基于量子点标记技术的鸡新城疫病毒sFLISA检测技术研究

本研究建立了基于量子点的鸡新城疫病毒(NDV)sFLISA检测方法。该方法以抗NDV多克隆抗体为捕捉抗体、以生物素标记抗NDV单克隆抗体为检测抗体、以量子点标记的链霉亲和素为荧光探针。该方法与其它有关禽类病毒(产蛋下降综合征病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、禽白血病病毒)无交叉反应,比血凝试验灵敏,为临床早期快速检测NDV提供了行之有效的方法。     

碲化镉量子点与朊蛋白相互作用研究

碲化镉量子点(CdTe QDs)与重组型朊蛋白(rPrP)相互作用时,rPrP会诱导CdTe QDs发生聚集,引起CdTe QDs荧光显微镜成像、紫外-可见吸收光谱和荧光光谱发生改变.而CdTe QDs会加速rPrP纤维化,引起硫磺素T(ThT)荧光明显增强和刚果红(Congo Red)紫外-可见吸收光谱红移.     

多聚赖氨酸-量子点微球在细胞标记中的应用

以戊二醛为交联荆,将在水相合成的带负电的CASe/Cds核壳量子点与带正电的多聚赖氨酸结合制备得到稳定性微球(PL-QDs).将该微球与肝癌细胞SMMC-7721共培养,并用荧光显微镜跟踪观察以研究量子点微球在细胞标记中的作用.结果显示,微球对细胞无毒性,而且能有效地将量子点释放至细胞内并使细胞在绿光光照下发出红色荧光,荧光能稳定存在6 d以上.研究表明,该微球细胞毒性低,可用于生物学标记的量子点载体.     

双抗夹心荧光免疫吸附测定法(sFLISA)定量检测转基因玉米中Bt蛋白

将量子点(Quantum Dots,QDs)应用于标记羊抗兔多克隆抗体,并利用Bt杀虫晶体蛋白作为标准蛋白和免疫抗原,通过抗体-抗原-抗体-量子点标记抗体反应,建立了双抗夹心荧光免疫吸附测定法(sFLISA),以定量检测转基因玉米中的Bt表达蛋白.研究结果表明,该方法的最低检测限为3 pg/mL,线性检测范围为6～200 pg/mL,回收率在90.0%～105.9%,变异系数在3.0%～12.6%.     

CdSe/ZnS量子点的合成及对阿萨尔吉亚芽孢杆菌标记

目的:制备CdSe/ZnS核壳型量子点,并用量子点标记阿萨尔吉亚芽孢杆菌,为建立生防菌阿萨尔吉亚芽孢杆菌的荧光探针标记提供科学依据。方法:用化学方法合成CdSe量子点,再合成CdSe/ZnS核壳型量子点,并用化学偶联方法将量子点标记阿萨尔吉亚芽孢杆菌。结果:当Cd:Se摩尔比为2:1,反应时间为40 min,温度为30℃,pH为8. 0时,获得荧光性能较好的CdSe量子点,CdSe在与Na_2S和ZnSO_4 50℃反应1 h,得到CdSe/ZnS核壳型量子点。以MPA修饰的CdSe/ZnS核壳型量子点具有良好的荧光强度和分散性。加入EDC和NHS偶联剂的芽孢杆菌样本的标记效率明显高于不加偶联剂的样本。结论:CdSe/ZnS核壳型量子点的标记效率为24%。     

水热法合成CdSe/ZnSe/ZnS核壳结构量子点

本研究采用水热法合成了3-巯基丙酸稳定的具有高荧光活性的CdSe/ZnSe/ZnS核/壳结构量子点,并通过透射电镜对量子点的形貌进行了表征。研究了影响量子点荧光强度的因素,并分析了量子点的稳定性。结果表明,水热法合成的CdSe/ZnSe/ZnS量子点,分布均匀,粒径大小均匀,约为5~8 nm。当激发波长为372 nm时CdSe/ZnSe/ZnS量子点可发射蓝紫色(446 nm)荧光,荧光活性高、荧光稳定性好,毒性低,可用于生物荧光标记、组分测定等。     

双抗夹心荧光免疫吸附测定法（sFLISA）定量检测转基因玉米中Bt蛋自

将量子点（Quantum Dots,QDs）应用于标记羊抗兔多克隆抗体,并利用Bt杀虫晶体蛋白作为标准蛋白和免疫抗原,通过抗体-抗原-抗体-量子点标记抗体反应,建立了双抗夹心荧光免疫吸附测定法（sFLISA）,以定量检测转基因玉米中的Bt表达蛋白。研究结果表明,该方法的最低检测限为3pg／mL,线性检测范围为6-200pg／mL,回收率在90.0％-105.9％,变异系数在3.0％-12.6％。     

量子点荧光探针的应用及其在植物中的发展前景

量子点是一种最新型的荧光材料,与传统的有机染料分子相比,具有颜色丰富、光化学性质稳定、荧光散射少、光漂白作用小、生物毒性低等特点。量子点在生物标记、人体病理学、材料科学、植物细胞分离与标记、基因组学、蛋白质组学、微生物、生物成像以及生物芯片等研究领域中都具重要作用。综述了量子点的特征、研究进展以及在动植物、医学中的应用,分析了它在植物研究上的必要性、可行性和应用价值,并对量子点在植物中的应用前景和具体研究方向进行了展望。     

Protein A磁珠检测朊病毒方法的建立

建立Protein A磁珠法检测朊病毒,将朊病毒抗体IH2包被后的Protein A磁珠与蛋白酶K消化过的攻毒小鼠脑组织匀浆液混合,经免疫沉淀缓冲液温和洗脱杂蛋白,再经0.2M甘氨酸将目的蛋白洗脱并且利用聚丙酰胺凝胶电泳检测。通过聚丙酰胺凝胶电泳检测出25KD的目的蛋白带,经与正常未消化的朊蛋白条带相比较,证实检测出朊病毒。Protein A磁珠具有高效特异的与抗体IgG结合的特点,与多克隆抗体混合后可有效结合IgG。该方法较免疫组织化学和Western-blot技术简便快速,且磁珠可以回收再使用,使成本低廉。     

基于量子点的赭曲霉毒素AsFLISA检测技术研究

建立了基于量子点标记技术的赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)双抗夹心荧光免疫检测(sandwich fluorescence-linked immunosorbent assay,sFLISA)体系,包含多克隆包被抗体、生物素标记的多克隆检测抗体、量子点标记的链霉亲和素等,获得了sFLISA的最佳操作参数:包被抗体浓度2.5μg/mL,检测抗体稀释500倍,量子点标记链霉亲和素稀释100倍。该方法在OTA浓度3.125~125μg/L之间时,相对荧光强度和OTA浓度呈线性关系,回归方程为y=0.0206x+0.2018,R2=0.9924;加标回收率在90.1%~110.0%之间,变异系数均小于10%,能较好地进行赭曲霉毒素A的定量检测。     

CdTe量子点荧光猝灭法测定铜离子的研究

以巯基乙酸为稳定剂,在水溶液中一步合成了CdTe量子点.以该量子点为荧光探针,基于荧光猝灭法对Cu2+离子进行了定量检测.考察了缓冲体系、缓冲液浓度、缓冲液pH值、反应时间、量子点浓度等多种因素的影响,在0.033mol/L、pH值为5.91的磷酸二氢钾磷酸氢二钠缓冲液中,当量子点浓度为3.8×10-4mol/L、反应时间为30min时,该方法的线性区间为2～200μg/L,检测下限为0.29μg/L.具体解释了量子点荧光猝灭,是由于价带电子激发到导带以后被表面结合的Cu2+离子捕获而产生的结果,并利用光解实验进一步验证了这一机理.     

α,β,γ,δ-四(对磺苯基)卟啉与细胞型朊蛋白的体外作用研究

以TPPS_4(α,β,γ,δ-tetrakis(4-sulfophenyl)porphine)作为四吡略类化合物的代表,通过共振光散射和紫外-可见光吸收表征了TPPS_4与细胞型朊蛋白在体外的相互作用.结果表明朊蛋白可诱导TPPS_4发生J-型聚集,而形成的聚集体与朊蛋白结合可抑制细胞型朊蛋白(PrP~c)向致病型朊蛋白(PrP~(Sc))转变,表明TPPS_4等四吡略类化合物对朊病毒病的治疗具有潜在的药用价值.

Abstract：

Considering α,β,γ,δ-tetrakis (4-sulfophenyl) porphine (TPPS_4) as a representative of tetrapyr-role compounds, we studied the interaction between cellular prion protein and TPPS_4 in vitro with UV/Vis absorbance and resonance light scattering technique.The results showed that prion protein induced the J-aggregation of TPPS_4, and the J-aggregation species inhibited PrP~(Sc) formation from PrP~c, suggesting that tetrapyrrole compounds may become a potential therapeutic drug for prion diseases.     

鱼腥草素同系物对红细胞膜蛋白上酪氨酸残基荧光特性的影响

研究了鱼腥草素同系物(HOU-Cn,n=8,10,12)对红细胞膜蛋白酪氨酸(Tyr)残基荧光特性的影响.结果表明:不同浓度的HOU-Cn均能降低Tyr的荧光强度,随着HOU-Cn碳链的延长,Tyr的荧光强度下降幅度减小.动力学参数的结果表明焓变△H and熵变△S均为正值,而自由能△G为负值,说明HOU-Cn与细胞膜蛋白的结合主要是由HOU-Cn与膜蛋白质疏水相互作用引起的熵驱动自发过程.     

ZnS-AgInS_2型量子点的水溶性修饰

采用二巯基辛酸修饰ZnS-AgInS2型量子点,建立了一种制备水溶性量子点的方法,得到了性能优良的水溶性量子点.该修饰方法简便易行,具有较高的转化率;得到的量子点荧光性能损失较小,可以稳定放置6个月.     

绿色荧光蛋白在贵阳腐霉的组成性表达

以潮霉素抗性基因hph为筛选标记,以双元载体pPK2为基本骨架,将增强型绿色荧光蛋白基因egfp置于组成型启动子PgpdA和色氨酸C终止子TtrpC之间,构建了组成性表达egfp的载体pPK2EGFP,利用根癌农杆菌介导的遗传转化法,转入贵阳腐霉(Pythium guiyangense)表达.对转化子进行RT-PCR和荧光显微镜检测,结果表明,egfp基因在贵阳腐霉转化子中能稳定表达.     

ZnS-AgInS2型量子点的水溶性修饰

采用二巯基辛酸修饰ZnS-AgInS2型量子点,建立了一种制备水溶性量子点的方法,得到了性能优良的水溶性量子点.该修饰方法简便易行,具有较高的转化率;得到的量子点荧光性能损失较小,可以稳定放置6个月.     

花叶病毒侵染的果蔗(Badila)的基因表达

采用荧光标记差异显示技术(d ifferential d isp lay,简称DD-PCR)对甘蔗花叶病毒(Sugarcane m osaic virus,SCMV)侵染的果蔗(Bad ila)基因表达进行研究.用随机筛选出的23对引物组合扩增出9条差异条带,其中4条是有明显差异表达的cDNA条带,5条是表达强弱的差异条带.同时对一些影响荧光标记DD-PCR的因素进行了分析.     

腐植酸与铜(Ⅱ)和铅(Ⅱ)离子相互作用的荧光光谱和电导率及红外吸收光谱分析

采用荧光光谱、电导法及红外吸收法研究了腐植酸与Cu(Ⅱ)、Pb(Ⅱ)相互作用的荧光光谱、电导率及红外吸收光谱.结果表明,Cu(Ⅱ)、Pb(Ⅱ)都能引起腐植酸包括荧光淬灭在内的荧光强度变化及所在溶液的电导率变化,其发生变化的金属离子浓度范围基本一致,显示二者均可用于腐植酸与重金属如铜、铅相互作用的研究.红外吸收光谱分析表明,Cu(Ⅱ)、Pb(Ⅱ)与腐植酸的相互作用主要发生在腐植酸的羧酸基团位置.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白NSP4细胞核定位研究

为探讨PRRSV非结构蛋白4(NSP4)功能,体外构建了pEGFP-N1-nsp4真核表达载体,转染Marc-145细胞,利用NSP4-GFP融合蛋白携带的绿色荧光标记,研究NSP4蛋白在Marc-145细胞中的定位,并根据蛋白疏水性设计构建含有nsp4基因N端不同长度的重组pEGFP-N1表达载体,转染细胞以进一步了解NSP4蛋白是否存在核定位信号序列及其在细胞中的分布。试验结果表明:融合蛋白主要位于细胞核,部分在胞浆内。PRRSV NSP4蛋白铰链区(hinge region,HR)145～168氨基酸是决定蛋白核内定位的功能区,该片段缺失影响NSP4蛋白进入细胞核。结论:体外转染细胞内表达的NSP4蛋白主要分布在细胞核内,HR区是其核定位信号,NSP4蛋白通过HR区信号作用主动进入细胞核内。     

纳米金对碳点荧光猝灭的研究

实验发现纳米金(AuNPs)能有效地猝灭碳点(CDs)的荧光.考察了CDs质量浓度、pH值、反应温度和时间等多种因素对荧光猝灭的影响,在最佳实验条件下猝灭常数为9.1×108 L/mol.此外,加入猝灭剂AuNPs前后CDs的荧光寿命基本不变;且随温度升高,猝灭常数减小.因此,推测AuNPs对CDs的荧光猝灭为静态猝灭.