高效液相色谱法同步测定甜叶菊提取物中7种绿原酸

为建立高效液相色谱法测定甜叶菊提取物中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、洋蓟素、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C7种绿原酸及其类似物的分析方法,本实验以超声提取法对样品进行前处理,以甲酸溶液-乙腈作为流动相,采用梯度淋洗和C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行各化合物分离.结果 显示:7种绿原酸及其类似物的...     

杜仲叶中绿原酸含量测定方法的建立

用紫外分光光度法与高效液相色谱法相结合,建立一种新的、简单快捷的杜仲液提取液绿原酸检测方法-紫外分光光度法直接测定杜仲叶提取液绿原酸含量。采用方法:(1)绘制绿原酸标准曲线:分别绘制紫外分光光度法、高效液相色谱法的绿原酸标准曲线并考察每种检测方法的线性关系;(2)研究两种检测方法是否存在关系:探索杜仲叶提取液中绿原酸吸光度值与对应峰面积是否存在关系。结果:(1)紫外分光光度法标准曲线方程:y=22.6442x-0.2039,r=0.9999(n=6)。绿原酸浓度在5~40μg/m L范围内呈良好线性关系;高效液相色谱法的标准曲线方程:y=0.0653x+0.6412,r=0.9994(n=6)。绿原酸浓度在5~40μg/m L范围内呈良好线性关系;(2)杜仲叶提取液中绿原酸吸光度值(紫外分光光度法)和对应峰面积(高效液相色谱法)存在关系,关系方程为:y=228.66x-14.538,r=0.9995(n=6)。结论:本试验建立了一种新的绿原酸检测方法-紫外分光光度法直接测定杜仲叶提取液绿原酸含量。     

正交试验法优选金银花中绿原酸水提醇沉工艺的研究

目的:优选金银花中绿原酸水提醇沉工艺。方法:采用正交试验法,以测定金银花中绿原酸提取率作为考核指标。结果:金银花中绿原酸水提醇沉工艺的最佳提取条件为不浸泡,加水(15 12)倍量,煎煮(1 1)h。结论:该试验绿原酸提取率高,稳定性好。     

绿原酸在家兔体内的药动学研究

建立了血浆中绿原酸的HPLC分析方法,比较了金银花三种注射液中绿原酸在家兔体内的药动学差异,旨在为研究金银花连翘药提供实验数据。将18只健康无伤的家兔随机分成三组,按0.5 mL/kg单次肌肉注射给药,HPLC同时测定不同时间点血浆中绿原酸浓度。用MCPKP程序计算动力学参数。健康家兔肌注金银花单提注射液(A),金银花、连翘混合提取注射液(B),金银花、连翘单提合并注射液(C)后,绿原酸在家兔体内的药动学过程均符合一级吸收二室模型。B、C注射液中绿原酸的Tmax、Tα/2、T1/2ka与A相比呈差异显著性,而Tβ/2差异不显著,表明金银花配伍连翘后能促进绿原酸在体内吸收分布,迅速达到血峰浓度,对消除半衰期的影响不大。B与C中绿原酸的药动学参数差异不显著,表明连翘与金银花配伍时,不管是混提还是单提后合并,对绿原酸在家兔体内的药动学特征无明显影响。     

绿原酸在奶山羊体内的药动学研究

为将绿原酸引入奶牛乳房炎的治疗,进行了绿原酸在奶山羊体内的药动学研究。本试验制备了奶山羊大肠杆菌性乳房炎病理模型,建立了反相高效液相色谱检测血清中绿原酸含量的方法,测定了静注、肌注绿原酸在健康奶山羊及乳房炎病理模型奶山羊体内的药动学参数,初步反映了绿原酸在奶山羊体内的动力学过程。经试验测定绿原酸在健康奶山羊体内,静注后呈二室开放模型,其药动学参数CO(μg/m L)为20.66±6.13,T1/2β(min)为7.27±1.19,CLB(L/kg·min-1)为0.27±0.34,AUC(mg/L·min-1)为81.83±14.87;肌注后呈一级吸收一室开放模型,其药动学参数Cmax(μg/m L)为0.40±0.11,AUC(mg/L·min-1)为41.54±17.16。绝对生物利用度平均为47。绿原酸在乳房炎奶山羊体内静注后呈二室开放模型,其药动学参数CO(μg/m L)为23.03±6.97,t1/2β(min)为9.01±4.16,AUC(mg/L·min)为96.68±16.93,CLB(L/kg·min-1)为0.10±0.02;肌注后呈一级吸收一室开放模型,其药动学参数Cmax(μg/m L)为0.48±0.37,AUC(mg/L·min)为38.02±23.69。绝对生物利用度平均为43%。     

绿原酸对FAdV-4的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响

试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4感染组均经尿囊腔接种0.2 mL ELD₅₀为1.36×10⁷拷贝的FAdV-4病毒,对照组注射等体积的生理盐水。用MTT法检测绿原酸的安全浓度(IC₅₀),计算每枚鸡胚接种绿原酸的含量;接种病毒后72 h后,剖检并无菌收集鸡胚肝脏进行病理观察,实时荧光定量PCR法检测病毒载量,ELISA法测定肝脏细胞因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及信号分子磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、核转录因子-κB(NF-κB)和NF-κBp65含量。MTT法测定结果表明,绿原酸对鸡胚成纤维细胞的IC₅₀为28.6 μg/mL,每枚鸡胚接种0.2 mL的绿原酸含量分别为858、429、214.5(≈215)、107.25(≈107)和53.125(≈53) μg。FAdV-4病毒接种72 h后,FAdV-4感染组鸡胚肝脏边缘钝圆、肿大,变脆,呈土黄色或黄色,甚至出现坏死;随着绿原酸浓度增加,绿原酸组鸡胚肝脏肿胀渐不明显,坏死灶和出血瘀点减少;肝脏内病毒明显增殖,载量为7.8 log₂拷贝/mg,107 μg绿原酸即可显著抑制FAdV-4在鸡胚肝脏中的增殖(P<0.05)。炎性细胞因子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加鸡胚肝脏中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量(P<0.01);53 μg绿原酸组IL-1β和TNF-α含量极显著增加(P<0.01),107 μg绿原酸组IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,107 μg绿原酸组IL-1β和TNF-α的含量均极显著降低(P<0.01),215和429 μg绿原酸组IL-6的含量显著降低(P<0.05),858 μg绿原酸组IL-6的含量极显著降低(P<0.01)。细胞信号分子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量(P<0.01);53 μg绿原酸组PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,53 μg绿原酸PI3K和NF-κBp65的含量均显著降低(P<0.05);215 μg绿原酸组NF-κB的含量显著降低(P<0.05),NF-κBp65的含量极显著降低(P<0.01);当绿原酸达429 μg时,PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均极显著降低(P<0.01)。本试验结果表明,绿原酸能够抑制FAdV-4的增殖,且剂量依赖性地抑制炎性因子和信号分子的表达,说明绿原酸可用于鸡抗病毒和炎性相关疾病的防控。     

不同水平绿原酸对肉兔生长性能、抗氧化性能和肝脏微观结构的影响

旨在研究绿原酸对肉兔生长性能、血清抗氧化、肝脏抗氧化与肝脏微观结构的影响。选择初始体重相近健康状况良好的断奶伊拉兔60只,随机分为5组,每组12只。对照组饲喂基础饲粮,抗生素组在基础饲粮中添加18.80 mg/kg杆菌肽锌和15.51 mg/kg喹烯酮,绿原酸组在基础饲粮中分别添加500、1 000、2 000 mg/kg绿原酸(简称为CGA500组、CGA1000组和CGA2000组),预试期7 d,正试期28 d。结果:与对照组相比,CGA2000组肉兔的末重和平均日增重均显著升高(P0.05)。各组肉兔肝脏器官指数无显著差异(P0.05)。与对照组相比,绿原酸组肉兔血清总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)水平均无显著差异(P0.05),其中CGA2000组T-AOC和SOD活性均有升高的趋势(0.05P0.1)。肝脏抗氧化能力中,对照组和抗生素组各指标差异不显著,CGA1000组T-AOC活性较抗生素组提高了20%,差异显著(P0.05),其他各组内无显著性差异(P0.05)。添加1 000～2 000 mg/kg绿原酸与对照组相比肝脏SOD和T-AOC活性均有增高趋势,MDA水平有下降趋势(0.05P0.1)。对照组肝细胞形态基本正常,绿原酸组与抗生素组肝脏组织被膜完整,肝细胞形态正常,未见明显病理变化。综上,添加绿原酸可以一定程度上提高肉兔的血清与肝脏的抗氧化能力,改善肉兔肝脏的结构形态,从而提高生长性能,添加剂量以2 000 mg/kg为宜。     

日粮中添加不同水平绿原酸对獭兔血清免疫指标的影响

研究旨在探讨日粮中添加不同水平绿原酸对獭兔血清免疫指标的影响。试验选取84只60日龄獭兔,随机分成7组,试验1组为对照组,饲喂基础日粮,试验2组为抗生素组,添加0.02%的抗生素,试验3～7组分别在基础日粮中添加0.03%、0.09%、0.15%、0.21%和0.27%的绿原酸。在试验第1天、第30天、第60天和第90天时,对血清白蛋白、免疫球蛋白G(IgG)、超氧化物歧化酶(SOD)活力、溶菌酶活性和金属硫蛋白(MT)含量进行测定。结果表明,绿原酸可以显著提高血清白蛋白、溶菌酶活性、SOD活力和MT含量,但对IgG含量无显著影响。研究说明,绿原酸具有一定的免疫调节活性,日粮中添加绿原酸可在一定程度上增强獭兔的免疫功能。     

绿原酸的生理功能及其在畜禽生产中的应用

绿原酸主要存在于金银花、山银花、杜仲叶和咖啡豆等天然植物中,属于苯丙烯酸酯类多酚物质,具有抗氧化、抗炎、抑菌、抗病毒及抗癌等功效。近年来研究发现,绿原酸对改善动物肠道健康、提高机体抗氧化能力具有积极影响,在畜禽生产中具有较大应用潜力。本文综述了绿原酸的主要生理功能及其可能的作用机理,并探讨了绿原酸作为畜禽饲料添加剂的应用前景,旨在为绿原酸作为新型饲料添加剂提供研究思路。     

橙皮苷、绿原酸对断奶仔猪生长、抗氧化和免疫机能的影响

选用(28+2)日龄断奶的三元杂交仔猪24头,按体质量和性别分成4个处理组,每个组3个重复.对照组为基础日粮组,试验组分别添加金霉素(250 mg/kg)、橙皮苷(300 mg/kg)、绿原酸(300 mg/kg),试验期4周.结果表明:(1)试验前期橙皮苷组日增重显著高于对照组(P<0.05),但与金霉素组、绿原酸组间差异不显著;且能极显著降低仔猪早期腹泻率(P<0.01).试验全期绿原酸促生长的效果优于对照组(P>0.05),但较金霉素相比仍有差距.(2)添加绿原酸提高了仔猪血浆中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性以及抑制羟自由基能力(P<0.05);橙皮苷组可显著降低血浆丙二醛(MDA)含量(P<0.05).(3)橙皮苷显著提高了仔猪血浆IgG、IgM含量(P<0.05).可见饲料中添加橙皮苷、绿原酸能改善仔猪机体清除自由基能力,增加机体抗氧化的能力,从而改善机体健康水平.     

日粮添加绿原酸对热应激小鼠睾丸抗氧化功能的影响

试验旨在探讨日粮添加不同剂量绿原酸对热应激小鼠睾丸指数、形态、抗氧化及炎症反应的影响。试验择取体重日龄相近的健康雄性小鼠30只,随机分为5组,分别饲喂基础日粮添加绿原酸0 mg/kg(对照组)、0 mg/kg(热应激组,HS)、250 mg/kg(HS+C250组)、500 mg/kg(HS+C500组)及1 000 mg/kg(HS+C1 000组)。饲养10 d后,除对照组外均进行高温处理,8 d后取样分析。结果表明：1)与对照组相比,热处理显著降低小鼠睾丸指数并显著增加生精细胞脱落比率(P<0.05);与HS组相比,日粮添加1 000 mg/kg绿原酸显著增加热应激小鼠睾丸指数并降低生精细胞脱落比率(P<0.05)。2)与HS组相比,日粮添加1 000 mg/kg绿原酸显著降低了热应激小鼠睾丸组织中MDA含量并提高GSH水平(P<0.05),但睾丸组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD)及总抗氧化能力(T-AOC)活性在HS、HS+C250、HS+C500及HS+C1 000组之间无显著差异(P>0.05)。3)与HS组相比,日粮添加1 000 mg/kg绿原...     

清营口服液质量检测方法的研究

为了建立清营口服液的质量检测方法,对制剂处方药味金银花、连翘、黄连、丹参、玄参、麦冬进行了薄层色谱(TLC)鉴别研究,并利用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中绿原酸的含量进行了测定确定了HPLC的测定条件。结果表明,TLC鉴别方法专属性强、斑点清晰、阴性对照无干扰;在8~160 μg/mL范围内绿原酸浓度与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率为97.86%,RSD为1.2%。以上结果表明,本研究所建立的检测方法简便、准确、专属性强、重复性好,可对清营口服液的质量进行有效检测。     

银翘天甘复方制剂中绿原酸的测定

本实验旨在探索建立银翘天甘复方制剂中绿原酸含量的检测方法.采用紫外分光光度法(UV),检测波长为327nm;薄层色谱法(TLC),展开剂为乙酸丁酯-甲酸-水(7.5:2.5:2.5).结果表明:绿原酸浓度为2.5～15μg/mL时有较好的线性关系,回归方程:A=0.1897C-0.0033,r=0.9997(n=5),回收率为99.4%,RSD为0.2%.薄层色谱能将复方制剂中的绿原酸很好的分离出来,样品中的绿原酸比移值(Rf值)=0.28±0.01(n=5),与对照品之间的Rf值基本一致.银翘天甘复方制荆中舍有绿原酸,且UV、TLC可作为银翘天甘复方制剂中绿原酸的定性分析检测方法.     

杜仲叶提取物对鲫鱼出血性病原菌抑菌试验的研究

试验测定了杜仲叶主要提取物绿原酸对水产养殖中常见病原菌的最小抑菌浓度及其对嗜水气单胞菌体内和体外抑菌效果。结果显示,绿原酸对水产养殖中的常见病原菌嗜水气单胞菌最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)均为250mg/l,哈维氏弧菌、苏伯利产气单胞菌的MIC与MBC均为500mg/l,肠型点状产气单胞菌的MIC与MBC分别为500、1000mg/l。药敏试验结果发现,绿原酸对嗜水气单胞菌抑菌圈的直径为(19.4±1.2)mm,氟哌酸的抑菌圈直径为(30.3±1.3)mm,土霉素为(28.5±2.5)mm。攻毒试验结果显示,在攻毒7d后,对照组死亡率为45%,饲料中添加0.5%绿原酸的试验组死亡率为10%,添加4%的试验组的死亡率为20%,添加1%和2%的试验组没有鱼死亡,表明饲料中添加1%的绿原酸能有效增强鱼体对嗜水气单胞菌的抵抗能力。试验结果说明,绿原酸对水产养殖中常见的病原菌具有良好的抑菌效果,对嗜水气单胞菌的抑菌效果与抗生素类抗菌药物相当,能够增强机体免疫力,对细菌性疾病具有较强的预防作用。     

超高效液相色谱-串联质谱法检测双黄连口服液中3种有效成分

应用超高效液相色谱-串联质谱技术,建立了同时测定双黄连口服液中3种有效成分(黄芩苷、绿原酸、连翘苷)的检测方法。采用BEH C18色谱柱,以0.2%甲酸-乙腈作为流动相进行梯度洗脱。在ESI负离子模式下,通过多反应监测模式进行测定。黄芩苷、绿原酸、连翘苷的线性范围分别为0.02~10μg/m L(r=0.9991)、0.02~10μg/m L(r=0.9998)、0.025~10μg/m L(r=0.9996)。定量限分别为0.02 mg/kg、0.02 mg/kg、0.025 mg/kg。3种成分的回收率为98%~101.7%,相对标准偏差均小于2.5%。该法快捷、准确、重复性好,可用于双黄连口服液中的3种有效成分含量的同时测定。     

银黄口服液含量测定方法的改进试验

为了建立同时测定银黄口服液中绿原酸和黄芩苷的高效液相色谱方法,采用Discovery C18柱(4.6×150 mm,5μm),以乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,进样量为10μL,检测波长327nm。结果目标峰分离度良好,绿原酸和黄芩苷的质量浓度与峰面积分别在1.00~20.05μg/mL(R~2=0.999 9)、10.07~201.55μg/mL(R~2=0.999 9)呈良好线性,平均加样回收率分别为99.90%和100.73%,标准偏差(RSD)均小于1.0%。表明此方法重复性好,专属性强,可准确、快速测定银黄口服液中的绿原酸和黄芩苷含量。     

异绿原酸生物活性及提取工艺研究进展

目前,绿原酸的诸多功效已被深入研究,其相关产品也相继问世,其在饲料添加剂行业中的应用也逐渐被认可,但其结构类似物——异绿原酸的功能研究与产品开发依旧较少。异绿原酸类化合物亦普遍存在于天然植物体内,其生物活性与绿原酸也大多类似,比如抗氧化、抗菌、抗病毒等。现将近年来异绿原酸的生物活性及提取工艺研究进展进行总结,以期为异绿原酸相关产品的研发提供帮助。     

超声法与闪式提取法提取刺五加中绿原酸的工艺对比研究

刺五加中绿原酸含量较高，具有潜在利用价值。本研究采用正交试验的方式比较两种方法（超声法和闪式提取法）提取绿原酸的提取效率。采用L9(34)分别设计超声法和闪式提取法的正交试验，建立高效液相色谱法测定刺五加中绿原酸的含量，以绿原酸的提取率作为评价指标。结果显示：超声法提取优于闪式提取法，最佳提取工艺为提取溶剂50%乙醇，提取时间1 h，料液比1∶5(g/mL)，超声功率250 W。该研究确定的提取方法和提取工艺可为刺五加在饲料领域的开发和利用提供参考。     

毛细管电泳同时测定苍耳类药材中7种酚酸类成分的含量

目的 建立高效毛细管电泳法(HPCE)同时测定苍耳类药材中绿原酸、咖啡酸、阿魏酸、异绿原酸A、异绿原酸C、新绿原酸和1,3-O-二咖啡酰奎宁酸含量的方法。方法 以50 mmol·L-1硼砂-水(p H 9.54)为缓冲溶液,未涂渍标准熔融石英毛细管(75μm×64.5 cm,有效长度56 cm)为分离通道,运行电压为25 k V,检测波长为326 nm,毛细管温度为25℃,压力进样为25 k Pa×5 s。结果 7种酚酸的浓度与峰面积的线性关系良好(r>0.999 4);加样回收率为99.85%~102.70%。用此法测定了苍耳类药材中7种酚酸的含量,得到满意结果。结论 该方法简单、准确,重复性较好,可用于苍耳类药材内在质量的评价和控制。     

响应面法优化水麻果中绿原酸提取工艺

本试验采用超声辅助-乙醇浸提法,对水麻果中绿原酸的提取工艺进行研究。通过四因素三水平的响应面法对水麻果中绿原酸的提取展开试验。结果表明：在乙醇浓度、液料比、超声时间、超声温度分别为65%、60:1(mL/g)、50 min、80℃条件下,水麻果中绿原酸的提取率最高,为1.79%,表明该工艺可行。本研究为水麻果这种野生食物资源的开发利用提供参考。