稀有人参皂苷微生物转化研究进展

人参皂苷是人参属植物中的重要活性成分,具有独特的生物活性和药用价值.目前稀有人参皂苷的含量很少,因此通过有效的方法将主要的人参皂苷转化为稀有人参皂苷非常有意义.本文主要综述了利用微生物转化技术将人参皂苷转化为稀有人参皂苷的最新研究进展,以期为稀有人参皂苷微生物转化法提供参考.     

微生物转化人参皂苷Rb1为稀有皂苷F2

从橙汁中分离到的菌株CZ2能使人参皂苷Rb1转化为稀有皂苷F2和gypenoside-XVII.最佳转化培养基含酵母提取粉1 g/L、氯化铵0.5 g/L、磷酸氢二钾1 g/L、磷酸二氢钾0.5 g/L、硫酸镁0.25 g/L,pH值为4.0.菌株CZ对人参皂苷Rb1的生物转化机理为Rb1→Gpy-XVII→F2.     

鞘氨醇单胞菌2-F2将人参主皂苷Re转化为人参稀有皂苷Rh1

从人参根系土壤中分离的菌株2-F2将人参主皂苷Re转化为稀有皂苷Rh1,其转化机理为Re→Rg1→Rh1.进行16S rRNA基因序列的系统发育分析,菌株2-F2与Sphingomonas asaccharolytica IFO15499T在同一分支上,同源性为99.5%.该菌株属于鞘氨醇单胞菌属.     

人参总皂苷和人参皂苷Rb1提取工艺的研究进展

阐述了人参总皂苷和人参皂苷Rb1的提取方法,包括醇提法、硅胶柱层析法、薄层层析法、高效液相色谱法、乙酰化衍生物分离法等方法,并对各自工艺的原理、使用进行了分析。     

稀有人参皂苷的生物转化及其降血糖活性研究进展

稀有人参皂苷对糖尿病及其并发症具有明确的治疗作用。文章综述了稀有人参皂苷在生物转化方面的研究进展,总结了其在抗糖尿病及并发症方面具有的改善胰岛素抵抗、保护胰岛β细胞、促进外周组织对葡萄糖的吸收、抗氧化和抗炎等多重作用,这些发现为实现稀有人参皂苷的高效转化并促进其在糖尿病治疗领域中的应用提供了参考。     

HPLC-ELSD法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量

采用高效液相-蒸发光散射检测器法(HPLC-ELSD)测定免疫佐剂——三七总皂苷中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1的含量,色谱柱Discovery C18(250 mm ×4.6 mm,5μm),采用梯度洗脱,流动相为水-乙腈,流速为1.0 mL/min,柱温30℃.结果显示,三七皂苷R1含量5.19％,人参皂苷Rb1含量32.19％,人参皂苷Rg1含量41.28％,3种皂苷含量之和为78.66％.说明该方法简便、快速、重现性好,可用于控制三七总皂苷的质量.     

酸水解法富集人参细胞稀有皂苷工艺研究

以干燥的人参细胞培养物为试验材料,分别采用不同种类的酸(苹果酸、柠檬酸和谷氨酸)进行处理,通过HPLC法测定不同种类的酸处理后人参细胞中稀有皂苷的含量,比较不同种类酸对富集人参细胞稀有皂苷含量的影响,以期为规模化生产富含稀有皂苷人参培养物提供一定的科学基础.结果表明,不同种类的酸水解人参细胞培养物富集的稀有皂苷含量从高...     

HPLC-MS/MS法检测三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb1的含量

利用HPLC-MS/MS法,建立测定三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb1含量的分析方法.方法:色谱柱为BDS HYPERSUL C18(150 mm×2.1 mm,5 μm)柱;流动相:乙腈-水(梯度洗脱);柱温:30 ℃;质谱条件:采用负离子多反应监测方法(MRM)测试;用于定量分析的对照品离子对为:人参皂苷Rb1 m/z 1107.9→783.7,内标物紫杉醇m/z 852.5→525.3.结果:人参皂苷Rb1标准曲线的线性范围为0.159～16.0 μg/mL,精密度和准确度等均符合样品分析的要求.结论:该法准确、灵敏、特异性强,适用于三七茎叶总皂苷及其制剂中人参皂苷Rb1浓度的检测.     

人参皂苷生物转化的研究进展

人参皂苷和稀有人参皂苷是人参属植物的主要活性成分,而稀有人参皂苷具有极高的药理活性,但是在人参属植物中的含量较低,因此通过生物转化得到稀有人参皂苷具有一定的研究价值。目前已有食品级微生物和各种糖苷酶、蜗牛酶等应用到人参皂苷的生物转化中。综述了人参皂苷的种类及功效、酶法和微生物转化法转化人参皂苷的工艺条件和产物,为稀有人参皂苷的大批量工业化生产提供有益的参考。     

微生物转化人参皂苷Rc和Rd的研究

人参皂苷尤其是稀有人参皂苷具有重要的药理活性,但在人参中含量极其稀少.通过运用薄层层析和高效液相色谱分析技术,对4种真菌转化人参皂苷Rc和Rd生成稀有皂苷的代谢作用进行分析,结果显示4种真菌均具有较强转化人参皂苷Rc和Rd的能力.其中,转化人参皂苷Rc的主要代谢途径推测为Rc→Mc1→Mc→CK→PPD;而在转化人参皂苷Rd的过程中可能存在2条代谢途径,其中主要途径推测为Rd→F2→CK→PPD,而另一条途径则由人参皂苷Rd直接转化为Rg3.试验结果为进一步通过优化试验条件积累代谢产物Rg3或CK,以及分离纯化相应的人参皂苷糖苷酶提供了良好基础.     

韩国人参品种连丰果实皂苷含量测定及其在蒸煮过程中的变化

分析韩国人参品种连丰果实皂苷含量在蒸煮过程中的变化。采用高效液相色谱法,以蒸发光散射检测器检测,色谱柱为PRONTOSIL NC(250mm×4.6mm),流速为0.8mL/min.人参果实中的总皂苷含量、PT系皂苷Re和Rg1随蒸煮次数的增多直线下降;1次蒸煮处理后PD系皂苷Rb1、Rc和Rd含量最多,但随着蒸煮次数的增多直线下降.蒸煮处理1次后PD系皂苷总含量较对照增加52%。     

人参及其主要活性成分对穴位区皮内微血管舒缩活动振幅的影响

为了证实人参治疗疾病的机理与其改善穴位区皮内微血管舒缩活动的相关性,试验采用离子导入仪和激光多普勒血流测定仪分析人参水煎剂及其有效成分人参皂苷Rb1,Re对穴位区皮内微血管舒缩活动的影响。结果表明：人参水煎液（10 mg/mL,干燥成粉后配成的浓度）及人参皂苷Rb1（10 mg/mL）、人参皂苷Re（10 mg/mL）均能显著提高穴位区微血管舒缩活动的振幅,而对其频率无显著性影响。人参治疗疾病的机理与其提高微血管舒缩活动的振幅具有密切关系。     

人参细胞悬浮培养中蔗糖和无机盐对皂苷生产的影响

通过研究人参细胞悬浮培养过程中培养基蔗糖浓度、MS浓度、氮浓度及硝态氮与铵态氮比例对细胞生长及皂苷合成的影响,发现在培养基中添加30 g/L蔗糖时,人参细胞合成皂苷能力最强,蔗糖浓度过低（10 g/L）或过高（70 g/L）均不利于细胞干重增加及皂苷积累.MS培养基浓度减半（0.5 MS）或维持原浓度（1.0 MS）,总氮浓度为30 mM时,有利于人参细胞皂苷的合成.MS培养基中硝态氮促进皂苷合成,单独使用硝态氮比与铵态氮混用或铵态氮单独使用更有利于皂苷的合成,皂苷生产量达到最高（158.9 mg/L）.     

海藻酸钠包埋的酵母菌转化人参皂苷Rb1的研究

为探索海藻酸钠包埋酵母菌转化人参皂苷Rb1的最佳条件,选用浓度为1.25×108个·mL-1的酵母菌菌悬液进行包埋,使用紫外分光光度计测定发酵液中人参皂苷Rb1含量变化计算生物转化率。通过单因素和正交设计试验分别考察海藻酸钠浓度、包埋时间、接种量和CaCl2浓度对所包埋的酵母菌转化人参皂苷的影响,最终获得了海藻酸钠包埋酵母菌转化人参皂苷Rb1的最佳条件为包埋时间45min,接种量7%,海藻酸钠浓度5%,CaCl2浓度10%。在该条件下,所包埋酵母菌对人参皂苷Rb1的最高生物转化率为31.51%,较以往未包埋的酵母菌转化人参皂苷Rb1的生物转化率提高约3%～5%。本研究首次利用海藻酸钠包埋酵母菌转化人参皂苷Rb1,解决了酵母菌种子不能重复使用等问题,简化了灭菌、菌种活化等步骤,为人参皂苷Rb1等苷类物质的高效生物转化提供了很好的思路和可借鉴的成功范例。     

超级稻DAD1基因正反义植物表达载体的构建及转化菊花的研究

将水稻DAD1基因插入Ti质粒,构建成该基因的正反义植物表达载体pWM-DAD1,pWM-antisense DAD1,转入根癌农杆菌LBA4404后,利用农杆菌介导的叶盘法转化菊花,经Hyg抗性筛选,并诱导愈伤组织和分化成苗,得到转基因菊花植株,通过PCR检测,从部分转基因植株中检测出预期的目的基因的存在.     

口蹄疫病毒P1全长基因表达载体的构建及对马铃薯的转化

将自主克隆的FMDV P1全长基因构建到植物表达栽体pB1131上,通过农杆茵介导法转入马铃薯,经PCR及Southem杂交等方法,证明了P1基因已整合到马铃薯染色体基因组中。这是国内外将FMDV P1全长基因转到马铃薯中的首次报道,为进一步利用转基因植物生产FMD疫苗和研制开发新型基因工程疫苗奠定了基础。     

玉米蛋白激酶基因ZmASK1表达载体的构建及遗传转化

为了研究玉米蛋白激酶基因ZmASK1的功能,把ZmASK1的cDNA连接到植物表达栽体pGreen0029中,通过农杆菌介导转入拟南芥中进行过量表达.PCR和Western-blot分析表明,ZmASK1已经转入到拟南芥中,并且在大多数转化植株中稳定表达.通过本试验,为以后对ZmASK1的功能验证工作打下基础.     

光受体和OsPIN1基因家族表达对水稻根负向光性的影响

为了探讨根尖光受体及生长素极性运输在水稻根负向光性中的作用,以超表达OsPIN1b转基因和野生型水稻(‘中花11’)种子根尖为材料,在根尖受单侧光照不同时间后,提取根尖RNA,反转录合成cDNA,通过半定量PCR检测3种光受体和OsPIN1基因家族4个基因表达差异,用激光共聚焦电子显微镜观察根尖融合表达蛋白OsPIN1b-GFP的定位,测量根负向光性弯曲程度。结果发现:用单侧光照射后,转基因与野生型水稻根尖光受体基因表达量均明显提高,OsPIN1基因家族4个基因表达量也得到提高,但转基因水稻的这几个基因的表达量较野生型高,在转基因水稻根尖发现细胞向光侧的OsPIN1b-GFP荧光强度明显弱于背光侧,水稻根负向光性角度也显著大于野生型。结果说明,水稻根尖受到单侧光照射后,提高了光受体和IAA极性输出载体基因的表达量,促进IAA极性运输,诱导根尖负向光性形成,由于转基因水稻的相关基因表达量高于野生型,所以根尖的负向光性弯曲角度明显大于野生型。     

Construction of Tobacco Bax Inhibitor-1 ihpRNA Gene Silencing Vector and Transformation into Agrobacterium tumefaciens EHA105

The plasmid pGSA1285 was first modified by substituting its GUS sequence with the Chalcone synthase intron fragment from vector pFGC5941 to get the plant silencing expression vector that contained Kanamycin resistance site and was named as pGSA2285. Using PCR-based amplification, two different restriction sites at both ends of tobacco Bax inhibitor-1 (NtBI-1) gene were created, respectively, which made the construction of ihpRNA gene silencing vector more efficiently. Then, NtBI-1 genes were inserted into M...