重组酶聚合及其在禽病原酶扩增技术检测中的应用

重组酶聚合酶扩增技术是2006年由英国科学家研发的一种核酸恒温扩增技术,它不同于传统的PCR扩增,恒温条件下短时间内实现靶基因大量扩增,具有恒温、快速、便携、灵敏度高、特异性强和操作简单等优点,具有广阔的应用前景。本文综述了RPA技术的原理、反应条件优化、产物检测方式、与其他恒温技术相比的优势及在禽病病原检测中应用,旨在为禽病病原检测新技术、新方法的研制提供参考。     

重组酶聚合酶扩增技术及其在牛病原检测中的应用

重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是2006年由英国科学家研发的一种核酸恒温扩增技术,它不同于传统的PCR扩增,可在恒温条件下短时间内实现靶基因大量扩增,具有恒温、快速、便携、灵敏度高、特异性强、操作简单等优点,具有广阔的应用前景。本文综述了RPA技术的原理、引物设计与反应条件、产物检测方式及在牛病原检测中的应用等内容,旨在为牛病原检测新技术、新方法的研制提供参考。     

重组酶聚合酶扩增技术及其在猪病毒性腹泻病原基层现场检测中的应用

猪病毒性腹泻是对养猪业危害严重的一类疾病,导致仔猪大量死亡,损失惨重。重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是一种核酸恒温扩增技术,恒温条件下,短时间内实现靶基因大量扩增,可实现病原的现场快速检测,具有广阔的应用前景。文章综述了RPA技术的原理、产物检测方式及在猪病毒性腹泻病原检测中的应用,旨在为猪病毒性腹泻病原的基层现场检测提供参考。     

环介导恒温扩增技术在动物病原检测中的应用

环介导恒温扩增技术(LAMP)是一种新型核酸扩增技术,是依赖于靶目标上6个区域的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶Bst的作用,在60 ℃～65 ℃恒温条件下1 h之内即可完成的基因扩增技术.该技术虽然起步较晚,但发展迅速,目前在很多领域的研究和应用已经取得很大进展.论文从技术原理、引物设计、反应机制和特点等方面了介绍了环介导恒温扩增技术,并就该技术在动物细菌性病原微生物、病毒和寄生虫检测中的应用做了介绍.     

环介导等温扩增技术及其在病原检测中的应用

近年来,环介导等温扩增技术已经被开发利用.它采用能特异识别靶序列上6个位点的4条引物及一种具有链置换活性的DNA聚合酶,在恒温条件(60℃～65℃)下,不到1 h的时间里进行核酸扩增,其扩增效率可达到109～1010个数量级,具有特异性强、等温灵敏、操作简单、产物易检测等优点.环介导等温扩增法已经被用来快速检测动物病原(病毒、细菌、寄生虫).论文就环介导等温扩增法的原理、特点及其在动物病原快速检测中的应用等做了简要的综述.     

恒温扩增技术在动物疫病检测中的应用

恒温扩增技术是继PCR技术后发展起来的一门新型的体外核酸扩增技术。目前主要的恒温扩增技术有:滚环核酸扩增、环介导等温扩增、链替代扩增、依赖核酸序列扩增和解链酶扩增。它们都具有共同的特点:恒温、高效、特异、不需要特殊的仪器设备。本文就现阶段恒温扩增技术的特点及其在动物疫病检测中的应用情况和前景做一综述。     

兔病毒性出血症病毒巢式RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速的兔病毒性出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus,RHDV)病原检测方法,本研究根据GenBank上登录的RHDV VP60基因序列,设计合成内外2对引物,优化PCR反应条件,建立了检测RHDV的巢式RT-PCR方法。该方法对兔轮状病毒、仙台病毒、健康兔肝脏组织的扩增结果均为阴性;该方法第1次扩增的敏感性是10 ng,第2次扩增的敏感性是0.1 ng,第2次比第1次扩增的敏感性高100倍。建立的巢式RT-PCR方法具有特异性强、敏感性高、重复性好等优点,可以准确快速检测出极低含量的RHDV,将为兔病毒性出血症的病原检测及分子流行病学调查等提供一种快速、简单、高效、特异、灵敏的检测方法。     

探讨LAMP技术在畜牧与动物医学领域的研究热点和形势

正LAMP在恒温条件下进行扩增过程,规避PCR方法对温度升降的步骤,不仅不需使用昂贵的仪器设备,同时也大大缩短了反应时间,更加符合基层兽医站和临床一线对快速诊断的需要,在动物病原检测上具有广阔的应用前景。本文采用文献计量学分析发文量、期刊分布和关键词,通过共词矩阵分析文献中的关键词,呈现LAMP技术在我国畜牧与动物医学领域的研究特点和热点,为LAMP技术在该领域的应用提供参考。     

等温扩增技术的原理及其在病原检测中的应用

等温扩增技术(IAT)作为一种新型的体外核酸扩增技术,与PCR相比,该技术具有特异性强、敏感性高、简单便捷和成本低等优点。目前,等温扩增技术在病原检测方面得以应用,论文对环介导等温扩增(LAMP)、依赖解旋酶的等温扩增(HDA)、依赖核酸序列的等温扩增(NASBA)、链置换等温扩增(SDA)、交叉引物扩增(CPA)5种扩增技术的原理、特点及应用分别予以介绍,为该技术在病原检测的实际应用提供参考。     

LAMP技术在家禽腹泻性疾病检测中的应用

正快速检测致病微生物是控制疾病暴发的有效方法之一。目前,测病原体的传统方法耗时且劳动强度大,并且通常很容易失去最佳控制疾病的机会。因此,迫切需要一种快速检测疾病的方法。环介导等温扩增(LAMP)是近年来新建立的核酸恒温快速扩增技术。它具有高灵敏度,特异性,视觉检测和对仪器的低需求。它具有节省时间和精力等诸多优点,在分子诊断领域具有很大的潜力。目前,LAMP已被广泛用于检测各种动物病原微生物。本文主要综述了LAMP技术在家禽腹泻病原微生物检     

LAMP技术在鸭病原微生物检测中的应用

环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是近年来新出现的一种核酸扩增技术,具有敏感性高、特异性好、视觉直观检测、对仪器要求低、价格便宜等优点。目前,已被广泛应用于多种病原微生物的检测。本文综述了LAMP技术在9种鸭病原微生物检测中的应用,以供鸭病原微生物的快速检测借鉴。     

兔多杀性巴氏杆菌16S rRNA PCR检测方法的建立和应用

以兔多杀性巴氏杆菌的高度保守的16S rRNA为靶基因,参考已公布的多杀性巴氏杆菌的16SrRNA基因设计1对特异性引物,优化PCR反应条件,建立了兔多杀性巴氏杆菌PCR快速检测方法。该PCR方法的敏感性达到60cfu/mL,使用建立的PCR方法扩增兔多杀性巴氏杆菌标准株和分离株均能扩增出643bp的目的片段,扩增兔大肠杆菌、支气管败血波氏杆菌结果为阴性,证明本试验所建立的兔多杀性巴氏杆菌病原PCR检测方法敏感、特异、可靠。     

聚合酶螺旋反应（PSR）在病原微生物快速检测中的研究进展

聚合酶螺旋反应（polymerase spiral reaction,PSR）是基于环介导等温扩增技术（LAMP）和聚合酶链式反应（PCR）建立的一种新型恒温体外核酸扩增技术,其利用混合引物的设计思路和BstDNA聚合酶的链置换活性,实现了在体外等温条件下的核酸扩增,表现出灵敏性及特异性较PCR显著提高,引物设计较LAMP简单等优点,在保证检测灵敏、特异的同时,耗时相对较短,且操作简便,对仪器设备要求低,可肉眼直观判定结果,特别适用于公共卫生、动物健康、食品安全和生物防御等领域的快速诊断。本文介绍了PSR技术的原理及其在病原微生物检测方面的应用,以期为相关领域的检测技术研究提供参考。     

重组酶聚合酶扩增技术及其在病毒性猪病快速检测中的应用

重组酶聚合酶扩增技术是近年来建立起的一种新的核酸恒温扩增技术,具有操作简单、灵敏度高、特异性强、可在短时间内快速扩增出目的片段等优点,在动物疾病早期诊断、现地检测、进出口快速检疫等方面具有良好的应用前景。通过综述RPA技术及其在病毒性猪病快速检测中的最新应用研究进展,以期为更好地防控猪病提供参考。     

恒温扩增技术在动物疫病病原检测中应用现状及展望

介绍了链置换扩增技术、转录介导扩增技术、核酸序列依赖性扩增技术、环介导等温扩增技术、赖解旋酶恒温基因扩增技术、滚环扩增等六种恒温扩增核酸的技术的特点及其研究应用概况,并对恒温扩增技术的前景予以展望,以期为这些技术的应用提供参考。     

重组酶聚合酶扩增技术及其在病毒性猪病快速检测中的应用

重组酶聚合酶扩增(RPA)技术是近年来建立起来的一种新的核酸恒温扩增技术,具有操作简单、灵敏度高、特异性强、在短时间内快速扩增出目的片段等优点,在动物疾病早期诊断、现地检测、进出口快速检疫等方面具有良好的应用前景。文章综述了RPA技术及其在病毒性猪病快速检测中的最新应用研究进展,以期为更好地防控猪病提供参考。     

兔病毒性出血症快速检测方法的建立

兔病毒性出血症是兔的1种传播性极强、致死率极高的重要传染病,针对性地加强该病原的进出境监测将对动物疫病防控具有重要的意义。本研究使用软件分析设计RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR的引物和TaqMan探针,建立了兔病毒性出血症RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR方法,并测定其特异性和敏感性。试验结果显示,只有阳性参照样品的DNA出现扩增,其他对照样品均未见扩增产物,证实这些检测方法具有良好的特异性。对阳性样品DNA进行10倍梯度稀释,再分别用新建的2种方法进行试验,结果显示兔病毒性出血症RT-PCR检测的DNA下限量为100 pg,实时荧光定量RT-PCR的DNA下限量为100 fg,2种方法都具有较高的敏感性。新建的RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR方法互补应用,有助于缩短检疫周期、提高检测效率,为出入境口岸部门加强入境试验兔或其他不同用途兔的疫病检测提供技术保障。     

环介导等温扩增技术在动物病原检测中的应用

环介导等温扩增技术（LAMP）是一种依赖于自动循环的链置换技术,在等温条件下,不到1h就能扩增出10^9-10^10靶序列拷贝。该技术快速准确、操作简单、特异性强、灵敏度高,已经被用于动物病原微生物的快速检测。本文就LAMP法的反应原理、技术特点及其在动物病原快速检测中的应用作一综述。     

改良环介导等温扩增技术在病原检测中的应用

环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)是一种新型体外等温扩增特异核酸片段的技术,该技术具有高效、快速、特异、低廉、操作简单和结果可视化判定等优点,在基层现场检测中得到广泛应用。传统的LAMP技术已成功应用于病原微生物的快速检测、食品卫生检测、肿瘤检测、原位扩增和胚胎性别鉴定等方面。随着LAMP技术在样本处理、引物设计、特异性产物可视化检测方面日臻完善,改良后的LAMP技术将向多个方向发展,逐步应用于病原微生物活性检测、遗传病和传染病早期诊断等方面。文章就近年来改良LAMP技术原理、特点及在病原检测中的应用进行综述。     

副鸡禽杆菌LAMP检测方法的建立

应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了快速特异的检测副鸡禽杆菌的方法。利用在线引物设计软件Primer Explorer Version 4.0,针对副鸡禽杆菌16SRNA基因序列设计两组LAMP引物,并对副鸡禽杆菌特异性DNA的扩增条件进行优化,评价所建立LAMP的特异性和灵敏性。结果显示,优化后的反应条件为65℃恒温反应60min,内引物1.60pmol/μL、外引物0.20pmol/μL。该LAMP对13株副鸡禽杆菌均发生了扩增反应,而对大肠埃希菌、禽多杀性巴氏杆菌、空肠弯曲杆菌等14株其他病原微生物没有扩增反应;该LAMP最低检出量为0.17pg/反应,敏感性远高于常规PCR的56pg/反应。结果表明,所建立的副鸡禽杆菌LAMP具有快速、高效、方便操作等特点,适用于基层兽医部门进行副鸡禽杆菌的快速检测。