影响奶牛活体采卵效果的主要因素

应用活体采卵(ovum pick-up,OPU)和体外受精技术可以充分挖掘良种母牛的繁殖潜力,获得大量遗传系谱明确的胚胎,从而缩短世代间隔,加速遗传进展(Gallietal.,2000)。国     

外源激素处理供体奶牛活体采卵生产胚胎的研究

选择6头3～6岁健康荷斯坦、空怀母奶牛随机分为3组,每组2头,分别用外源激素孕马血清促性腺激素（PMSG）、促卵泡素（FSH）、空白对照处理供体奶牛,4 d后应用B型超声波导引采卵, 以研究外源激素对活体采卵效率和体外生产胚胎的影响.试验结果表明：FSH组每头次平均可采卵泡12.07个,获可用卵母细胞5.57枚,与PMSG组比较差异显著（P＜0.05）,与对照比较差异极显著（P＜0.01）;PMSG组每头次平均可采卵泡为6.63个,获可用卵母细胞数2.96枚,与对照组比较差异不显著（P＞0.05）;各组活体采集的卵母细胞体外受精分裂率、囊胚率也无显著差异.表明可用外源激素处理供体奶牛活体采卵生产胚胎,但以FSH处理效果较好.     

兔和牛卵母细胞核移植的研究

通过显微操作，将１６～３２细胞期胚胎的单个卵裂球注入去核卵母细胞的卵周隙内，用适当电压（兔１６０Ｖ、牛１２０Ｖ）和脉冲时间的两次电脉冲诱导卵裂球与卵母细胞的融合；融合后的胚胎体外培养观察发育或移植到同步受体。体内成熟的免卵母细胞操作后存活率为９３．７％（１５０１／１６０２），融合率为９４．３％（１２８１／１３５９）。融合卵再用１６０Ｖ４０μｓ电脉冲电激一次，可显著提高其卵裂率（７５．９％比１８．２％，Ｐ＜０．０１）。用体外成熟的兔卵母细胞进行核移植，存活率和融合率分别为７８．５％（９５／１２１）和９５．７％（８８／９２），融合胚卵裂率为５１．４％（３７／７２）。初步表明体外成熟的兔卵母细胞可作为核移植的受体卵。此外，还尝试了用体外受精的牛胚胎和体外成熟的牛卵母细胞进行核移植，操作后存活率和融合率分别为９８．０％（５０／５１）和７５．５％（３７／４９），核移植胚的卵裂率为５４．１％（２０／３７）。     

利用自制简易采卵器采集牛卵子并体外受精生产胚胎的初步报道

本研究利用自制的简易牛活体采卵器盲采了8头次母乳牛,共收集到12枚卵子,其中10枚卵子卵质致密均匀、卵丘细胞2－3层,1枚卵子的卵丘细胞稍微扩散,1枚卵子卵质不致密均匀、无卵丘细胞,质量好的卵子比率为83．3％（10／12）,卵子回收数为1．5枚／头／次（12／8）。9枚卵子经体外受精后卵裂率77．8%(7/9);发育形成可移植的桑椹胚和囊胚总数为3个,占总卵母细胞数的比例为33．3％（3／9）,占卵裂数的比例为42．9％（3／7）,囊胚孵化率为50％91／2）。说明了在资金缺乏的国内条件下,可以自制简易、廉价的牛活体采卵器采集具有良好发育潜力牛卵子,通过体外受精技术生产具有遗传价值的牛胚胎,用于商业用途。     

活体成像技术及其在风险评估中的应用研究

动物活体成像技术是应用分子影像学方法,对活体状态下生物过程进行细胞和分子水平定性与定量研究的一项技术。本文基于化学荧光成像、生物发光成像、X光成像、同位素成像以及双模式成像等方面比较系统地介绍了该技术的研究,同时对该技术在农产品质量安全风险评估中可能的应用进行了分析。     

卵丘细胞在牛卵母细胞体外受精生产胚胎中的作用

牛体外胚胎生产是解决胚胎移植产业化胚胎来源的有效技术方法,其包括卵母细胞体成熟、体外受精和受精卵体外胚胎.而体外受精胚胎的质量是影响胚胎移植妊娠率与犊牛成活率的重要因素.体外受精过程中卵丘细胞分泌的一些重要物质(类固醇激素、细胞生长因子等),对牛卵母细胞体外成熟、体外受精以及受精卵体外发育都具有重要的促进作用.本文综合了近年来该领域的研究进展,着重分析了卵丘细胞对卵母细胞体外成熟,以及体外受精过程中卵丘细胞的分泌功能、质量和共培养体系对卵母细胞体外受精效率的影响.     

β－转换生长因子对牛体外受精卵体外发育的影响

本研究主要检测ＴＧＦ－β对牛早期胚胎体外发育和移植后的成活率的影响。在试验１和试验２，添加０．３～７．０ｎｇ／ｍＬ的ＴＧＦ－β至无论是复杂培养液还是各成分已知的简单培养液中，囊胚中内细胞团细胞都不同程度地增长，比对照组的囊胚多０．５～１．０倍；此外在含有３．０～５．０ｎｇ／ｍＬ的ＴＧＦ－β的培养液中的囊胚，其孵化率显著地高于对照组。在试验３中，添加３．０ｎｇ／ｍＬ的ＴＧＦ－β显著地促进与不同细胞共同培养的囊胚内细胞团的细胞增长，在颗粒细胞或输卵管细胞及其两者组合当中的单层细胞上的囊胚表现突出。在试验４中，用ＴＧＦ－β培养所获得的囊胚移植于受体母牛，约４５～９０ｄ将受体屠宰检查中发现，ＴＧＦ－β的囊胚成活率高于无ＴＧＦ－β的囊胚．试验结果表明，ＴＧＦ－β可促进体外发育的囊胚内细胞团的细胞增长以及提高囊胚移植后的成活率。     

卵丘细胞对牛卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

本试验探讨了卵母细胞周围不同类型的卵丘细胞对牛卵母细胞体外成熟、受精及其随后的胚胎发育的影响。卵母细胞周围一般都含有多层卵丘细胞。按卵丘细胞的层数及形态将卵母细胞大致分为５类：（１）无卵丘细胞；（２）有２～３层卵丘细胞；（３）有４～５层卵丘细胞；（４）有６层以上卵丘细胞；（５）异常者（即卵母细胞外周有较厚的透明胶状物而无正常卵丘细胞）。以上５种卵母细胞经体外成熟培养并受精后，其卵裂率（分别为：４８．８％，７０．９％，８４．４％，８２．１％，６８．２％）及囊胚发育率（分别为：０．０％，１７．８％，３３．３％，５４．６％，２５．０％）除异常者外均随着卵丘细胞层数的增加而提高（Ｐ＜０．０５）。对含有２～６层卵丘细胞的卵母细胞成熟后进行不同程度的剥离处理。然后按剥离程度分为３组：（１）全部剥离；（２）仅剩放射冠；（３）放射冠外有２～３层卵丘细胞。受精后３组间的卵裂率无显著差异（分别为：８１．７％，８５．２％，８４．４％）。而囊胚发育率（分别为：１６．８％，２３．８％，２３．４％），全部剥离组明显低于其他两组（Ｐ＜０．０５）。试验结果表明卵丘细胞对卵母细胞的体外成熟有促进作用，从而影响随后的受精及胚胎发育。     

牛去透明带卵体细胞核移植技术的应用研究

本研究通过进一步完善和简化“去透明带双半卵体细胞克隆牛技术”，探讨了生产应用的可能性。结果表明：(1)在卵母细胞体外成熟发育的特定阶段(17～20h间)采用分期分批显微盲吸法去核，去核率可高达95％以上；(2)一次同时将2枚去核后的半卵和1枚供核体细胞粘合在一起，可大大提高电击融合效率；(3)克隆重构胚在DMAP中激活时间从4h延长至16h仍有较高的卵裂率和囊胚率；(4)利用OPS法玻璃化冷冻保存牛体细胞克隆胚胎，解冻后胚胎可用率极显著地高于常规慢速冷冻法；(5)利用改进后的体细胞核移植程序工厂化批量生产牛体细胞克隆胚胎，获得88．2％(2575／2920)卵裂率、41．6％(1215／2920)囊胚率、75．4％(916／1215)冻胚率，冷冻胚胎移植后30d妊娠率为28．1％(48／171)。结果说明，本研究的牛去透明带双半卵体细胞核移植技术已可达到克隆胚胎批量生产应用的水平。     

奶牛乳铁蛋白基因部分序列的PCR—SSCP分析

本研究采用PCR－SSCP方法对奶牛乳铁蛋白基因的第7、12外显子和5′调控区部分序列进行多态性分析，发现该基因5′调控区一段长227bp的DNA片段上存在多态性。经过对突变纯合（BB）的两头奶牛个体进行测序分析后证明，位于起始位点上游CAAT框－926和－915位置分别具有G→A及T→G点突变，同时在－839和－811位置分别具有C和T单碱基的。等位基因A、B的频率分别为0.898和0.102。     

农网中瞬流与浪涌的研究

瞬流与浪涌严重污染农村电网系统,干扰其他电子设备的正常运行。本文分析了瞬流与浪涌产生原因及其特性,并对抚顺农电局所属网段的真实供电线路模拟图进行Simulink仿真。     

牛卵母细胞去核方法的研究

哺乳动物胚胎细胞核移植是willadsen 1986年在绵羊上首次采用成熟的卵母细胞做核受体并获得突破性成功.这一研究结果,奠定了哺乳动物核移植的基本技术路线.此后,哺乳动物细胞核移植的研究更加深入和细致.     

脱羰秋水仙碱诱导牛卵母细胞显核

用脱羰秋水仙碱(deme colcme,Deme)诱导牛卵母细胞显核.比较不同显核时间、Deme浓度以及极体形成等因素对牛卵母细胞显核的影响.结果显示:①0.5μg/mL Deme处理卵母细胞,诱导1 h时获得最高显核率(76.00%),高于0.5 h(61.18%)、1.5 h(64.10%)和2 h(63.46%)组;②不同浓度Deme处理成熟卵母细胞1 h,0.4和0.5μg/mL Deme组显核率较高,分别为75.24%和77.31%,显著高于0.3 μg/mL组(46.54%)与0.6 μg/mL(60.66%)组;③0.4 μg/mL Deme处理卵母细胞1 h,有极体组显核率(83.24%)与无极体组(77.54%)无显著性差异.研究表明,0.4 μg/mL Deme处理卵母细胞1 h能更好地诱导牛卵母细胞显核.     

牛肉中疯牛病特殊风险物质荧光RT-PCR检测方法的建立

本研究建立了检测牛肉中疯牛病特殊风险物质（主要是中枢神经组织）标记物GFAP mRNA的荧光RT-PCR检测技术。试验结果表明：该技术具有良好的种属特异性和组织特异性，只能从牛源和羊源的中枢神经组织中检测到GFAP，猪源和禽源检测结果为阴性，而且只有脑和脊髓等中枢神经组织产生阳性反应，其他内脏组织以及不同部位牛肉检测结果均为阴性；敏感性检测结果表明，该方法最低检测限达到0.001%以下；稳定性试验结果表明，100°C 加热处理30min对检测结果无明显影响，中枢神经组织在30°C以上室温可以稳定存放4天， 在4°C可以稳定冷藏2周，检测结果仍然为阳性。该结果显示，所建立的荧光RT-PCR技术用于牛肉中疯牛病特殊风险物质的检测具有特异性强、敏感性高、稳定性好及快速方便等优点，适合于在日常检测工作中推广使用。     

牛体外受精胚胎冷冻保存的研究

本研究在国内条件下对牛体外受精胚胎的冷冻保存进行了系统研究。胚胎在含 4 .0mol/ L乙二醇的 PBS中停留 15～ 2 0 min,对其随后孵化无明显影响 ( 72 .2 %比 82 .4 % ,P>0 .0 5) ;当乙二醇的浓度升高到 5.0 mol/ L和 6.0 mol/ L时 ,胚胎的孵化率明显下降 ( 2 5.0 %和3.2 % ,P<0 .0 1)。在胚胎的常规冷冻保存试验中 ,当冷冻液为 1.8mol/ L乙二醇加 0 .2 0 mol/ L蔗糖时 ,- 7℃植冰后缓慢降温到 - 30℃投液氮保存的胚胎冻后存活率 ( 86.3% )和孵化率 ( 72 .5% )明显高于 ( P<0 .0 5)缓慢降温到 - 2 5℃投液氮保存的胚胎冻后存活率 ( 57.1% )和孵化率( 35.7% ) ;当冷冻液不加蔗糖时 ,胚胎的冻后存活率明显下降 ( 60 .9% ,P<0 .0 5) ,且胚胎冻后无一孵化。在胚胎的超速冷冻保存试验中 (在 - 2 3℃平衡 30 min直接置液氮保存 ) ,冷冻在冷冻液为 3.0 mol/ L乙二醇加 0 .30 mol/ L蔗糖中的胚胎冻后存活率 ( 84 .0 % )和孵化率 ( 60 .6% )明显高于冷冻液为 2 .5mol/ L乙二醇加 0 .30 mol/ L蔗糖、 2 .0 mol/ L乙二醇加 0 .30 mol/ L蔗糖和2 .0 mol/ L乙二醇加 0 .2 3mol/ L蔗糖的胚胎冻后存活率 (分别为 59.0 % ,4 3.5%和 2 5.0 % ,P<0 .0 5)和孵化率 (分别为 4 5.5% ,30 .4 %和 0 % ,P<0 .0 5) ;7日龄胚胎的冻