不同稀释液对禽流感H_5血清抗体检测结果的影响

本试验通过血液凝集抑制试验(HA)和血液凝集试验(HI)试验方法检测禽流感H5抗体,分别使用PBS液(0.01mol/L,p H7.2)和生理盐水作为稀释液,检测待测3份未知血清样品,1份已知阳性血清和1份已知阴性血清,每份样品做3个重复。经χ2分析发现,PBS液组和生理盐水组检测结果差异性不显著(P0.05)。试验结果证明,在日常监测中可以使用生理盐水替代PBS液作为稀释液通过血凝及血凝抑制试验检测禽流感H5血清抗体。     

抗原配制时间对禽流感血凝抑制试验结果的影响

血凝抑制试验(HI)是检测禽流感血清抗体常用的方法,广泛用于基层兽医实验室。在日常检测过程中,有的化验员会提前配制抗原液,方便点样后马上加入抗原液,以提高工作效率。笔者采用禽流感H5N1re-8相应试剂进行检测,探究抗原配制时间对于HI试验结果的影响。     

简述影响禽流感HA和HI试验准确性的因素

为了提高禽流感HA-HI试验的准确性,笔者分析了可能影响禽流感HA和HI试验结果的9个因素:阿氏液和PBS液的配制、血凝板、待检血清、1%鸡红细胞悬液、冻融标准抗原和阳性血清、正确使用多道移液器、平行对照、抗原返滴和结果判定,以期为禽流感HA-HI试验研究提供参考。     

用鸭红细胞悬液消除非特异性凝集因子对鸭禽流感HI试验的影响

禽流感自1878年在意大利首次发生以来,该病不断蔓延。近年来,在许多国家和地区出现暴发和流行,成为严重危害养禽业健康发展的一种主要家禽传染病。加强禽流感的监测是预防和控制禽流感的重要措施。目前,基层单位大都采用微量红细胞血凝抑制试验(简称HI试验)来检测家禽禽流感血清抗体。但在检测过程中,笔者发现依照国标的要求采用鸡红细胞悬液来检测水禽禽流感血清抗体时,常常存在非特异性凝集现象。本试验用鸭红细胞悬液替代鸡红细胞悬液来检测水禽禽流感血清HI抗体,探讨是否能消除非特异性凝集因子对鸭禽流感HI试验的影响,现报道如下。1…     

PBS液和阿氏液替代品在高致病性禽流感抗体监测中的应用初探

采用0.9%的氯化钠注射液替代PBS液和用1∶9的枸橼酸钠真空贮血管替代阿氏液进行高致病性禽流感抗体监测的血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验。结果发现,试验结果均有效。且采用这种替代品稳定、方便、省时、省工。     

血凝抑制试验中常见问题的分析

正血凝抑制试验(HI)是基层兽医实验室常用的检测禽流感及新城疫抗体效价的试验方法,步骤简单,但在操作中由于一些细节把控不到位,经常出现试验失败或结果判定不准确的问题。笔者就血凝抑制试验中常出现的问题总结如下。1基本操作步骤血凝抑制试验(HI)常分为三个阶段来完成,一是准备阶段,主要是准备PBS液、阿氏液及1%鸡红细胞悬液;二是血凝试验(HA)阶段,主要是配制4单位抗原;三是血凝抑制试验(HI)阶段,主要是测     

蛋鸭卵黄HI试验不同样品制备方法的比较

试验选用氯仿、PBST、PBS、生理盐水等不同试剂制备蛋鸭卵黄样品,在相同条件下进行禽流感HI试验,并与对应血清进行比对。结果表明,4种制备方式的卵黄HI抗体效价与血清HI抗体效价的差异均不显著,其中氯仿萃取法的样品性状最为稳定,且抗体效价与血清抗体效价差异最小,但操作繁琐;生理盐水直接稀释法结果较为准确,且简单易行,适合基层大样本检测。     

禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验易出现的误差分析

禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验是禽流感疫病监测和免疫抗体检测中最为常用的方法。近年来,随着动物疫病防控形势的需,禽流感疫病的日常监测、集中监测和免疫抗体检测工作量逐年增加,禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验成为当前基层兽医实验室检测禽流感的唯一技术方法,其试验结果的准确性直接影响着重大动物疫病防控策略的制定。通过开展基层兽医实验室比对试验发现,影响禽流感血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验的因素诸多,分析试验结果和关键操作步骤,找出试验误差,以便从试剂配制、器材准备和操作规范三方面完善试验操作。     

家禽卵黄抗体效价检测结果影响因素分析

为进一步规范卵黄HI抗体效价检测方法,试验从所用红细胞的种源性、稀释液种类以及抗原厂家3方面对HI抗体效价检测方法进行对比分析。研究发现,当卵黄样品抗体效价较高时使用异种家禽的红细胞对试验结果影响差异不显著(P0.05),样品抗体效价较低时使用异种家禽红细胞对试验结果有一定影响,但差异同样不显著(P0.05);选择1×PBS或者0.9%的生理盐水作为稀释液对试验结果影响不大(P0.05);使用不同厂家的抗原检测抗体效价禽流感H5亚型(Re-7株)、禽流感H7亚型(H7N9),差异极显著(P0.01)。卵黄抗体效价的检测,对稀释液的要求不高,但应尽量选择同种家禽的红细胞,抗体效价检测结果的对比分析应当选择正规厂家相同批次的抗原进行比较。     

不同家禽的红细胞悬液对禽流感病毒血凝抑制试验的影响

目前,血凝抑制试验(HI)被广泛用于检测各种家禽的禽流感抗体及禽流感病毒的鉴定,而多数实验室都是用鸡红细胞悬液来进行该试验。为了探讨不同家禽红细胞悬液对不同家禽血清抗体HI试验中非特异性凝集作用的影响,我们进行了本试验,现总结如下:一、材料与方法1.试验材料(1)待检血清:采取进行过禽流感H5亚型灭活油乳剂疫苗免疫的鸡、鸭鹅、鸽血各10份,分离血清备用。(2)抗原:禽流感H5诊断抗原,哈尔滨兽医研究所生产〔哈研生药中试字(2000)8818号,批号:20021225〕。(3)红细胞悬液:采取不具有特异性禽流感H5抗体的鸡、鸭、鹅、鸽的血按农业部标…     

沂南县某蛋鸡场新城疫、禽流感H5亚型（Re-5株）抗体水平的监测

新城疫、禽流感作为危害养禽业的主要传染病,通过其抗体水平监测,分析免疫状态,对鸡群合理饲养,确保养鸡业健康发展。本次检测沂南县某蛋鸡场血样50份,分离血清,通过微量血凝及血凝抑制试验(HI)进行新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体水平监测。试验结果表明,新城疫平均HI抗体效价为9.4 log 2,禽流感H5亚型(Re-5株)平均HI效价为7.64 log 2,说明整场免疫合格,但鸡群需要补种禽流感H5亚型二联油乳剂灭活苗。     

几种试验条件对鸡新城疫血凝和血凝抑制试验的影响

血凝抑制试验作为测定HI抗体水平,监测鸡群免疫状态,检查疫苗使用效果和制定免疫程序的合理依据已有许多报道。近年来,一些专家认为:磷酸盐对HI和HI试验有干扰作用,主张用生理盐水作稀释液。为此,本实验的目的在于观察不同pH值的生理盐水、磷酸盐缓冲液(PBS)和温度对HA和HI试验的影响,以及在同一条件下,对常量法和微量法符合情况的探讨。     

溶血样本对禽流感血凝抑制试验检测结果的影响

血凝抑制试验(HI)是检测禽流感血清抗体常用的方法,广泛用于基层兽医实验室。目前,在禽流感血凝抑制试验中常存在很多操作的不规范问题,从而影响试验的准确性,导致不正确结果的出现。在日常检测过程中经常遇到溶血样本,溶血是血清学试验检测中疑似的干扰物质。为探讨溶血样本是否会对检测结果产生影响,保证检测结果的可靠性,笔者采用禽流感H5N1re-6相应试剂对模拟溶血的鸡血清进行了检测。     

2017年盐田区禽流感预警监测结果与分析

一、样品采集与检测项目共进行了4次检测样品采集,共采集鸡喉拭子109份分别进行禽流感病毒分离,具体情况见表1。二、检测内容及结果将鸡喉拭子样品做10000xg,4℃,15min离心处理,经0.45μm过滤器过滤除菌,经尿囊腔接种9日龄SPF鸡胚,3枚/份,0.1ml/枚,置37℃孵化机孵化。弃24h内死亡的鸡胚,收集并检测24h至72h的鸡胚尿囊液,进行血凝试验(HA),对HA价达2log以上胚液,分别用H5亚型禽流感HI标准血清、H7亚型禽流感HI标准血清、H9亚型禽流感HI标准血清进行血凝抑制试验(HI)。对HA检测阳性样品鸡胚尿囊液进行RNA抽提,经禽流感(H5、H7、H9)特异性引物进行RT-PCR扩增,检测结果具体情况见表2。     

禽流感监测中HA和HI试验的应用

本文通过对一株禽流感病毒样本进行HA和HI试验,详细介绍HA和HI试验的具体步骤,旨在规范实验流程,为日常动物疫情监测提供参考。     

H5亚型禽流感疫苗对特禽及水禽的免疫效果观察

用H5N2亚型禽流感疫苗,分别免疫SPF鸡、乌鸡、珍珠鸡、贵妃鸡、火鸡、鸭及鹅,免疫后采血测定其HI抗体,观察我国现有的H5N2亚型禽流感疫苗对特禽及水禽的免疫效力.结果,免疫后3周,SPF鸡、乌鸡、珍珠鸡、贵妃鸡、火鸡、鸭及鹅的平均HI抗体滴度分别为2 7.2、2 7.6、2 4.3、2 4.83、2 4.6、2 6.2及2 5.3,乌鸡两次免疫,其中一次HI抗体为2 9.65.试验证明,SPF鸡、特禽及水禽用H5N2亚型禽流感疫苗免疫后,均能产生一定水平的HI抗体,但不同种类的家禽所产生的HI抗体滴度存在较大差异,以SPF鸡及乌鸡所产生的HI抗体滴度最高,而珍珠鸡、贵妃鸡及火鸡所产生的HI抗体滴度较低,水禽对H5N2亚型禽流感疫苗可产生一定水平的HI抗体.     

重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗的免疫效果评估与分析

为了客观评价重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗(H5N1Re-8株+H7N9Re-1株)的免疫效果及当前禽流感免疫程序的合理性,提高本地区禽流感防控工作水平,采用血凝抑制试验(HI)和酶联免疫吸附试验(ELISA)对某养殖场免疫的100羽蛋鸡进行不同时间段H5、H7亚型禽流感抗体水平检测。结果:在免疫后21～252 d,HI和ELISA检测禽流感H5亚型抗体合格率均为74%～100%;禽流感H7亚型HI检测抗体合格率为78%～100%,ELISA检测抗体合格率为76%～100%。结果表明:HI与ELISA抗体检测结果基本相符,在免疫后21～252 d免疫抗体合格率均达到国家规定≥70%的要求,重组禽流感H5+H7二价灭活疫苗免疫效果良好。     

一例肉鸡H9亚型禽流感与大肠杆菌混合感染的诊断报告

2013年11月,某禽业公司"公司+农户"肉鸡饲养模式有30%左右养殖户饲养的快大型黄羽肉鸡出现采食量下降、咳嗽和排粪异常、死亡率3%~5%。经实验室萤光RT-PCR检测,4/6样本H9亚型禽流感核酸呈阳性;鸡胚尿囊液HI试验H9亚型禽流感抗体6.67log2;细菌生化试验符合大肠杆菌特性;药敏试验表明对阿莫西林、氟苯尼考、新霉素、恩诺沙星、强力霉素、氨苄青霉素耐药,头孢喹肟中度敏感;结合流行病学诊断判定为H9亚型禽流感与大肠杆菌混合感染     

浅谈禽流感微量红细胞凝集抑制试验

禽流感微量红细胞凝集抑制试验(HI检测),因为其微量、快速、可靠,能够处理大量样品,并能在短时间内报告禽类血样的禽流感抗体滴度水平,因此成为出入境检验检疫部门基层实验室常用的方法。禽流感HI检测结果准确与否,对于出入境检验检疫部门及时掌握禽群的禽流感抗体水平,提高对辖区内注册活禽养殖场的禽流感疫病的监控,保证供港澳活禽顺利出口至关重要。笔者长期从事禽流感HI检测,积累了一些经验,与大家进行交流探讨:1不同效价工作抗原的影响由于禽流感微量红细胞凝集抑制试验的结果判定是以完全抑制4个HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI…     

水禽禽流感HI抗体检测方法的探讨

采用不同方法对78份白鸭免疫血清进行H5亚型禽流感血凝抑制试验(HI试验)。试验共分6个组:血清经20%的同源禽种红细胞或鸡红细胞进行吸附处理、或不经吸附处理,再用1%的同源禽种红细胞或鸡红细胞作为指示细胞进行试验。结果表明:进行鸭禽流感HI抗体检测时,可采用1%同源禽种红细胞悬液作指示细胞进行测定,并将结果降低1log2后作为测定结果。此方法可以有效排除血清中非特异性凝集因子对监测结果的影响,提高准确性。