一株水貂犬瘟热病毒的分离与鉴定

为寻找免疫失败的原因,有效防治犬瘟热的流行,对临床一水貂犬瘟热疑似病例,取其肝、脾、脑等组织研磨后接种Vero和BHK细胞分离病毒,并对分离毒株进行一系列鉴定。通过电镜观察,发现了大小约150 nm的副黏病毒样粒子。结果表明,分离株对鹅、鸡、小鼠、家兔、山羊、猪红细胞均无凝集性,该分离株的毒价TCID50为10-4.87;分离株病毒对乙醚、氯仿敏感,病毒的核酸型为RNA。经间接免疫荧光试验,接种病毒的BHK细胞出现特异性的亮绿色荧光。对分离株和对照毒株分别提取RNA进行RT-PCR扩增,最后得到与预期扩增片段(294 bp)相符的核酸电泳带,充分证明分离病毒为犬瘟热病毒。     

水貂细小病毒的分离鉴定

用F65细胞从疑似传统性肠炎的病死貂肠内容物中分离出一株病毒。经免疫电镜观察、细胞培养物核内包涵体检查以及血凝抑制试验证实为水貂细小病毒。     

水貂细小病毒的分离鉴定

用F_(6s)细胞从疑似传染性肠炎的病死貂肠内容物中分离出一株病毒。经免疫电镜观察、细胞培养物核内包涵体检查以及血凝抑制试验证实为水貂细小病毒。     

水貂犬瘟热病毒LD-1株的分离与鉴定

取山东某貂场疑似犬瘟热病毒（canine distemper virus,CDV）感染的水貂肝脏等组织病料,通过RT-PCR检测呈CDV阳性,且无水貂细小病毒存在,将病料接种原代CEF细胞、传代系Vero细胞和DF1细胞3种细胞进行病毒分离,通过优化细胞培养条件,最终在Vero细胞上传代培养成功,出现露珠状典型细胞病变（CPE）。分离毒应用RT-PCR、PCR产物测序、抗体中和试验（SN）、间接免疫荧光试验（IFA）及病毒包涵体检查等多种方法进行了CDV的鉴定,结果显示CDV阳性,表明分离到的病毒为水貂CDV,并将其命名为CDV LD-1株。     

水貂源犬瘟热病毒的分离及鉴定

为了研究当前犬瘟热的流行毒株,试验选取来自辽宁省大连市疑似犬瘟热发病死亡水貂的肺脏、脾脏、肾脏等组织,将研磨匀浆后的上清液接种于稳定表达犬瘟热SLAM受体的非洲猕猴肾细胞系-Vero/DogSLAM(VDS),通过病料的处理、VDS细胞的复苏与培养、病毒的分离与培养、病毒TCID_(50)的测定、反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法检测感染细胞中的病毒核酸,用序列比对的方法与已发表的犬瘟热病毒H蛋白(CDV-H)和SLAM受体结合区(RBS)序列进行比对分析,用CDV-H蛋白间接免疫荧光(IFA)的方法检测荧光蛋白表达。结果表明:在Vero/DogSLAM(VDS)细胞上接种病毒培养24 h后,80%～90%的VDS细胞出现合胞体病变(CPE),分离到的病毒TCID_(50)达到1×10~(5. 23)/(100μL),同时检测的CDV-H和SLAM受体结合区(RBS)序列比对分析一致,同源性为98%以上,在细胞质中可观察到抗CDV-H蛋白的特异性绿色荧光,RT-PCR成功扩增出H基因部分片段。说明本试验成功分离并鉴定出1株犬瘟热毒株,将其命名为LNDL(17) M4株。     

水貂肠炎细小病毒分离鉴定

从送检的疑似水貂病毒性肠炎的水貂粪便中分离出一株病毒,经形态学、理化特性、血清学和动物试验鉴定表明,分离的病毒为水貂肠炎细小病毒。     

一株水貂阿留申病细小病毒的分离与鉴定

本试验根据Genbank发表的水貂阿留申病毒（ADMV）的高度保守序列，设计了一对特异引ADV-P1／P2，建立ADV的PCR检测方法．应用对流免疫电泳和聚合酶链式反应2种方法对辽宁某水貂养殖场的水貂进行ADV检测。结果表明．PCR产物应用序列分离到一株ADV病毒（LN－1），水招群中流行阿留中病。应用建立的检测方法加强水貂群的检测，LN－1毒株的致病性需要进一步研究．     

蛋鸡源传染性法氏囊病病毒变异株的分离、鉴定及攻毒保护试验

为研究已免疫传染性法氏囊病(IBD)疫苗的蛋鸡群发生非典型IBD的原因,从2019年检测为传染性法氏囊病病毒(IBDV)阳性的病料中进行病毒分离,并对分离株进行生物学特性测定。结果显示,从5份阳性病料中分离到5株IBDV,5株分离株均不致死SPF鸡,剖检后仅发现法氏囊萎缩,无其它典型病变;对5株分离株VP2基因的遗传进化分析发现,5株IBDV均属于新型变异株分支,而且5株IBDV分离株均具有IBDV变异株的特征性氨基酸位点222T、249K、286I、318D,另外也具有新型变异株的独特氨基酸位点221K、252I和299S;攻毒保护试验表明,使用当前的IBD灭活疫苗对IBDV经典强毒株可提供100%保护,对2019年分离的IBDV流行株保护率为50%~80%。研究提示,IBDV新型变异株已在部分蛋鸡群中流行,而且当前疫苗不能对鸡群提供完全保护,有必要研发用来预防IBDV新型变异株感染的疫苗。     

水貂肠炎病毒株的分离和鉴定

从大连市流行水貂病毒性肠炎的貂场分离到两株病毒,经系统鉴定,系水貂肠炎病毒(MEV),分别命名为L金株和L_(12)株。L_(12)株的增殖性甚好,毒力强,免疫原性良好,生物学性状稳定,是最佳制苗和攻击用强毒株。     

水貂肠炎病毒株的分离和鉴定

从大连市流行水貂病毒性肠炎的貂场分离到两株病毒，经系统鉴定，系水貂肠炎病毒（MEV）、分别命名为L金株和L12株，L12株的增殖性甚好，毒力强，免疫原性良好，生物学性状稳定，是最佳制苗和攻击用强毒株。     

水貂细小病毒MEV-LT18株的分离鉴定及遗传进化分析

为了解河北地区水貂肠炎病毒(mink enteritis virus,MEV)的生物学特性,阐明其基因组与遗传进化等特征,采集疑似感染MEV致死貂的肠道组织,PCR鉴定为MEV阳性后,接种F81细胞进行病毒分离鉴定,通过电镜形态学观察、理化特性试验、血清学及分子生物学等试验方法进行验证。结果表明,成功鉴定并分离出1株MEV,命名为MEV-LT18株;电镜观察病毒粒子形态符合细小病毒形态特征;血凝试验发现该分离株不具有血凝性。对NS基因和VP2基因进行序列比对与遗传进化树分析,与Abashiri株进行氨基酸序列对比,结果显示在NS基因上有3处氨基酸发生非同义替换,分别为aa10(Val→Ile)、aa540(Val→Ala)、aa574(Val→Ile),在VP2基因上共有4处氨基酸发生非同义替换,分别为aa232(Ile→Val)、aa236(Thr→Ser)、aa300(Ala→Val)、aa411(Ala→Glu);系统进化树结果显示MEV-LT18株的NS基因和VP2基因分别与MEV-SDNH株和MEV-HLJ株亲缘关系最近,可能处于两者进化过程的过渡阶段。本研究对该地区水貂细小病毒的进化特征提供了一定的参考价值。     

一株貉源犬细小病毒CPV-CL01株的分离鉴定

为了探究河北某貉养殖场引起貉肠炎的病原,以便采取针对性防控措施,解决当前貉肠炎发病率高、死亡率高的问题.本研究对采集的病料进行了常规处理,离心取上清液,采用血凝试验、细胞接种、传代培养、分离毒PCR鉴定、序列分析、动物回归等方法进行试验研究,结果表明,貉肠炎病料上清液有血凝性,血凝值为1∶128,接种猫肾细胞(F81细...     

水貂犬瘟热病毒分离鉴定及其H基因序列分析

为了解山东地区水貂犬瘟热病毒(CDV)遗传变异特征,采集水貂养殖场的发病水貂病料,通过RT-PCR鉴定为CDV阳性,将阳性病料接种Vero/Dog SLAM细胞进行病毒分离,通过间接免疫荧光、电镜负染、测序等方法鉴定,得到4株犬瘟热病毒,分别命名为WD1株、WD2株、WX1株和WX2株。分离株H基因测序结果显示,WD1株、WD2株、WX1株均为Asia-Ⅰ型,其中WD1和WD2与近几年仅在水貂和狐狸养殖场流行的新犬瘟热毒株核苷酸和氨基酸序列同源性分别为97.5%~99.2%和97%~99%;WX-1型与国内犬源HL001株的同源性最高,核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.6%和99.5%;WX2与疫苗株同属于一个分支,与疫苗毒Lederle株核苷酸和氨基酸序列同源性高达99.5%和98.8%。结果表明,水貂养殖场存在多株犬瘟热病毒混合感染的情况,提醒养殖场应注意防控,该结果也为犬瘟热病毒分子流行病学积累了资料。     

犬瘟热病毒蓝狐株的分离鉴定

为了对狐犬瘟热的防治提供参考依据,试验通过观察接种分离病毒细胞的细胞病变(CPE)情况,结合反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、核苷酸序列同源性分析对从疑似犬瘟热死亡的蓝狐脾脏中分离出的病毒进行了鉴定。结果表明:该毒株可使培养细胞出现明显的细胞病变。提取感染细胞的总RNA进行RT-PCR,扩增出1 044 bp的融合蛋白基因片段,大小与预期值相符;分离毒株与GenBank中已发表的10株犬瘟热毒株核苷酸序列同源性为92.9%～97.1%,氨基酸序列同源性为96.3%～97.7%。说明分离株为犬瘟热病毒。     

大熊猫犬瘟热病毒LG株的分离鉴定

为获得大熊猫犬瘟热病毒株,采集死亡大熊猫的心脏、肺、肝病料,研磨并反复冻融后收集上清液接种Vero细胞,待出现细胞病变(CPE)后,收集病毒液。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定病毒分离株,测定病毒TCID_(50),动物回归试验测定其毒力。结果显示,盲传到第5代时,Vero细胞出现圆缩、聚集、脱落等病变;PCR扩增出287bp片段,与预期相符;测序结果显示,该毒株与已发表的CDV SD(14)11毒株(亚洲-Ⅰ型)的同源性为98%;毒株的TCID_(50)为10~(-5.2)/mL;幼犬感染分离毒株后出现体温升高、鼻头发干、拉稀、眼鼻分泌出水样分泌物等症状。本研究成功分离出大熊猫源犬瘟热病毒株。     

犬瘟热病毒水貂分离株F基因的克隆及原核表达

根据GenBank中登录的犬瘟热病毒F基因序列设计了1对引物，以从水貂犬瘟热病毒中提取的RNA为模板，扩增出一约1000bp的F基因片段。将PCR产物按相应的阅读框架克隆到原核表达载体pET-32a中，并将重组质粒转化E．coli BL21（DE3），用1．0mmol／L IPTG在30℃下诱导表达。结果显示，F基因的表达量约占细菌总蛋白的35％。SDS-PAGE电泳显示，表达产物的分子质量约为55ku，与预计大小相符；经Western-blotting试验进一步证实，该基因获得了正确表达。     

猪丹毒杆菌江西分离株的鉴定及小鼠攻毒试验分析

2012年5月,江西某养猪户中大仔猪突然暴发急性病例,表现为体温升高、体表出血发红,个别急性死亡。送检至江西农业大学兽医院,结果从心脏、肝脏、大脑分离得到3株细菌,分别命名为JXV-ErhA、JXV-ErhB、JXV-ErhC,经细菌培养、染色镜检及生化鉴定,判定均为猪丹毒杆菌。为确定其致病性,用18只小白鼠进行攻毒试验,     

猪细小病毒SX株的分离鉴定

从发生蓝耳病的猪场采集流产、死胎病料中分离出了一株病毒,适用传代细胞后,该病毒能够在ST细胞上生长并引起明显的呈拉网状和细胞脱落的细胞病变(CPE),能够凝集0.5%的豚鼠红细胞,经猪细小病毒阳性血清中和后不能引起细胞病变(CPE),也失去了血凝特性;用特异荧光抗体染色可见细胞核内出现特异性荧光.采用特异性PPV NS1基因的引物进行扩增,得到了大小约为2.18 kb的片段,测序并与猪细小病毒相应序列进行比较,同源性为99%以上,鉴定该病毒为猪细小病毒,命名为PPV-SX.说明目前有部分猪繁殖障碍是由猪细小病毒和PRRS共同感染而致.