工程菌产植酸酶摇瓶发酵条件初探

本实验根据毕赤酵母工程菌的特点,在摇瓶中对重组毕赤酵母工程菌株PP-MS-NPm-4-16的发酵条件进行初步研究。确定了60%麦芽-麸皮培养基,40%的蚕蛹培养和190mg/L的酵母营养盐作为高密度发酵的基础培养基,生长阶段和诱导阶段最佳pH分别为5.0和5.5。通过正交实验得到工程菌的最佳摇瓶培养条件为:接种量4%,甲醇浓度40g/L,生长阶段豆油浓度1.3%,诱导阶段豆油浓度3.5%,植酸酶酶活最高可达到192400U/mL。     

利用甘蔗糖蜜生产饲料酵母发酵条件的研究

以甘蔗糖蜜为碳源发酵生产高生物量饲料酵母,通过单因素正交试验设计,确定优化的培养条件为:温度28℃,pH5.0,装液量200mL/500mL,摇床转速180r/min,培养时间84h。在优化的培养条件下酵母菌株的总蛋白质含量可达到6.01g/L。     

菌丝霉素NZ2114毕赤酵母工程菌高效发酵工艺的研究

抗菌肽是饲料中广泛使用的药物抗生素的有效替代品之一。菌丝霉素作为一种革兰氏阳性菌抗菌肽,其活性研究已积累较多数据,但发酵工艺摸索还少见报道。重组菌丝霉素酵母工程菌的高效表达是后续能否进行大规模生产的瓶颈之一。本文通过培养基配方,接种条件,甲醇诱导和流加方式,菌体湿重几个方面入手,探讨了对重组菌丝霉素蛋白表达量影响的主要因素,得出使用BSM培养基,接种量为15%,甲醇诱导48小时,湿重达到300g/L时,菌丝霉素的表达量最高,活性最佳,同时经济成本也可得到相应控制。本研究为后续重组菌丝霉素的生产提供了理论和试验数据支撑。     

富铬酵母发酵条件优化的研究

 利用酵母菌具有较强的富集微量元素的特性,试验对产朊假丝酵母富集微量元素铬的条件进行了优化。从6株酵母菌中筛选出耐铬能力和富集铬能力均较强的CJ2作为试验菌株。试验结果表明：500 mL三角瓶中装入75 mL发酵培养基,采用一次性加铬的方式,适宜的CrCl₃·6H₂O浓度为50 μg/mL,pH值为5.5,接种量为6%,摇床转速180 r/min,28~30 ℃下培养24 h,获得的富铬酵母生物量能达到1.30 g/100 mL,铬含量能达到2 000 μg/g左右,转化率能达到50%左右。同时CJ2菌株发酵罐培养,铬酵母生物量能达到1.80 g/100 mL,铬含量能达到2 500 μg/g左右。并对普通酵母和富铬酵母中的氨基酸组成了分析。     

富铁酵母发酵条件的优化

利用酵母菌具有较强富集微量元素的特性,试验对酵母菌富集微量元素铁的条件进行了优化.从7株酵母茵中筛选出耐铁能力和富集铁能力均较强的CRJ3作为试验菌株.结果表明,500 mL三角瓶中装入75 mL发酵培养基,pH为5.0,接种量为2％,在28 ～ 30℃,180 r/min条件下摇床培养,采用硫酸亚铁作为铁源,适宜浓度为800 μg/mL.在此条件下,培养所得的酵母菌体生物量能达1.30 g/100mL,铁含量能达35mg/g左右,转化率达到56.0％.同时CRJ3菌株采用恒定pH发酵罐培养,酵母菌体生物量能达到1.45 g/100mL,总铁含量能达500mg/L左右,有机化程度约为98％.     

东北林蛙皮肤抗菌肽基因在毕赤酵母中表达条件的优化

目的:确定毕赤酵母表达东北林蛙皮肤抗菌肽dybowskin-1ST基因的最佳诱导表达条件。方法:本研究将PCR合成的dybowskin-1ST基因克隆到毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建pPIC9K-dybowskin-1ST诱导型表达载体。表达载体经线性化后转化巴斯德毕赤酵母GS115,应用BMMY培养基诱导表达。采用单一变量法及正交试验法,对甲醇诱导的浓度、时间和温度进行了优化,通过SDS-PAGE电泳分析和体外抑菌试验检测目的肽表达丰度。结果:最佳诱导条件:甲醇终浓度为0.5%、诱导时间为72 h、诱导温度为28℃,在此条件下表达产物SDS-PAGE电泳条带灰度值为117,抑菌环直径为28.16mm,可为规模化的抗菌肽表达提供参考数据。     

富硒酵母发酵条件的初步研究

该试验就一株生产用啤酒酵母的发酵条件进行了初步研究.用紫外分光光度法测定4种不同发酵条件下回收酵母茵的有机硒含量.结果表明,最佳发酵条件为:使用PDA培养基,在500ml三角瓶中装液量为100ml,发酵20h加硒,培养48h收获茵体.在此条件下.酵母发酵液中有机硒含量可高达753μg/L茵液.     

MB22木聚糖酶发酵条件的研究

通过因素轮换试验和正交试验,对MB22菌产木聚糖酶的培养基配方和发酵条件进行了研究。结果显示最佳培养基组成是:以玉米芯粉和麸皮为碳源,麸皮120g/l,玉米芯280g/l,(NH4)2SO44g/l,CaCO31.5g/l,Tween80,2.0g/l,MgSO4·7H2O1.5g/l;最佳发酵条件为:起始pH5.0,摇床培养温度30℃,转速160r/min,振荡培养84h。在最佳发酵条件下,MB22菌的最高产酶活力可达898.23U/ml。虽然与一些高产菌株相比该菌株的产酶能力还有待于进一步提高,但该试验结果为进一步进行微生物生产木聚糖酶的研究提供了理论依据。     

脆壁克鲁维酵母生产乳糖酶发酵条件的优化

通过试验研究了一株产乳糖酶脆壁克鲁维酵母的发酵培养基成分及培养条件，最终确定了该株酵母的最佳发酵培养条件。结果表明，此株脆壁克鲁维酵母发酵生产乳糖酶的最佳培养基成分为：乳糖4％，酵母粉3％，MnCl2 1mmol／mL；最佳培养条件：接种量10％，温度28℃，初始pH7-7．5，摇床转数180r／min，培养时间36h。在此条件下培养，乳糖酶活力达1100u／mL或4140u／g干菌体。     

脆壁克鲁维酵母生产乳糖酶发酵条件的优化

通过试验研究了一株产乳糖酶脆壁克鲁维酵母的发酵培养基成分及培养条件,最终确定了该株酵母的最佳发酵培养条件.结果表明,此株脆壁克鲁维酵母发酵生产乳糖酶的最佳培养基成分为:乳糖4%,酵母粉3%,MnCl2 1mmol/mL;最佳培养条件:接种量10%,温度28°C,初始pH 7-7.5,摇床转数180 r/min,培养时间36 h.在此条件下培养,乳糖酶活力达1100 u/mL或4140 u/g干菌体.     

富硒酵母液体发酵条件的研究

本文对经含硒YPD平板驯化得到的YS1菌株在含硒4+(Se4+)YEPD培养基中液体发酵条件进行研究。试验表明YS1菌株在含Se4+的液体培养基中生物量和Se4+转化率高于出发菌株。在YS1菌株生长成熟期添加亚硒酸钠,YS1菌株生物量及硒转化率优于其他添加方式。采用恒pH补料分批培养,YS1菌株生物量有了明显的提高,达13.41g/L。在YS1菌株培养30h后进行定时加入Se4+,所得到的YS1总硒含量较摇瓶发酵有所提高,达3158.53μg/g,Se4+转化率达84.71%。     

酸浆中嗜酸乳杆菌发酵豆腐废水发酵条件的研究

从酸浆中分离得到一株嗜酸乳杆菌,并对其发酵豆腐废水条件进行研究。试验结果表明:温度、初始pH值、发酵时间等都影响嗜酸乳杆菌发酵产酸。采用正交试验确定了其发酵豆腐废水的最佳条件为:温度37℃;初始pH值6.0;接种量6%;时间48h,在最佳条件下的产酸量可达到0.5514g/100ml。     

鸡生长激素在毕赤酵母中的表达、纯化和活性鉴定

生长激素（growth hormone,GH）与受体结合调节靶细胞的功能在机体的生长发育及代谢过程中起着极其重要的作用。为获得高纯度具有生物学活性的鸡生长激素（chicken growth hormone,cGH）,试验将C端融合了6个组氨酸的cGH成熟片段基因序列克隆入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,使用电转法将重组质粒导入毕赤酵母GS115,以1%的甲醇诱导重组菌（GS115-pPIC9K-cGH）96 h,表达大小约为25 ku的目的蛋白cGH,经Ni离子亲和层析和聚丙烯酰胺葡聚糖凝胶层析获得95%以上的cGH重组蛋白。实时荧光定量检测结果表明,纯化的cGH重组蛋白可刺激鸡肝癌细胞LMH内的胰岛素样生长因子Ⅰ（insulin-like growth factor Ⅰ,IGF-Ⅰ）基因的mRNA表达上调,表明所发酵纯化的重组蛋白cGH具有生物学活性,这为其结构和功能的研究及生产应用奠定了基础。     

植酸酶的高密度发酵、制备及其应用研究

从甲醇添加量、诱导温度、生长时间等方面对重组酵母摇瓶发酵条件进行研究,并以此为基础探讨其在30L发酵罐上产植酸酶的条件,从而为大规模的生产提供理论依据。对发酵过程中的诱导时间,诱导期间的甲醇与甘油的流加速度和比例以及诱导pH值进行了分析。得到最佳产酶条件为生长时间20h、甲醇流加速度5ml/(L·h)、诱导期甘油流速速度1ml/(L·h)、诱导pH值为4、诱导时间84h、诱导温度26℃,酶活力可达到454U/ml,比未优化前提高接近3倍。发酵液经过超滤浓缩添加复合稳定剂制成饲料后投入到小规模草鱼养殖应用中,结果表明,在植酸酶添加量为0.08%可以替代磷酸二氢钙,证明该菌株具有大规模工业化生产的前景。     

一株酿酒酵母固体发酵条件的研究

在筛选出的优化发酵培养基基础上,进行发酵条件的优化筛选。确定最佳发酵条件为装量30g/500mL广口瓶,料水比1∶1,接种量1%,起始温度30℃,起始pH自然,发酵周期48h,在此条件下发酵最高菌数为6.85×108CFU/g。     

重组毕赤酵母工程菌产木聚糖酶酶学性质的研究

采用DNS还原糖法研究基因工程菌毕赤酵母产木聚糖酶的酶学性质。结果表明:该木聚糖酶具有良好的热稳定性;最适pH为4.5,在pH3.5～7.0条件下均能保持较高的酶学活性,且对不同酸碱pH环境具有较强的耐受性;内源性蛋白酶对该木聚糖酶的活性影响较小;室温25℃下贮存12个月,该酶活性保持在80%左右;在4.0%仔猪预混料中贮存12周,酶活存留仍达91.4%以上,表现出良好的贮存稳定性。     

植酸酶的高密度发酵、制备及共应用研究

从甲醇添加量、诱导温度、生长时间等方面对重组酵母摇瓶发酵条件进行研究,并以此为基础探讨其在30 L发酵罐上产植酸酶的条件,从而为大规模的生产提供理论依据.对发酵过程中的诱导时间,诱导期间的甲醇与甘油的流加速度和比例以及诱导pH值进行了分析.得到最佳产酶条件为生长时间20 h、甲醇流加速度5 ml/(L·h)、诱导期甘油流速速度1 ml/(L·h)、诱导pH值为4、诱导时间84 h、诱导温度26℃,酶活力可达到454 U/ml,比未优化前提高接近3倍.发酵液经过超滤浓缩添加复合稳定剂制成饲料后投入到小规模草鱼养殖应用中,结果表明,在植酸酶添加量为0.08%可以替代磷酸二氢钙,证明该菌株具有大规模工业化生产的前景.     

富硒酵母液体深层发酵条件的研究

试验对经含硒麦芽汁平板驯化得到的AS15菌株在含硒(Se4+)麦芽汁培养基中液体发酵条件进行研究,试验结果表明,AS15菌株在含Se4+的液体培养基中生物量和硒转化率均高于出发菌株;在AS15菌株对数生长期添加亚硒酸钠,AS15菌株生物量及硒转化率优于其它添加方式;AS15菌株发酵罐培养采用恒定pH值发酵,生物量有了明显的提高,达32.5g/l;在AS15菌株发酵罐培养22h后进行定时加入Se4+,所得到的AS15酵母细胞内的硒含量较摇瓶发酵有所提高,达2081μg/g,硒的转化率达84.5%。     

青稞酒糟接种酵母菌固体发酵条件的研究

以鲜青稞酒糟为基础原料，经脱水、去杂，添加不同辅料后，接种酵母菌种，经过不同时间发酵。结果表明：添加不同辅料及不同发酵时间对发酵产品质量有显著影响作用。玉米面的用量以添加5％发酵产品的粗蛋白含量最高，葡萄糖以添加2％发酵产品粗蛋白含量最高，硫酸铵以加0．15％发酵产品活酵母菌数量最高、发酵效果最好。随培养时间的延长，产品粗蛋白含量提高，粗纤维含量降低，以培养24小时的产品活酵母菌数量最高。     

50％的猪粪酵母发酵饵料喂鱼试验

５０％的猪粪酵母发酵饵料喂鱼试验青海畜牧兽医学院刘禹宏青海省饲料公司韩淑芬解放军农牧大学王桂馥１．材料与方法１．１饲料酵母菌的选育以５４株酵母菌为原始株，以提高其在猪粪基料上的适应性和生产能力为目的，进行了如下选育研究，以获得优良的目的菌株。１．１．...