β-巯基乙醇对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响

在成熟培养液中添加不同浓度的β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol,β-ME),研究其对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响。结果表明,将卵母细胞置于100μmol/L的β-巯基乙醇的成熟培养液中进行体外培养,其成熟率、卵裂率和囊胚发育率均好于对照和其他处理,说明β-巯基乙醇的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞的体外成熟培养。     

不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响

[目的]探讨体外受精时不同精子浓度对精子穿入成熟卵母细胞及后续发育的影响。[方法]以冷冻-解冻精子为材料,以1×106、1×107个/ml 2种精子浓度进行体外受精,研究不同冷冻-解冻精子浓度对猪卵母细胞体外受精的影响。[结果]当精子浓度为1×106、1×107个/ml时,精子穿入率分别为83.18%、88.23%,单精入卵率分别为40.55%、9.02%,多精入卵率分别为59.45%、90.98%,平均每个卵母细胞中的精子数分别为2.03、3.26个,雄原核形成率分别为84.10%、86.40%,单精入卵率、多精入卵率有显著差异(P<0.05),其他指标无显著差异(P>0.05)。[结论]该研究为应用冷冻-解冻精子建立猪卵母细胞的体外生产系统提供了依据。     

EDTA-Na、半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟及克隆胚胎体外发育的影响

在成熟液中添加不同浓度的乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)、半胱氨酸,研究两者对延边黄牛卵母细胞体外成熟及克隆胚胎体外发育的影响。结果表明:(1)将卵母细胞置于100μmol/L的EDTA-Na的成熟液中培养,其成熟率和后期发育率均好于其他浓度组;(2)将卵母细胞置于0.56 mmol/L的半胱氨酸的成熟液中进行培养,成熟率和后期发育率均优于其他浓度组。试验结果证明此两种药的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞体外成熟培养。     

中国黄牛卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究

自屠宰场和临时屠宰的黄牛体内取卵巢2批共25次,黄牛97头,共得可用卵巢卵母细胞657个。用TCM—199加雌激素(FSH、LH、雌二醇—17β)培养于5％CO_2与95％空气的39℃的CO_2培养箱中,使第1批成熟率达到55.04％,第2批成熟率达到61.7％。第1批受精率达到61.97％,移于兔输卵管中发育到卵裂,移于羊输卵管中发育到晚期桑桩胚和早期囊胚。第2批废卵率为38.3％;第10次的体外培养发育率为23.8％;羊输卵管培养发育率达到91％。利用肝素(0.005mg/ml)使精子获能,授精时的精子浓度为25×10~6/ml。用小滴培养法(小滴量为50μl)加盖无菌石蜡培养。结果证明中国老龄黄牛的卵巢还是有利用价值的。     

利用冷冻的GV期卵母细胞制备延边黄牛核移植胚胎的研究

研究使用玻璃化冷冻、程序化冷冻和超快速冷冻3种方法冷冻延边黄牛的卵母细胞,确定适宜的延边黄牛核移植受体卵母细胞的冷冻方法。结果显示,3种冷冻方法处理的GV期卵母细胞在成熟率上相似,玻璃化冷冻法得到的卵母细胞形态正常率要高于程序化冷冻和超快速冷冻法(P<0.05),超快速冷冻法回收率最低。采用玻璃化冷冻法,核移植重组胚卵裂率明显高于程序化冷冻和超快速冷冻法(P<0.05),在融合率上,3种方法差异不显著。表明玻璃化冷冻方法对延边黄牛GV期卵母细胞冷冻效果优于程序化冷冻和超快速冷冻方法,是一种较适合延边黄牛核移植的卵母细胞冷冻方法。     

不同核成熟抑制剂对延边黄牛卵母细胞发育的影响

通过在卵母细胞成熟液中单独添加卵母细胞核成熟抑制剂--次黄嘌呤(hypoxanthine,HX)、异丁基甲基黄嘌呤(isobutylmethylxantihine,IBMX),研究其对卵母细胞卵丘扩散程度、极体形态以及后期发育的影响.结果表明:抑制剂(HX、IBMX)组卵母细胞卵丘扩散程度与对照组相比差异不显著(P>0.05),抑制剂组第一极体完整率显著高于对照组,但抑制剂组囊胚发育率与对照组相比差异不显著.最终结果提示,虽然HX和IBMX并未明显提高卵母细胞发育潜力,但仍为两种行之有效的核成熟抑制剂.     

哺乳动物卵泡卵母细胞的体外受精

对近年来哺乳动物受精机理及其体外受精的研究进展加以详细的概述，对精子获能及体外受精的适宜条件进行了探讨。     

基于均匀设计优化延边黄牛卵母细胞体外成熟及核移植后卵裂体系

［目的］应用均匀设计对延边黄牛卵母细胞体外成熟及核移植后的卵裂体系进行优化。［方法］用抽吸法回收卵母细胞,在不同条件下进行卵母细胞的体外成熟培养,然后对成熟卵母细胞进行核移植、融合、激活以及胚胎的体外培养。比较了在不同的卵巢保存温度、成熟培养时间以及卵泡直径大小对牛卵母细胞体外成熟率及卵裂率的影响。［结果］延边黄牛卵母细胞体外成熟的最佳条件为在卵巢保存温度为26或31℃的条件下,选取直径为8.0mm的卵母细胞成熟培养24h;卵母细胞核移植后卵裂的最佳条件为在卵巢保存温度为26℃的条件下,选取直径为6.0或8.0mm的卵母细胞培养24h。［结论］该结果对延边黄牛或其他种黄牛的育种及种群扩繁具有一定的参考意义。     

基于均匀设计优化延边黄牛卵母细胞体外成熟及核移植后卵裂体系

[目的]应用均匀设计对延边黄牛卯母细胞体外成熟及核移植后的卵裂体系进行优化。[方法]用抽吸法回收卵母细胞,在不同条件下进行卵母细胞的体外成熟培养,然后对成熟卵母细胞进行核移植、融合、激活以及胚胎的体外培养。采用均匀设计法,选用U10（10^3）均匀设计,比较了不同的卵巢保存温度、成熟培养时间以及卵泡直径大小对牛卵母细胞体外成熟率及卵裂率的影响。[结果]延边黄牛卵母细胞体外成熟的最佳条件为：在卵巢保存温度为26℃或31℃的条件下,选取直径为8．0mm的卯母细胞成熟培养24h;卵母细胞核移植后卵裂的最佳条件为：在卯巢保存温度为26℃的条件下,选取直径为6．0mm或8．0mm的卵母细胞培养24h。[结论]该结果对延边黄牛或其他种黄牛的育种及种群扩繁具有一定的参考意义。     

共培养对延边黄牛重组胚体外发育的影响

以新鲜的颗粒细胞作为供核细胞,以延边黄牛MⅡ期去核的卵母细胞作为受体进行体外培养.使用CR1aa培养液培养时卵裂率(83.7%)显著高于TCM-199液和mSOF液组(76.9%和77.4%),但在重组胚的早期发育各阶段都不存在统计学差异(p>0.05).以CR1aa和TCM-199为基础液时,输卵管上皮细胞和颗粒细胞共培养在卵裂率及重组胚的各阶段发育率都有显著提高(p<0.05).结果表明:CR1aa培养液适用于延边黄牛重组胚的体外培养,以CR1aa液 输卵管上皮细胞和TCM-199液 颗粒细胞共培养的形式效果更好(p<0.05).     

温度和乌苯苷对延边黄牛卵母细胞Na/K ATP酶活性的影响

通过研究温度和不同分级对延边黄牛卵母细胞Na/K ATP酶活性的影响,以及对其特异性抑制剂乌苯苷的敏感浓度,对延边黄牛卵母细胞Na/K ATP酶做初步探究,为进一步研究Na/K ATP酶活性与卵母细胞体外成熟的相关性打下良好基础.结果表明,延边黄牛卵母细胞的Na/K ATP酶活性在50℃达到最大值,在反应温度低于或高于50℃时酶的活性均降低,且在高于50℃时酶活急剧降低.乌苯苷浓度在2 mmol/L时孤雌卵母细胞完全停止卵裂.A级卵母细胞,裸卵和过成熟卵母细胞三者的Na/K ATP酶活性在统计学上差异不显著,但裸卵的Na/K ATP酶活性在数值上略高于其它两组.因此,延边黄牛卵母细胞的Na/K ATP酶的最适反应温度为50℃,其活力能够被2 mmol/L乌苯苷完全抑制,不同质量卵母细胞的Na/K ATP酶活性中,裸卵的Na/K ATP酶活性最高.     

延边黄牛心脏的形态学观察

采用常规解剖学方法,测量20头延边黄牛的心室壁厚度、各瓣膜口的周径、心脏外部各径;对延边黄牛心脏的外部形态、位置关系、内部构造、血管分布、肉柱等进行观察．结果表明,延边黄牛心脏的重量为（1．17±0．27）kg,位于胸腔的纵隔内,呈倒置的圆锥状,分为右心房、右心室、左心房、左心室4个腔,外部有心包包被．心脏周径（36．31±3．13）cm,长径（12．71±0．57）cm;心脏的外形可分为心耳,心室,心尖和心底,表面有4条沟（冠状沟,锥旁室间沟,窦下室间沟和中间沟）;左心室心内膜光滑、平整,肉柱较右心室内的少;左心室内有2个乳头肌,即前乳头肌和后乳头肌,均发达,为附着型,标本中见右心室内有3个乳头肌,分别为隔后乳头肌、隔前乳头肌和侧壁乳头肌．     

延边地区延边黄牛布鲁氏菌病的流行病学调查

[目的]为布鲁氏菌病的防制与治疗提供科学依据。[方法]通过虎红平板凝集试验对延边地区延边黄牛进行布鲁氏菌病检测。[结果]对采集到的304份牛血清进行检测,其中43份血清呈阳性,阳性率达14.47%。[结论]延边地区延边黄牛中布鲁氏菌病得到了较好控制。     

延边黄牛与韩延F1幼牛生长发育规律分析

通过对延边黄牛和韩延F1牛体重和体尺的对比,分析其生长发育规律,结果表明,韩延F1牛各月龄体重均高于延边黄牛;延边黄牛公、母牛体长的生长发育速度在8月龄左右快于体高,而韩延F1公、母牛的体长的生长发育在4月龄左右就已经快于体高;韩延F1公牛坐骨宽的发育也早于延边黄牛公牛,按性别来说,6月龄前母牛的后躯宽度(腰角宽、坐骨宽)生长强度较公牛大,6~18月龄公牛逐渐超过母牛.     

延边黄牛哺乳母牛优化日粮对瘤胃内环境的影响

选择无流产史、无疾病,个体大小相近的安装永久性瘤胃瘘管的2头延边黄牛,采用自身对照设计法进行延边黄牛哺乳母牛优化日粮对其瘤胃内环境参数影响的研究.结果表明,pH值均在正常范围之内;饲喂优化日粮组总VFA、乙酸、丙酸、丁酸浓度明显高于对照组,且差异极显著(P<0.01);优化日粮的添加使得乙酸/丙酸值变小,但瘤胃发酵还是属于乙酸发酵型,对乳脂率无负影响.     

延边黄牛胚胎移植及诱发双胎试验

为了研究适于延边黄牛的超数排卵及胚胎移植技术,选择2头供体牛和7头受体牛,进行了FSH-PG超数排卵和胚胎移植试验.结果表明,供体获得7枚可用胚胎,其中诱发双胎(人工授精后移植胚胎)3枚,单胚移植4枚,妊娠5头,移植率71.4%,诱发双胎率66.7%.     

延边黄牛体细胞克隆囊胚染色体标本制备的研究

[目的]探讨适合延边黄牛体细胞克隆胚胎染色体标本制备的方法。[方法]利用延边黄牛体细胞克隆产生的囊胚制备染色体标本,采用传统的细胞遗传学方法,将延边黄牛体细胞克隆囊胚分别在含有0.11、.0和10.0μg/ml浓度秋水仙素的CR1aa培养液中继续培养4或6 h,以使细胞分裂停留在中期。处理后的囊胚移入柠檬酸钠低渗液中,室温下处理15~20 min。将低渗后的单个胚胎转移至载玻片上,固定并用体积分数为25%的Giemsa溶液染色1~5 h,蒸馏水冲洗脱色,于室温干燥。显微镜下计算胚胎细胞数和有丝分裂指数以及标本制备质量。[结果]结果表明,1.0μg/ml秋水仙素处理6 h后的染色体标本制备效果较为理想。[结论]该研究为制备延边黄牛体细胞克隆囊胚染色体标本提供适宜的试验参数。     

延边黄牛体细胞克隆激活条件的研究

从激活前恢复时间、激活方式、激活培养时间等3个方面研究延边黄牛体细胞克隆的适宜激活条件.结果表明:延边黄牛体细胞克隆激活的理想条件为激活前恢复培养25~30 min,采用离子霉素(Ionomycin,Ion) 6-Dimethyaminopurin(6-DMAP)激活方式,激活培养4 h.     

延边黄牛体细胞克隆融合条件的研究

以体外成熟培养22-24h的延边黄牛卵母细胞作为受体,颗粒细胞为供核细胞,挤压法去核,注入供体颗粒细胞到卵黄周隙中,甘露醇融合液中施加20μs时长的电脉冲刺激使之融合,复合化学方法激活,从融合前恢复培养时间、融合电场强度、甘露醇浓度等3个方面研究延边黄牛体细胞克隆的适宜融合条件．结果表明,2．5h处理组的融合率（70．9％）显著高于4．0h处理组（58．2％,P〈0．05）,2．5h处理组重组胚的卵裂率（77．9％）显著高于其它4组（P〈O．05）,其它各组间差异不显著（P〉0．05）;融合电场强度1100V／cm处理组的融合率（86．4％）显著高于900V／cm处理组（67．1％）和1200V／cm处理组（75．2％,P〈O．05）,重组胚的卵裂率（84．6％）显著高于900V／cm处理组（69．6％,P〈O．05）,囊胚发育率（26．1％）显著高于900V／cm处理组（10．0％）,1200V／cm处理组（8．0％,P〈O．05）;不同浓度的甘露醇对融合率和重组胚的卵裂率没有明显的影响,但是0．28mol／L组囊胚发育率（25．3％）显著高于0．25mol／L组（15．3％,P〈0．05）．因此,适合延边黄牛体细胞克隆的融合条件为融合前恢复培养2．5h,0．28mol／L甘露醇作为融合液,电场强度1100V／cm．