狗枣猕猴桃离体培养和快速繁殖研究

[目的]研究狗枣猕猴桃离体培养和快速繁殖技术。[方法]以狗枣猕猴桃幼嫩带芽茎段、幼嫩叶片及叶柄作为外植体,研究其组织培养整个过程,建立快速高效的狗枣猕猴桃快繁体系。[结果]器官发生途径最适宜的外植体为幼嫩叶片。筛选出最适宜腋芽一步成苗的培养基配方为MS+1.25 mg/L 6-BA+0.250 mg/L NAA,腋芽萌发率达92.90%,通过对无菌苗进行生根诱导试验,筛选出最佳生根培养基为1/2MS+0.2 mg/L NAA,生根率100%,平均根数12.5条。[结论]该研究为狗枣猕猴桃产业化生产及优良种质资源的保存工作提供了理论和技术支撑。     

中华猕猴桃华优遗传转化系统建立研究

为了更好的利用遗传转化技术进行猕猴桃品种改良研究,以中华猕猴桃华优组培苗幼嫩叶片为材料, 研究了外植体分化不定芽再生途径所需的培养条件及转化效率提高方法。结果表明,在叶片不定芽诱导培养基中加 入浓度为0.75~1.0 mg/L 的TDZ 时,叶片愈伤发生率达85.7%~90.1%,不定芽发生率达41.8%~44.6%;在TDZ 1.0 mg/L 基础上,补充0.1~0.4 mg/L IAA 可使叶片愈伤发生率提高到96.7%~100%,不定芽发生率提高到67.4%~71.9 %; 在农杆菌侵染液与共培养基中同时加入75~100 滋mol/L 浓度的AS,可使GUS 瞬时表达率及卡那抗性芽发生率分别 提高至27.9%、14.5%;外植体被农杆菌侵染前,的预培养2~3 d有利于提高GUS 表达率与卡那抗性芽发生率。GUS 染色与PCR 扩增检测结果显示,Shiva A基因已转化至中华猕猴桃华优转基因植株。     

枸杞叶片再生植株体系的建立

以"宁杞2号"为试材,研究了激素浓度、叶片生理状态和光照条件等因素对叶片再生的影响,建立了枸杞叶片外植体的不定芽高频再生体系。研究结果表明:以顶部充分伸展的35d叶龄的无菌苗叶片为外植体,再生效果好。将此类叶片放在含1 0mg L6-BA和1 0mg LIBA的1 2MS分化培养基上,暗培养8d后转到光下培养,28d后可见到不定芽不经过或经过很少的愈伤组织阶段,直接从叶片上分化产生,出现的高峰期在接种后3545d,芽分化率高达90 0%以上。待小芽长至1～2cm后将其从叶片上剪下,转到生根培养基(1 2MS+0 6mg LNAA+0 2mg LIBA)上得到完整植株。该再生体系可作为基因转化的受体系统。     

哈密大枣叶片不定芽再生体系研究

建立哈密大枣叶片离体再生体系,为遗传转化奠定基础.采用哈密大枣叶片为外植体,研究基本培养基、激素浓度、暗培养时间、AgNO3等因素对离体叶片不定芽诱导的影响,并获得再生植株.MS、NN69、WPM三种培养基相比较,NN69更适合做为诱导愈伤组织的基本培养基;TDZ诱导叶片再生不定芽的效果显著优于 BA;再生培养基中添加1 mg/L AgNO3对不定芽的形成有显著的影响（P ＜0．05）;培养初期经过2周避光培养更有利于提高再生效率;采用10 mg/L维生素 C浸泡15 min可以防止褐化,并能提高不定芽再生率;培养基中添加聚乙烯吡咯烷酮（PVP）或者维生素C,不定芽再生率无显著提高（P ＞0．05）;培养基添加活性炭（AC）会抑制外植体的分化.叶片在 NN69＋1．0 mg/L TDZ＋0．20 mg/L IBA＋AgNO31．0 mg/L培养基上,暗培养2周后转入光照培养,出芽外植体转入 MS＋1 mg/L 6GBA＋0．20 mg/L IBA 不定芽再生效果最好.不定芽生长至3 cm 以上时,转至0．40 mg/L IBA的1/2MS培养基上进行诱导生根.     

3种抗生素对尾巨桉愈伤组织诱导及植株再生的影响

【目的】研究潮霉素、卡那霉素和头孢霉素对尾巨桉愈伤组织诱导、不定芽分化及生根的影响,确立抑制农杆菌生长的头孢霉素质量浓度。【方法】以尾巨桉无菌苗茎段为外植体,先后接种于添加不同质量浓度抗生素的愈伤组织诱导培养基、不定芽诱导培养基以及生根培养基上,统计愈伤组织诱导率、不定芽诱导率和不定芽生根率,观察头孢霉素对农杆菌生长的影响。【结果】(1)培养基中的潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,200 mg/L时,尾巨桉外植体的愈伤组织诱导率分别为6.7%,12.1%和26.7%;(2)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽分化受到明显抑制,不定芽诱导率分别仅有2.6%,10.2%和7.6%;(3)潮霉素、卡那霉素、头孢霉素的质量浓度分别为15,25,250 mg/L时,不定芽生根困难,生根率分别为10.2%,16.2%和10.1%;当头孢霉素质量浓度≥200 mg/L时,农杆菌生长被完全抑制。【结论】尾巨桉对不同抗生素的敏感性存在差异,在尾巨桉遗传转化过程中,抗性愈伤组织与不定芽诱导的潮霉素适宜质量浓度为10 mg/L,卡那霉素为20 mg/L;生根诱导适宜的潮霉素和卡那霉素的质量浓度分别为15 和25 mg/L;抑制农杆菌生长的头孢霉素较适宜的质量浓度为200 mg/L。     

猕猴桃良种‘杨氏金红50号’离体再生技术

为实现‘杨氏金红50号’猕猴桃组织培养工厂化育苗,以其组培苗的叶片、叶柄为外植体直接诱导不定芽,研究不同植物生长调节剂对不定芽诱导、生根诱导的影响,筛选出高效离体再生方式。结果表明：直接诱导叶片产生不定芽的最佳培养基为MS+2 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,平均褐化率为7.5%,平均发芽率为92.5%;直接诱导叶柄产生不定芽的最佳培养基为MS+2 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,平均发芽率为89.17%;生根培养的最佳培养基为1/2 MS+0.9 mg/L IBA,根扎在培养基内部,平均愈伤组织块直径为1.03 cm,平均生根率为100%,平均根长为3.19 cm,平均生根数量为12.58条,最适开盖炼苗时间为7 d。     

车前不定芽直接诱导及再生体系的建立

[目的]建立车前高效离体植株再生体系,为车前快速扩繁奠定基础。[方法]以车前无菌苗的下胚轴和子叶为外植体,以MS为基本培养基,研究了6-BA、NAA不同配比的培养基对车前下胚轴和子叶不定芽诱导的影响。[结果]MS培养基添加6-BA2 mg/L,5～7d的下胚轴不经过愈伤组织诱导阶段便可直接形成不定芽,不定芽诱导率为80%,每个外植体可产生7～8个不定芽。培养基中添加NAA促进不定根的分化,但影响不定芽的诱导。6-BA与NAA配合使用时,外植体易分化愈伤组织。在添加NAA的MS培养基上,再生苗诱导生根频率为100%。将再生植株移栽于盆土中,可获得100%存活率,且生长良好。[结论]6-BA促进车前下胚轴直接分化不定芽,而NAA则影响不定芽的诱导,在不定芽诱导培养基中应避免添加NAA。     

不同花生品种幼叶丛生芽诱导研究

为筛选高诱导率的花生品种并建立花生的高频再生体系,比较了22个花生品种在MS和1/2MS培养基中的萌发情况,同时以4d苗龄的花生幼叶为外植体,研究了花生幼叶丛生芽诱导率的品种差异性,以及羧苄青霉素(Carb)和头孢霉素(Cef)对花生丛生芽诱导的影响。结果表明:22个花生品种的种子在1/2MS培养基上萌发率均比在MS培养基上稍高。不同品种花生幼叶丛生芽诱导率差异明显,其中Hz006、Hz001、Hz012和Hz037幼叶外植体的丛生芽诱导率较高,均高于90%,Hz015最低,只有31.8%。添加500mg/L Carb对花生幼叶丛生芽分化无抑制作用,其中,Hz009添加500mg/L Carb后,丛生芽诱导率比不添加抗生素的CK提高13.5个百分点;Cef则对多数花生品种芽诱导率具有抑制作用,其中以Hz010最为明显,其丛生芽诱导率下降48.5个百分点。因此,花生种子预培养的适宜培养基为1/2MS,遗传转化时应选择Hz006、Hz001、Hz012和Hz037等高诱导率的花生品种,农杆菌介导花生转化时选择Carb抑菌比较合适。     

葡萄叶盘法基因转化中抗生素种类和浓度的筛选

本研究以优良无核葡萄品种莫利莎葡萄试管苗为试材,研究了卡那霉素（Kan）、潮霉素（Hyg）对葡萄继代苗生长和离体叶片再生的影响,以确定叶盘法基因转化的选择压和转化体的筛选浓度;同时研究了不同浓度的头孢霉素（Cef）和羧苄青霉素（Carb）对葡萄离体叶片再生的影响,以确定侵菌共培养后合适的抑菌抗生素种类和浓度。试验结果表明葡萄继代苗对Hyg的敏感性强于Kan,葡萄遗传转化更适合使用潮霉素磷酸转移酶基因作为选择标记。Hyg 3.0mg/L即达到继代苗致死浓度,可作为转化后抗性苗的筛选浓度,Hyg 0.8mg/L完全抑制叶片不定芽的分化,可作为叶盘法转化时抗性芽的选择压。葡萄叶盘法基因转化中抑制农杆菌生长的抗生素可选用Cef 300mg/L或Carb 400mg/L,但对不定芽的分化有抑制作用。     

银白杨叶片不定芽再生影响因素的研究

该文以银白杨无菌试管苗叶片为外植体 ,进行了不同培养基及不同因子对银白杨叶片不定芽诱导的研究 ,建立了叶片不定芽再生植株体系 ,为今后的遗传工程改良奠定了基础 .结果表明 :银白杨叶片不定芽诱导的最适培养基是MS附加 6 BA和NAA(5∶1) (即MS +6 BA 0 5mg L +NAA 0 1mg L +蔗糖 2 5 % +琼脂 0 5 5 % ,pH 5 8) ,不定芽再生率达 95 %以上 ;当 6 BA NAA <5时 ,叶片不定芽再生率和再生系数均降低 ,当 5≤ 6 BA NAA≤ 30时 ,随着比值的增大 ,不定芽再生率明显下降 ,不定芽再生系数也减少 ;叶片不定芽再生能力强的最佳取材位置是自试管苗顶端向下伸展叶的第 1～ 3片叶 ;生根试管植株叶片的不定芽再生能力强于无根试管植株 ;叶片不定芽诱导的最佳光照时间为每天 14h .     

花生上胚轴为外植体的植株再生及转化研究

以8 d龄花生无菌苗的上胚轴为外植体,进行植株再生和农杆菌介导遗传转化研究.结果表明,上胚轴能高效诱导花生植株再生,外植体在MS 3 mg/L TDZ 6 mg/L 6-BA 1.5 mg/L NAA培养基上能高效诱导不定芽分化,10 d时诱芽率达100%;不定芽接种到MS盐 B5维生素 3mg/L TDZ 0.01%酵母粉培养基中15 d诱导出大量丛生芽;MS 0.5 mg/L NAA培养基较适合诱导丛生芽生根,25 d时生根率达82%.筛选确定35 mg/L潮霉素浓度为转化筛选压,以含AtRD29Ap::GUS融合基因的根癌农杆菌侵染8 d龄上胚轴10 min,共培养3 d,经上述再生体系,以潮霉素筛选获得1株拟转化再生植株.     

牡丹传统繁殖与离体再生的研究进展

牡丹素有"花中之王"的美誉,观赏价值极高,其丹皮可入药,种子可榨油,因而具有重要的研究意义。通过对我国牡丹传统繁殖和离体再生的方法及其利弊进行综述,着重介绍了以种胚、芽、叶柄、叶片和花粉等为起始外植体的牡丹离体快繁殖研究现状,提出了目前该物种离体快繁中存在褐化和生根困难等问题,展望了牡丹传统繁殖和离体再生的发展方向。     

杨树叶片高效离体再生系统的构建

利用速生杨树(Populus.tomentosa Car)叶片为外植体建立离体培养体系,结果表明,叶脉处和叶柄处,极易发生不定芽;芽大多是从叶片上直接产生;培养基中BA浓度是影响不定芽形成的关键;BA浓度在05～2.0mg/L范围内均有不定芽发生,BA1.0mg/L与NAA0.05mg/L搭配有利于不定芽的形成,培养基中添加GA30.1～0.2mg/L可以提高不定芽的发生频率,增殖培养基采用MS BA0.5mg/L NAA0.05mg/L GA30.05mg/L,不仅能够快速增殖,而且芽苗粗壮,玻化率降低。生根过程采用过渡培养效果较好,ABT3生根粉的加入,使试管苗质量大为提高,在此基础上建立起杨树叶片离体再生系统,利用该体系能够获得高的芽苗再生频率,但是不同品种间略有差异。     

皇家夏天葡萄离体叶片再生体系的建立

叶片再生效率的高低直接影响目的基因转化的成功率,为建立稳定、高效的葡萄离体叶片不定芽再生体系,以优良无核葡萄品种皇家夏天为试材,取试管苗顶端1￣3叶位幼嫩叶片,研究了基本培养基成分、生长调节物质的种类和浓度、碳源等因素对叶片不定芽再生的影响。结果表明:供试WPM、1/2MS、B5和NN694种基本培养基,均可诱导其叶片再生不定芽,差异不显著;碳源以添加10￣20g/L的葡萄糖或食用白砂糖较好;培养基中附加3.0mg/L的6-BA与0.05mg/L的IAA配比利于出芽和成苗,应用TDZ虽出芽较多,但芽丛多畸形、出苗困难,不宜使用。     

甘菊下胚轴离体再生体系的建立

以甘菊下胚轴为外植体,通过器官发生途径诱导不定芽分化,建立了甘菊下胚轴高效再生体系,为甘菊遗传转化体系的建立奠定了基础。结果表明:将甘菊种子播种于MS培养基上,置于黑暗条件下培养7 d可以迅速获得大量下胚轴;下胚轴在MS+1.0 mg/L 2, 4-D+0.5 mg/L 6-BA的培养基上培养15 d后,愈伤组织形成率最高为8666%,愈伤组织呈淡黄色,大小一致;将愈伤组织转接到MS培养基中培养30 d左右即可分化不定芽,不定芽分化率达25.50%,平均每个外植体产生不定芽数目为4.25个;不定芽在添加0.1 mg/L NAA的1/2 MS培养基中培养15 d后,生根率达到100%。生根试管苗出瓶后,经过适宜培养,均可以获得健壮的开花植株。      

新疆两种纤维亚麻胚轴段高频萌芽诱导

【目的】通过建立新疆主栽的两个纤维亚麻品种(范妮和天鑫3号)高频率不定芽离体再生体系,为进一步筛选其体细胞耐盐突变体奠定基础。【方法】以不同消毒剂处理种子,以下胚轴段为外植体,运用不同植物生长调节剂组合诱导胚轴段再生不定芽。【结果】两种种子在10%的H_2O_2中处理10 min灭菌效果最好;范妮不定芽诱导最适宜培养基为:MS+BA 0.45 mg/L+IAA 0.3 mg~/L,不定芽诱导率达180%;天鑫3号不定芽诱导最适培养基为:MS+BA 0.6 mg/L+NAA 0.3 mg/L,不定芽的诱导率达到98%。【结论】不同的亚麻品种在下胚轴萌芽过程中对植物生长调节剂的配比和浓度的要求也不尽相同,探明了范妮和天鑫3号高频不定芽发生的最佳植物生长调节剂的组合和浓度。     

松果菊根外植体植株再生能力的评价

为了评价松果菊Echinacea purpurea L.根外植体的再生能力,将从松果菊无菌小苗得到的根外植体和叶片以及叶柄外植体接种到含有不同种类和浓度的细胞分裂素和生长素的培养基上,诱导不定芽的再生.结果表明,在多数情况下,根外植体的再生能力显著高于叶片,和叶柄类似.0.3 mg/L的苄基腺嘌呤和0.01 mg/L的萘乙酸是诱导根外植体不定芽再生最合适的激素种类和质量浓度组合.根外植体培养的不定芽再生频率为100%,每个根外植体得到再生芽1.75个.当把这些由根再生的不定芽从母体组织切开并转移培养到含有0.01 mg/L萘乙酸的培养基后,很容易生根并成为完整的植株.可见根是组培快繁松果菊理想的外植体材料.     

大白菜变异株嫩茎、幼叶愈伤组织培养和花、子房离体培养的研究

通过对一株大白菜变异株(图1)的嫩茎、幼叶进行愈伤组织培养和对变异花(图2,下文中简称为花)、膨大的子房(图3,花蕾展开后20 d,下文中简称为子房)进行离体培养,以期得到再生植株。试验结果表明,嫩茎、幼叶未能成功诱导出不定芽,花及子房较易诱导产生不定芽。     

丽格海棠组织培养外植体再生体系建立关键技术的研究

以丽格海棠的叶、茎、花茎、叶柄等营养器官作为外植体进行组织培养,着重研究丽格海棠的最佳外植体,最佳培养基配方及接种模式的关键技术。研究表明初代培养基本培养基为MS,激素配比为6-BA0 5mg/L+NAA0 1mg/L,培养30d可获得较多的不定芽。外植体分化能力的研究表明丽格海棠的不同类型外植体能力大小为:叶>茎>花茎>叶柄;从叶片的不同部位来看,叶中>叶侧>叶边缘;从不同叶龄来看,中等成熟叶>幼叶>完全成熟叶>芽叶。叶片的接种模式:反放比正放好。     

扶芳藤不定芽再生体系的建立

以扶芳藤无芽茎段和下胚轴为外植体,建立了稳定高效的不定芽再生体系。MS＋6-BA 1.5 mg/L＋IBA0.1 mg/L对诱导无芽茎段产生不定芽最为有利,再生率为82.6%。以下胚轴为外植体时,预培养50 d更有利于不定芽的诱导,中浓度的6-BA（1.3 mg/L和1.5 mg/L）对直接分化产生不定芽有利,培养基MS＋6-BA1.5 mg/L＋NAA0.1 mg/L上不定芽再生率最高,达到95.7%。以绵白糖和蔗糖为碳源均能达到较好的再生效果（80%以上）,以葡萄糖为碳源时再生率虽然高达100%,但玻璃化严重。生根培养基以1/2 MS＋IAA（0.7 mg/L）最好,生根率高达92.9%,经驯化后移栽成活率在90%以上。