甘薯sporamin蛋白对3T3-L1前脂肪细胞分化和增殖的影响

 【目的】探讨甘薯sporamin蛋白对3T3-L1前脂肪细胞分化与增殖的影响,为开发预防和治疗肥胖、糖尿病的保健食品提供理论依据。【方法】采用硫酸铵沉淀、离子交换、凝胶过滤层析的方法对‘55-2’甘薯中的sporamin蛋白进行分离纯化。然后,以黄连素为阳性对照,用不同浓度sporamin（0、0.025、0.125、0.250、0.500、1.000 mg?ml-1）处理3T3-L1前脂肪细胞。采用油红O染色和比色定量检测细胞内脂肪生成及细胞分化程度,以MTT法检测细胞的增殖。【结果】经离子交换、凝胶层析可纯化出高纯度的sporamin蛋白A和B（相对分子量分别为31 kD和22 kD）。与空白相比,用不同浓度的sporamin蛋白处理后,3T3-L1前脂肪细胞的分化受到明显抑制。当sporamin蛋白浓度增至0.500 mg?ml-1时,脂滴生成量明显减少,洗脱液吸光度值降至最低为0.35（P＜0.05）。此外,高浓度的sporamin蛋白能有效地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖,且随着处理时间延长抑制效果更加明显(P＜0.05).【结论】甘薯sporamin蛋白能抑制3T3-L1前脂肪细胞的分化和增殖,具有潜在的减肥作用。     

蛔虫体腔液对3T3-L1细胞分化和凋亡的作用

为了探讨蛔虫体腔液(Ascaris body cavity fluid,ABF)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化过程的作用,揭示ABF对机体脂类代谢的影响.本试验采用半定量聚合酶链式反应技术(RT-PCR)检测前脂肪细胞分化相关基因过氧化物酶体增殖剂活化受体γ(Peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)、GAPDH mRNA的表达;流式细胞技术(FCM)检测ABF对3T3-L1细胞凋亡的影响.结果表明:1 000μg/mL的ABF明显降低前脂肪细胞分化相关基因PPARγ mRNA的相对表达,与对照相比,差异极显著(P＜0.01).在3T3-L1分化过程中加入1 000 μg/mL ABF可增加细胞的凋亡.表明一定浓度的ABF对3T3-L1前脂肪细胞分化具有明显的抑制作用,并且能够诱导3T3-L1前脂肪细胞分化过程中的细胞凋亡,提示ABF能够抑制前脂肪细胞转化为脂肪细胞,可能具有调控脂类代谢以及控制高脂血症相关疾病的潜力.     

血管紧张素II对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

为探讨血管紧张素II（angiotensin II,AngII）对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,采用鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,并用油红O染色法和还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸（nicotinamide-adenine dinuceotid,NADH）氧化速率法检测了3T3-L1脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的累积和甘油磷酸脱氢酶（glycerol phosphatedehydrogenase,GPDH）的活性。结果表明,100 nmol/L的AngII可显著增大3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胞浆脂质累积和GPDH活性（P〈0.01）,外源性AngII可促进3T3-L1前脂肪细胞的分化,增加脂肪细胞中脂类合成和储存。     

血管紧张素Ⅱ对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响

为探讨血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AngⅡ)对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响,采用鸡尾酒法诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,并用油红O染色法和还原型烟酰胺嘌呤二核苷酸(nicotinamide-adenine dinuceotid,NADH)氧化速率法检测了3T3-L1脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的累积和甘油磷酸脱氢酶(glycerol phosphatedehydrogenase,GPDH)的活性.结果表明,100 nmol/L的AngⅡ可显著增大3T3-L1前脂肪细胞分化过程中胞浆脂质累积和GPDH活性(P＜0.01),外源性AngⅡ可促进3T3-L1前脂肪细胞的分化,增加脂肪细胞中脂类合成和储存.     

共轭亚油酸对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响

共轭亚油酸（CLA）是一类具有多种生物学功能的同分异构体的总称。采用细胞计数、油红O染色提取法确定CLA对大鼠前体脂肪细胞增殖与分化的影响。结果表明,在前体脂肪细胞期,各浓度组CLA均抑制前体脂肪细胞的增殖,其作用呈时间与剂量依赖的方式;在成熟脂肪细胞期,CLA可明显降低细胞内脂肪含量,CLA对脂肪细胞生脂的抑制作用亦呈剂量依赖的方式。由此说明,CLA可通过减少脂肪细胞数目及降低细胞内脂类含量来抑制脂肪细胞生脂。     

青钱柳低聚糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化及相关基因表达的影响

探讨青钱柳低聚糖(Cyclocarya paliurus oligosaccharide,CPO)对3T3-L1脂肪细胞增殖分化及相关基因表达的影响。采用水提醇的方法得到青钱柳初多糖,经D301-R大孔吸附树脂和DEAE纤维素阴离子交换树脂分离纯化,收集CPO作用于3T3-L1前脂肪细胞,并采用Q-PCR测定相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomes proliferator-activated receptorγ,PPARγ)和CAAT/增强子结合蛋白α(CAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达。结果表明:CPO含有2个组分,其重均分子量分别为3 842 Da和1 481 Da;CPO在低浓度时能促进脂肪细胞的增殖,高浓度时能抑制脂肪细胞的增殖;对脂肪细胞分化的影响较小。CPO可抑制PPARγ和C/EBPαmRNA表达,与对照组比较差异有极显著性意义(P0.01)。表明高浓度的CPO抑制脂肪细胞增殖分化水平,其机制可能与抑制PPARγ和C/EBPαmRNA表达有关。     

瘦素对鸡原代前体脂肪细胞增殖分化的影响

【目的】探究不同浓度瘦素对鸡原代前体脂肪细胞增殖分化的影响。【方法】以12日龄科宝肉鸡腹部脂肪为材料进行原代前体脂肪细胞培养,细胞铺板24 h后,试验组细胞以添加了0、50、200、800 ng/m L瘦素的培养基进行培养,每隔24 h换一次液,至72 h。采用CCK8法绘制对照组和瘦素处理组细胞的生长曲线,油红O提取比色法测定脂肪含量变化,Real-time PCR方法检测前体脂肪细胞分化过程中关键基因PPARγ和SREBP1c的表达。【结果】CCK8法与油红O提取比色法表明,0~800 ng/m L瘦素对鸡前体脂肪细胞的增殖分化无显著影响(P0.05),Real-time PCR结果表明不同浓度的瘦素处理对前体脂肪细胞内脂肪分化关键基因PPARγ和SREBP1c的表达无显著影响(P0.05)。【结论】本试验证明0~800 ng/m L瘦素对鸡前脂肪细胞的增殖和分化无影响。     

松辽黑猪前体脂肪细胞分离及诱导分化

为建立松辽黑猪前体脂肪细胞分化体系,了解其增殖规律及相关的脂肪标志基因在细胞分化过程中的相对表达。选用7日龄松辽黑猪,用Ⅰ型胶原酶消化脂肪组织得到前体脂肪细胞,传代后进行形态学观察并绘制生长曲线,利用传统"鸡尾酒"法进行诱导分化,油红O对分化后的细胞进行染色,判断分化效果,提取总RNA,对成脂标志基因进行相对表达量分析。结果表明:分离获得的松辽黑猪原代前体脂肪细胞可贴壁生长,形似成纤维细胞,细胞生长曲线符合细胞生长规律,近似"S"形;诱导分化后的细胞具有成熟脂肪细胞的典型特征,细胞内聚集大量脂滴;诱导后第10天,细胞内甘油三酯含量极显著提高;成脂标志基因PPARγ、C/EBPα在分化后的细胞中相对表达量极显著升高(P<0.01),而FoxO1在分化前相对表达量最高,第5天表达量与第0天相比极显著下降(P<0.01),但第10天的表达量极显著高于第5天(P<0.01),且第10天表达量与第0天无显著差异(P>0.05)。试验建立了松辽黑猪前体脂肪细胞的分离体系,为进一步研究松辽黑猪脂肪沉积与代谢机制以及改善肉质提供了依据。     

猪OLR1基因对肌内前脂肪细胞分化的影响

研究氧化型低密度脂蛋白受体1(oxidized low-density lipoprotein receptor1,OLR1)基因在猪前脂肪细胞分化过程中的作用,为深入研究OLR1基因在脂肪沉积中的功能奠定基础。根据GenBank中猪OLR1基因序列(登录号:NM₂13805),构建OLR1基因过表达载体OLR1-pcDNA3.1,同时合成干扰OLR1表达的siRNA。从恩施黑猪背最长肌中分离前脂肪细胞,分别将OLR1-pcDNA3.1和OLR1-siRNA转染前脂肪细胞,并对细胞进行诱导分化,至第6天,通过油红O染色、甘油三酯含量测定和荧光定量PCR检测OLR1基因对前脂肪细胞分化的影响。结果显示,OLR1过表达组脂滴明显多于对照组,甘油三酯含量显著(P<0.05)增加,成脂分化标志基因PPARγ的表达量极显著(P<0.01)升高、C/EBPα和FAS的表达量显著(P<0.05)升高;干扰OLR1后,细胞内脂滴减少,甘油三酯含量显著(P<0.05)下降,成脂分化标志基因PPARγ的表达量极显著(P<0.01)下降,C/EBPα和FA...     

芦笋提取物抗氧化和抑制3T3-L1前脂肪细胞分化活性研究

目的 研究芦笋提取物的抗氧化能力和抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的活性。方法 采用乙醇回流提取,通过酸碱处理,制备得到芦笋提取物;利用紫外分光光度法测定提取物中的酚酸含量（以没食子酸计）;采用DPPH法测定提取物清除自由基的活性;通过CCK8法及油红O染色法分别检测芦笋提取物对3T3-L1前脂肪细胞存活率及分化率的影响。结果 芦笋提取物中以没食子酸计的酚酸含量为0.5308 mg/mg;测得提取物清除自由基活性强弱与剂量成正相关,当其浓度达到2 mg/mL时,其对DPPH的清除率可达89.68%;在10~200μg/mL的测定浓度范围内,提取物对3T3-L1细胞生存率无明显影响,对3T3-L1细胞的分化有明显抑制作用,且呈剂量依赖性。结论 芦笋提取物具有较好清除自由基的活性,且活性强弱呈剂量依赖关系;芦笋提取物具有抑制前脂肪细胞分化的能力,且随剂量升高而增大。     

儿茶素单体对3T3-L1细胞损伤的保护与修复作用

探讨了4种儿茶素单体对Na2S2O4诱导的3T3-L1细胞缺氧损伤和H2O2诱导的细胞氧化损伤的保护与修复作用。体外培养3T3-L1细胞,利用Na2S2O4诱导细胞缺氧损伤和H2O2诱导细胞氧化损伤,采用先加入诱导剂后加入儿茶素单体和先加入儿茶素单体后加入诱导剂两种处理方式,MTT法检测3T3-L1细胞存活率的变化。结果表明,先加入诱导剂可严重损伤3T3-L1细胞,再加入4种儿茶素单体均能对3T3-L1细胞进行修复,显著地提高细胞的存活率;而先加入4种儿茶素单体再加入诱导剂,细胞受损程度则显著降低,表明4种儿茶素单体对3T3-L1细胞缺氧或氧化损伤都具有较好的保护与修复作用。     

L-Gln对大鼠前体脂肪细胞的影响

设置养分贮存损失状态不同的4类培养液,分别添加一定浓度梯度的L-谷氨酰胺(L-G lu tam ine,L-G ln)培养大鼠前体脂肪细胞。通过形态学观察、M TT比色、油红O染色提取法,比较各组细胞形态及增殖与分化的效果。结果表明,添加0 mm o l/L L-G ln的新鲜培养液和配制后4℃冷藏20 d,再添加0.685 mm o l/L L-G ln的培养液,均较利于前体脂肪细胞的增殖与分化;配制后4℃冷藏90 d的培养液,对前体脂肪细胞培养效果较差,添加L-G ln也不能使培养效果得到改善。另外,启封后的M 199和胎牛血清(F eta l C a lf Serum,FCS)分别冷藏不宜超过90 d。说明及时满足培养液中L-G ln的需求量,可使前体脂肪细胞达到较好的增殖与分化状态。     

红景天提取物对3T3-L1脂肪细胞增殖及细胞分化的影响

[目的]应用3T3-L1前脂肪细胞株,分析红景天提取物(Rhodiola rosea L.herb extract,RRLHE)对3T3-L1细胞增殖和分化的作用。[方法]使用油红O染色法对红景天提取物干预分化的细胞进行评估并定量分析脂肪细胞分化程度。通过逆转录多聚酶联反应(RTPCR)来检测脂肪细胞分化相关基因过氧化物体增殖剂活化受体γ(PPARγ)、CAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)mRNA的表达。[结果]红景天提取物能显著抑制3T3-L1细胞增殖和向成熟脂肪细胞分化,另外,红景天提取物能显著提高3T3-L1前脂肪细胞的葡萄糖摄取和利用率,红景天提取物明显抑制PPARγ、C/EBPαmRNA表达,与对照组比较,差异显著(P0.01)。[结论]红景天提取物对3T3-L1细胞增殖和分化均有抑制作用,并能提高3T3-L1前脂肪细胞的葡萄糖摄取和利用率,其影响机制与钝化PPARγ、C/EBP-αmRNA的表达有关系。     

盐酸法舒地尔对C3H10T1/2细胞增殖与 成脂分化的影响

【目的】探讨Rho分子信号通路阻断剂盐酸法舒地尔(HA1077)对C3H10T1/2细胞体外增殖及成脂分化的影响。【方法】体外培养C3H10T1/2细胞株,用HA1077浓度梯度培养液(0(对照组),20,40,60,80,100μmol/L)对其进行处理,通过MTT比色法和油红O染色法分别检测C3H10T1/2细胞的增殖和分化情况。【结果】HA1077对C3H10T1/2细胞的体外增殖有一定的抑制作用,且呈现出一定的浓度依赖性。但HA1077可提高C3H10T1/2细胞的成脂分化效率,也呈浓度依赖性;且当HA1077浓度大于60μmol/L后,细胞成脂分化率与对照组差异极显著(P<0.01)。【结论】HA1077可抑制C3H10T1/2细胞的增殖,但同时可以促进其成脂分化。     

The Differentiation-and Proliferation-Inhibitory Effects of Sporamin from Sweet Potato in 3T3-L1 Preadipocytes

The aim of this study was to investigate the effect of different concentrations of sporamin on the differentiation and proliferation of 3T3-LI preadipocytes, providing the theoretical basis for the development of food to treat obesity and diabetes, The isolation and purification of sporamin from sweet potato species 55-2 were performed by ammonium sulphate precipitation in combination with ion-exchange and gel filtration chromatography. With berberine as a positive control, different concentrations ofsporamin （0.000, 0.125, 0.025, 0.250, 0.500, and 1.000 mg·mL^-1 were used to treat 3T3-L1 preadipocytes. Intracellular fat accumulation and the degree of adipogenesis were quantified using Oil Red O staining and colorimetry, Preadipocytes differentiation was measured by 3（4,5-dimethylthiazolyl-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide （MTT） spectrophotometric assay. Two sporamin proteins, which were separated into sporamin A （31 kD） and sporamin B （22 kD）, could be purified by ion-exchange and gel filtration chromatography. After being treated by different concentrations of sporamin, the differentiation of 3T3-L1 preadipocytes was significantly inhibited, compared with the positive control. When the sporamin solution concentration was 0.500 mg mL-1, the accumulation of lipid droplets within the cells was significantly decreased and the optical density （OD） value of the solution from destained Oil Red O reached to 0.35, which was the lowest value （P〈 0.05）. The proliferation of 3T3-L1 preadipocytes was significantly inhibited by treating at higher sporamin concentrations. In addition, the inhibitory effect was more obvious with the prolonged treatment time （P〈 0.05）. The differentiation and proliferation of 3T3-L1 preadipocytes could be inhibited significantly by the addition of higher concentration sporamin. It was, therefore, suggested that the sporamin was potentially effective for weight loss.     

FOXO1基因调控牛前体脂肪细胞增殖和分化的功能研究

为探究干扰叉头转录因子O1（Forkhead box protein O1, FOXO1）对牛前体脂肪细胞增殖和分化的作用,本研究以固原黄牛的前体脂肪细胞为研究对象,采用组织块法分离牛前体脂肪细胞,并利用表型鉴定和标志基因表达谱2种方法鉴定所分离细胞的纯度和分化潜能。筛选并包装牛FOXO1干扰慢病毒,利用EdU染色、流式细胞术、油红O染色和qPCR方法探究干扰FOXO1对牛脂肪细胞增殖和分化的作用。结果表明：1）成功分离了牛前体脂肪细胞,且其具有较高的纯度和分化潜能。2）EdU染色结果表示,侵染Lv-FOXO1极显著增加了牛脂肪细胞的增殖率（P<0.01）。3）流式周期结果显示,干扰FOXO1显著增加了牛脂肪细胞S期阳性细胞的比例,促进了G1/S期的转化,进而促进了牛脂肪细胞增殖。4）干扰FOXO1后,增殖标志基因PCNA、CDK1和CDK2的表达量均极显著上调（P<0.01）。5）干扰FOXO1后牛前体脂肪细胞脂滴生成明显减少,且成脂标志基因PPARG的表达极显著下调（P<0.01）,CEBPB和LPL的表达显著下调（P<0.05）。综上,干扰FOXO1可通过上调增殖标志基因PCNA、CDK1和CDK2的表达促进牛脂肪细胞G1/S期的转化,进而促进牛脂肪细胞增殖,且其可通过降低成脂标志基因PPARG、CEBPB和LPL的表达减少牛脂肪细胞脂滴形成,进而影响脂肪沉积。本研究可为中国地方黄牛的肉质遗传改良提供理论依据。