氯霉素多克隆抗体的制备及免疫活性研究

建立氯霉素的免疫分析方法,由氯霉素原药与丁二酸酐反应合成了氯霉素两种半抗原(CAP-HS1、CAP-HS2),分别纯化后经质谱法(MS)分析鉴定结构.纯化的半抗原与牛血清蛋白(BSA)以碳二亚胺法偶联得到人工抗原.将免疫抗原分别免疫兔子获得了相应抗体.当包被抗原的浓度为10μg·mL-1时,抗CAP-HS1和CAP-HS2的冻干粉效价分别为8.39×106和6.55×104(OD490nm=1.0).研究了抗原抗体反应的亲和力和竞争抑制能力,其中抗CAP-HS1抗体适合免疫分析,检测线性范围为0.2～100 ng·mL-1,最低检测限IC20为0.239 ng·mL-1,抗CAP-HS1抗体对各类似物如甲砜霉素、氟甲砜霉素的交叉反应率分别为0.025%和0.166%,对其他类抗生素的交叉反应率＜2×10-5.     

二氯喹啉酸人工抗原的合成

以3,7-二氯-8-喹啉羧酸、草酰氯、5-氨基戊酸(Q-5)为原料合成二氯喹啉酸半抗原,再采用碳二亚胺法将半抗原与载体蛋白[牛血清蛋白(BSA)、鸡卵清蛋白(OVA)]偶联合成相应的人工抗原。将半抗原用红外(IR)和核磁共振(1H-NMR)进行结构表征,通过紫外扫描证明二氯喹啉酸人工抗原(Q-5-BSA、Q-5-OVA)合成成功,且Q-5-BSA、Q-5-OVA的结合比分别为21∶1、17∶1。人工抗原的合成为研制二氯喹啉酸多克隆抗体及免疫试剂盒奠定了基础。     

胎膜早破孕妇白细胞介素8、C反应蛋白及白细胞计数的检测对绒毛膜羊膜炎的诊断意义

目的了解胎膜早破孕妇母血中白细胞介素8(IL-8)、C反应蛋白(CRP)及白细胞计数对绒毛膜羊膜炎的诊断意义.方法采用放射免疫法测定54例胎膜早破(早破组)和40例正常足月孕妇(对照组)血中的IL-8水平,并同步检测CRP水平及白细胞计数;每例组织绒毛膜羊膜炎通过产后胎盘病理证实,按病理结果将早破组分为绒毛膜羊膜炎组(n＝36)及非绒毛膜羊膜炎组(n＝18).结果早破组和对照组的IL-8、CRP及白细胞计数的差异均有非常显著性(P＜0.01)[(130.4±25.6)ng·L-1vs(75.2±15.8)ng·L-1、(125.4±10.4) mg·L-1vs(1.70±1.1) mg·L-1 (11.5±3.6)×109/Lvs(8.9±1.9)×109/L],而绒毛膜羊膜炎组和非绒毛膜羊膜炎组比较,IL-8、CRP及白细胞计数的差异也有显著性和非常显著性(P＜0.05～0.01)[(138.1±27.2)ng·L-1vs(100.7±20.6)ng·L-1、(127.6±3.2) mg·L-1vs(1.9±1.4)mg·L-1、(12.8±4.0)×109/Lvs(8.9±2.7)×109/L].结论检测胎膜早破孕妇母血中的IL-8、CRP及白细胞计数可早期发现组织绒毛膜羊膜炎,这对及早处理、改善妊娠预后有重要临床意义.     

UASB的启动及其对畜禽废水处理的试验研究

利用UASB反应器处理畜禽废水的试验运行。结果表明，用畜禽废水直接启动UASB反应器是切实可行的，絮状污泥接种后经过54 d的驯化，有机负荷由0.8 kg COD·（m3·d）-1提升到5 kg COD·（m3·d）-1，进料COD浓度由800 mg·L-1提高到4 000 mg·L-1，去除率基本稳定在85%以上；用UASB反应器处理畜禽废水也是切实可行的，畜禽废水经过UASB反应器处理，COD的去除率达到85%以上，同时对TN和TP也有一定的去除，且反应器较稳定，具有较强的抗冲击负荷能力。     

北京市集约化农区地下水硝酸盐含量变化分析

为分析和评价北京市地下水硝酸盐污染状况,以北京市集约化农区13个郊区县为研究对象,采集2005—2012年地下水样本,分析测定其NO-3-N含量。结果表明,地下水NO-3-N平均含量为6.34 mg·L-1,年际均值在5.85～6.93 mg·L-1之间,符合国家地下水质量标准（GB/T 14848-93）的Ⅲ类水质标准,超标率（＞10 mg·L-1）和严重超标率（＞20 mg·L-1）分别为19.36%和6.73%。地下水NO-3-N含量雨季后略高于雨季前;不同作物种植区地下水NO-3-N平均含量顺序为蔬菜种植区＞粮食作物区＞其他作物区＞果树种植区,均值分别为7.66、6.15、5.58 mg·L-1和4.97 mg·L-1;NO-3-N含量随地下水埋深增加呈明显下降趋势。     

日本结缕草成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的影响因子分析

 【目的】优化日本结缕草的组织培养体系，提高其植株再生率，建立高频植株再生体系。【方法】以日本结缕草的成熟种子为外植体，分析激素、基本培养基、培养条件、脯氨酸、Cu2+等因子对愈伤组织诱导及植株再生的影响。【结果】（1）培养基中添加脯氨酸能提高愈伤组织诱导率，而BA降低愈伤组织的诱导率，低浓度的NAA(0.1～0.2 mg·L-1)能促进愈伤组织的形成，愈伤组织诱导的最佳培养基为ND＋2,4-D 3.0 mg·L-1＋NAA 0.2 mg·L-1+L-Pro 500 mg·L-1，愈伤组织诱导率达57.3%；（2）愈伤组织继代的最佳培养基为MSD+ 2,4-D 1.0 mg·L-1；（3）愈伤组织分化的最佳培养基为MSD＋NAA 0.3 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1+BA 0.05 mg·L-1 + L-Pro 500 mg·L-1，分化率达36.7%。【结论】优化了日本结缕草的组织培养体系，初步找到了影响其成熟种子愈伤组织诱导及植株再生的主要因子。     

抗苦马豆素抗体ELISA检测方法的建立

【目的】建立一种敏感性高、特异性强的抗苦马豆素(Swainsonine,SW)抗体的ELISA检测方法。【方法】用SW人工抗原(SW-BSA)免疫小鼠,制备抗SW血清,通过ELISA法进行血清抗SW抗体效价检测,比较以SW-OVA或SW为包被抗原的检测结果,分析包被抗原浓度、封闭剂等对测定结果的影响,以确定测定的最佳条件。【结果】以SW-OVA为包被抗原的检测结果明显优于以SW为包被抗原;抗苦马豆素抗体的最佳测定条件为:以1.0μg/mL SW-OVA作为包被抗原,于4℃包被过夜或37℃包被2 h,选用15 g/L的明胶作为封闭剂,酶标抗体的工作浓度为1∶1 500。【结论】建立的抗苦马豆素抗体ELISA检测方法,特异性强、稳定性高,为进一步研究苦马豆素人工抗原的免疫原性等奠定了基础。     

不同剂型吡虫啉对蚯蚓和斑马鱼的急性毒性评价

为了评价农药不同剂型对环境生物的毒性影响,利用人工土壤法和静态水鱼类毒性测试法研究了不同剂型吡虫啉对蚯蚓和斑马鱼的急性毒性效应。结果表明：35%吡虫啉悬浮剂、70%吡虫啉湿拌种剂、70%吡虫啉可湿性粉剂、600 g·L-1吡虫啉悬浮种衣剂对蚯蚓7 d LC50值与95%置信限（见括号）分别为：0.82（0.62～0.89）,6.44（5.17～7.83）,2.39（2.10～2.61）,9.65（7.79～11.77）a.i.mg·kg-1干土;14 d LC50值为0.77（0.59～0.83）,6.00（4.34～6.79）,2.12（1.62～2.33）,8.60（0.23～10.19）a.i.mg·kg-1干土。吡虫啉对斑马鱼的急性毒性结果表明：70%吡虫啉湿拌种剂对鱼的24、48、72、96 h的LC50值分别为24.3（16.3～28.8）,22.8（13.0～27.7）,20.1（4.0～27.4）,17.8（2.4～26.2）a.i.mg·L-1;70%吡虫啉可湿性粉剂对鱼不同处理时间的LC50值分别为46.4（41.6～48.0）,45.7（38.4～47.6）,45.2（36.2～47.2）,45.2（36.2～47.2）a.i.mg·L-1; 35%吡虫啉悬浮剂和600 g·L-1吡虫啉悬浮种衣剂对鱼不同处理时间LC50值均大于1.00×102 a.i.mg·L-1。依据《化学农药环境安全评价试验准则》,35%吡虫啉悬浮剂对蚯蚓的毒性为高毒,其他3种为中毒;4种剂型吡虫啉对斑马鱼的毒性均为低毒。     

加速溶剂提取-固相萃取净化-高效液相色谱法测定土壤中12种三嗪类除草剂的残留量

建立了加速溶剂（ASE）提取-固相萃取（SPE）净化-高效液相色谱（HPLC）同时检测土壤中12种三嗪类除草剂残留量的方法。土壤样品经过乙腈提取,氨基（NH2）固相萃取柱净化,高效液相色谱法-二极管阵列检测器（DAD）测定,外标法定量。12种三嗪类除草剂在0.02~2.00 mg·L-1范围内线性关系良好,相关系数在0.998 4~0.999 9之间,方法检出限在0.004~0.005 mg·kg-1之间。在0.02、0.04和0.10 mg·kg-1 3个浓度水平,平均添加回收率在75.2%~112.7     

硒酸盐和亚硒酸盐对7种不同基因型小麦种子萌发和幼苗生长的影响

选择全国7个主栽小麦品种,通过培养试验研究了外源添加硒酸盐以及亚硒酸盐对小麦的生物毒害作用,旨在确定小麦发芽阶段硒敏感指标并且为耐硒小麦品种的筛选提供依据。结果表明：添加低浓度外源硒（硒酸盐＜8 mg·L-1,亚硒酸盐＜20 mg·L-1）能够促进发芽阶段小麦的生长,高浓度硒（硒酸盐≥8 mg·L-1,亚硒酸盐≥20 mg·L-1）则表现为显著的抑制作用;同等硒浓度条件下（10 mg·L-1）,硒酸盐对小麦种子的毒害作用显著高于亚硒酸盐（P<0.05）。指标综合相关性模型与Bartlett球形检验结果表明     

丰花月季愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养

分别以丰花月季叶片、叶柄和茎段为外植体诱导出愈伤组织,并建立细胞悬浮系。结果表明,丰花月季叶片和茎段是诱导愈伤组织和进行细胞悬浮培养的理想外植体;诱导松散型愈伤组织的最佳激素浓度配比是NAA 4 mg·L-1+2,4-D 1 mg.L-1+BA 1 mg.L-1;细胞悬浮培养细胞最佳起始密度为1.5×104～3.0×104个.mL-1时;继代培养4～5代时,可得到稳定的悬浮细胞系。     

规模化猪场处理废水与化肥配施对小麦氮素吸收利用的影响

规模化猪场处理废水富含植物营养物质,应用于作物生产可实现减少化肥用量和保护环境的双赢。本研究通过田间试验,研究了越冬期不同用量养猪处理废水(30、60、90 m3·hm-2和120 m3·hm-2)和穗期施氮水平(0、30、60 m3·hm-2和90 m3·hm-2)对小麦氮素吸收利用的影响。结果表明,猪场处理废水对小麦具有较好的氮素养分供应作用,拔节期、抽穗期、成熟期叶片SPAD值、植株含氮率都随着污水施用量增加而提高。废水施用60 m3·hm-2以上穗期配施氮90 kg·hm-2的处理花后氮素转移效率、氮素收获指数、氮素籽粒生产效率明显下降。越冬期施用养猪场处理废水60～120 m3·hm-2替代穗期施氮30～60 kg·hm-2,可以满足不同时期小麦氮素营养的需求,并且有较高的氮素积累量和利用效率。     

犬干扰素-γ的稀释复性及活力测定

文章探讨了不同折叠促进剂、加样方式、温度、pH在稀释法复性条件下对重组犬IFN-γ体外折叠的复性影响。结果表明,0.5mol·L-1精氨酸、0.5mol·L-1盐酸胍、2.0mol·L-1尿素均能有效抑制复性过程中蛋白质的聚集,其中精氨酸的效果最好。在4℃、pH8.0、精氨酸浓度0.5mol·L-1,蛋白浓度0.15mg·mL-1及脉冲加样操作方式下,复性后重组犬IFN-γ的活性为1.35×104U·mL-1,比活为3.74×106U·mg-1。     

混浊型荔枝果汁饮料的加工工艺

应用正交试验设计方案确定荔枝果汁饮料的配方及复配稳定剂和护色剂的配方.结果表明,混浊型荔枝果汁饮料的最佳配方为:糖酸比45∶1、原汁含量30%、可溶性固形物含量9°Brix;复配稳定剂的配方为:60 mg.L-1羧甲基纤维素+20mg.L-1黄原胶+20 mg.L-1海藻酸钠;添加1000 mg.L-1柠檬酸和100 mg.L-1EDTA-Na2可有效抑制荔枝果汁饮料储藏过程中的褐变.     

马铃薯花药培养影响因素的研究

采用克新13号、克9723-20和讷16等8份马铃薯品种(系)为试验材料,采用L3(2 81×48)正交设计,对影响马铃薯花药褐化、愈伤组织诱导率和胚状体发生率等因素进行了系统研究。结果表明,马铃薯花药培养对基因型有很大的依赖性,讷16、克9723-20、俄8和波C等4份材料具有较强的花药培养再生能力;花药接种密度对褐化率影响较大,40个.瓶-1的花药接种密度比较合适;硝酸银浓度30 mg.L-1、活性炭浓度200 mg.L-1能有效地减轻花药的褐化程度。植物生长调节剂对愈伤组织诱导影响最大,NAA 0.5 mg.L-1、2,4-D 1.0 mg.L-1、KT 0.5 mg.L-1的配比适合多数材料愈伤组织的形成和胚状体的发生,以麦芽糖代替蔗糖可以提高愈伤组织的诱导率;培养基中加入马铃薯提取液能够促进胚状体的发生。     

高效液相色谱法测定香蕉防霜剂中三氯卡班的含量

采用高效液相色谱法,色谱条件为:Symmetry十八烷基键合硅胶柱,流动相:乙腈∶水=7∶3(V∶V),检测波长:265 nm,流速:1 mL.min-1。建立了测定香蕉防霜剂中三氯卡班含量的方法,线性方程为:Y=5.02×10-4X+1.27×10-3(Y为三氯卡班含量,X为色谱峰面积,R=0.9997),线性范围为0.8-15 mg.L-1,检测限0.2 mg.L-1,方法回收率为99.08%-99.32%(RSD=1.08%-2.03%,n=5)。可用于香蕉防霜剂和相关产品中三氯卡班定量测定。     

吡虫啉人工抗原的合成与鉴定

 以吡虫啉原药与β-巯基丙酸为起始原料，在碱性条件下反应，合成了半抗原{1-[6-(2-羧基乙硫基)-3-吡啶基甲基]-N-硝基亚咪唑烷-2-叉胺}。利用该半抗原与牛血清蛋白（BSA）和卵清白蛋白（OVA）偶联得到了人工抗原，经免疫动物后，获得了高效价的特异性多克隆抗体，抗血清效价为2.56×104。经酶联免疫反应（ELISA）测定，吡虫啉对抗体的抑制中浓度（IC50）为 20.7 ?g·L-1，最低检测限（IC20 ）为1.1 ?g·L-1，检测范围在1～1 000 ?g·L-1内线性关系较好，吡虫啉结构类似物交叉反应率均小于1.4%。     

墨兰杂交及F1代离体培养研究

以墨兰为研究对象,通过人工授粉,检测墨兰与春兰杂交后的坐果率和种子的离体萌发率;种子萌发后形成根状茎,筛选适宜根状茎增殖分化的培养基.结果表明:墨兰为母本的座果率为100%;果龄200~220 d采收适宜于离体播种;离体种子萌发后形成根状茎,其适宜的根状茎增殖分化培养基为1/2MS+6-BA2.0 mg·L-1+KT0.5 mg·L-1+NAA0.05 mg·L-1.     

重金属离子与消毒药物对澳洲龙纹斑幼鱼的急性毒性

为了获知重金属离子与消毒药物对澳洲龙纹斑幼鱼的急性毒性浓度,选用硫酸铜、硫酸锌、氯化镉、硝酸铅4种重金属化合物与二氧化氯、聚维酮碘、高锰酸钾、甲醛、食盐5种消毒药物,通过调配不同浓度,对澳洲龙纹斑幼鱼进行急性毒性试验,采用静水法测定9种消毒药物及重金属离子对澳洲龙纹斑幼鱼每隔24h的LC50(半数致死浓度)、LC100(绝对致死浓度)和SC(安全浓度)。结果表明,硫酸铜、硫酸锌、氯化镉、硝酸铅、二氧化氯、聚维酮碘、高锰酸钾、甲醛、食盐对澳洲龙纹斑幼鱼的安全质量浓度(SC)分别为0.122 3、0.571 3、0.020 0、0.461 2、5.030 0、0.532 4、0.958 9、6.960 0、1.584 0mg·L~(-1)。综合分析认为,4种重金属化合物与5种消毒药物对澳洲龙纹斑的急性毒性的大小顺序为:氯化镉硫酸铜硫酸锌聚维酮碘高锰酸钾硝酸铅食盐二氧化氯甲醛。     

抗噻菌灵单克隆抗体的制备及异源IC-ELISA检测方法的建立

为建立噻菌灵酶免疫检测方法,制备3种噻菌灵的半抗原(H1、H2和H3)。利用活泼酯法制备免疫抗原H1-BSA、H3-BSA和包被抗原H1-OVA、H2-OVA、H3-OVA。采用杂交瘤细胞融合方法获得4株稳定分泌抗噻菌灵单克隆抗体的细胞株,分别命名为1-4G9、1-6D3、3-1F9和3-5D4。采用间接竞争酶联免疫法(IC-ELISA),将上述4株抗体分别与3种包被抗原进行组合,从中选择出一个最优组合:H3-OVA/1-6D3。据此建立的异源IC-ELISA检测方法对噻菌灵的IC50为10.9μg.L-1,检测限(IC10)为2.2μg.L-1,与3种噻菌灵类似物的交叉反应率均小于0.1%;在自来水、苹果、梨的添加回收试验中,IC-ELISA法测定的回收率依次为95.9%～118.1%、90.0%～117.6%、74.9%～95.6%;HPLC法测定的回收率依次为92.7%～97.6%、98.9%～100.9%、91.6%～105.4%,IC-ELISA法与HPLC法测定结果基本一致。上述结果表明:抗噻菌灵单克隆抗体酶免疫检测具有很强的特异性和准确性。