组DNA限制性片段长度的多态性。结果显示,33.6探针与H in fⅠ酶组合应用,多态性程度较高,制图效果好;Zm u-1∶DHP豚鼠的DNA指纹图中,在6 kb和9 kb标记点出现特征性基因序列片段;Zm u-1∶DHP品系内的相似系数Fm=0.834±0.066,显著高于DHP品系内的Fm=0.653±0.158,也高于2个品系的Fm=0.670±0.115;Zm u-1∶DHP豚鼠2随机个体间遗传组成完全相同的机率Fmn=1.07×10-2,高于DHP豚鼠的Fmn=8.474×10-5。表明该方法用于豚鼠遗传质量检测和品系鉴定是可行的。Zm u-1∶DHP和DHP豚鼠都属远交系动物,但前者的遗传基因纯合性显著高于后者,结合性状可以看出,Zm u-1∶DHP豚鼠遗传分化形成了新的品系。     

地方鸡种与隐性白羽鸡遗传变异的AFLP指纹

利用6对AFLP引物组合对我国12个地方鸡种和引进鸡种隐性白羽鸡进行了遗传检测,统计了每个引物组合在各个品种中检测到的多态性条带和特异性条带,计算了13个鸡种的遗传相似系数和遗传距离,并据此构建了UPGMA聚类关系图,分析了所研究鸡种的遗传关系.结果表明:6对AFLP引物组合在13个鸡种中共检测到290条多态性条带,平均每个引物组合产生48.3奈多态性标记,同时在每个品种群体中还检测到了数量不等的特异性条带,其中寿光鸡和东乡黑鸡最多,为9条,旧院黑鸡、兴义矮脚鸡和隐性白羽鸡最少,为1条.13个鸡种聚为4类,其中隐性白羽鸡单独聚为一类,鸡种间的遗传相似系数及聚类结果与各个鸡种的地理分布、现实状况相吻合,从而表明AFLP指纹用于我国地方鸡种的遗传多态性分析、品种鉴定及品种间亲缘关系分析是可行的.     

犬细小病毒分离鉴定及其基因型调查的基础研究

用F81细胞从不同地区送检的25份肠炎犬病料中分离出10株细小病毒，经形态学，理化学，生物学和分子病毒学等鉴定，结果这10株病毒均能在F81细胞上生长，产生细胞肿胀、变圆、破碎、脱落等细胞病变；病毒粒子呈立体对称，直径为20～24nm，无囊膜，抗氯仿，耐酸，耐热，能被5-IUDR抑制，可凝集猪、马、猫的红细胞，不能凝集人、鸡、豚鼠、兔的红细胞，HA试验能被抗CPV的特异性抗体所抑制，用犬细小病毒（CPV）特异性引物对10株病毒进行PCR扩增，结果扩增片段与阳性对照大小一致(771bp），用PV/犬/JL/1/02、PV/犬/BJ/1/99和PV/犬/GZ/1/02三个毒株进行人工感染犬试验，结果人工感染犬在接种后白细胞总数出现短期不同程度的下降，在攻毒后4～14d粪便PCR检查阳性，其中接种PV/犬/BJ/1/99的一只犬出现严重的肠炎症状并死亡，其余接种犬没有出现明显的临床症状，但血清抗体均升高（大于5倍），而对照组的白细胞总数和血清抗体没有明显的变化，粪便PCR检测阴性，表明所分离毒株能够感染犬，鉴定结果证明，CPV在我国犬群中仍广泛存在。     

羊种布鲁氏菌疫苗株PCR-RFLP鉴定方法的建立

为建立一种羊种布鲁氏菌Rev.1疫苗株PCR-RFLP鉴定方法,利用羊种布鲁氏菌Rev.1具有链霉素抗性的特性,选取与链霉素抗性相关编码核糖体蛋白S12的rps L基因为模板设计引物,经PCR扩增后,将产物进行Nci I酶切,发现羊种布鲁氏菌疫苗株Rev.1出现约500 bp条带,而不具有链霉素抗性的羊种布鲁氏菌株16M则出现384 bp条带。结果表明,PCR-RFLP方法能够用于羊种布鲁氏菌Rev.1疫苗株的鉴定,这为今后区分羊种布鲁氏菌疫苗株Rev.1免疫与野株感染提供了基础。     

T-RFLP快速鉴定生鲜肉中牛羊成分的研究

试验旨在建立快速检测生鲜肉中牛、羊成分的定性分析方法。通过T-RFLP法,上游引物的5′端用6-FAM进行荧光标记,下游引物5′端用ROX进行荧光标记,PCR结束后选择限制性内切酶HinfⅠ、BlnⅠ进行酶切消化,在测序仪上通过毛细管电泳即可检测荧光标记的两个末端的限制性片段。利用不同物种产生的不同峰谱达到对物种快速定性的目的。该法能够对生鲜肉中牛、羊肉进行定性鉴定分析,不同物种产生不同峰谱,限制性内切酶HinfⅠ酶切牛肉样品所产生的限制性末端片段长度为46和373 bp,限制性内切酶BlnⅠ酶切羊肉样品所产生的限制性末端片段长度为203和515 bp。     

T-RFLP技术及其在微生物群落结构研究中的应用

作者介绍了末端限制性片段长度多态性（T-RFLP）分析技术的基本原理和操作方法,并就该方法在生态环境中、动物和人体内微生物群落结构的研究应用情况做了综述。由于T-RFLP分析技术不依赖于细菌培养,并且整合了自动测序仪的高分辨率和高通量特征,因此,对于分析复杂的群落结构比其它的指纹识别技术具有更明显的优势,最后分析了此种技术的不足之处并对它的应用前景做出了展望。     

分子标记技术在寄生虫分类鉴定上的应用

分子标记与形态标记、细胞学标记和生化标记3类遗传标记技术相比,具有直接以DNA的形式表现,在动物的任何生长阶段都可检测,遍布整个基因组,多态性高,检测手段简单迅速,无基因多效性,能够明确辨别等位基因,试验重复性好等优点.目前,在寄生虫分类鉴定上常用的分子标记技术有RFLP,PCR-RFLP,RAPD和AFLP.文章综述了4种分子标记技术的基本原理、主要优缺点以及在寄生虫分类鉴定中的应用情况.