PCR法检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因

[目的]建立一种快速准确检测水中金黄色葡萄球菌肠毒素A的方法。[方法]将金黄色葡萄球菌模拟污染的水增菌后提取菌体DNA,以沙门氏菌、大肠杆菌DNA和空白作对照,用PCR法扩增金黄色葡萄球菌肠毒素A基因。[结果]金黄色葡萄球菌DNA的检测结果呈阳性,检测底限达100 cfu/L,而大肠杆菌和沙门氏菌及空白对照均未出现特异性片段,整个检测过程只需要24 h。[结论]试验建立的PCR方法可检测水及类似食品中的金黄色葡萄球菌SEA基因,并具有特异性强、灵敏度高、速度快和易操作的特点。     

冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用机制

研究了冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌的抑菌作用机制。通过测定冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌细胞膜的通透性、呼吸代谢途径和蛋白质合成能力的影响,探讨冬凌草甲素的抑菌机制。试验结果显示,冬凌草甲素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)分别为25μg/mL和50μg/mL;冬凌草甲素作用金黄色葡萄球菌后,培养液的电导率升高,β-D-半乳糖苷酶活性增大,核酸外泄量也增加,2 MIC药物组处理6 h后的电导率比空白组升高了18%(P0.01),处理12 h后的β-D-半乳糖苷酶活性比空白组增大了124%(P0.01),胞外核酸大分子含量极显著高于对照组(P0.01);冬凌草甲素作用金黄色葡萄球菌9h,菌体可溶性蛋白质总量比对照组减少了约50%(P0.01);冬凌草甲素能抑制金黄色葡萄球菌三羧酸循环中的关键酶活性,其中对苹果酸脱氢酶活性抑制率为53.22%(P0.01),对琥珀酸脱氢酶的活性抑制率为33.96%(P0.01)。试验结果表明,冬凌草甲素通过破坏细菌细胞膜的通透性以及抑制菌体内的蛋白质合成、代谢关键酶的活性发挥杀菌作用。     

芦丁对金黄色葡萄球菌Sortase A的抑制作用

应用分子克隆技术,依照GenBank中金黄色葡萄球菌Sortase A基因序列设计引物,构建重组表达载体;采用荧光淬灭检测法观察芦丁对金黄色葡萄球菌Sortase A活性的抑制作用,并通过纤维蛋白原结合试验考察芦丁对由Sortase A介导的金黄色葡萄球菌黏附纤维蛋白原的影响.结果表明:成功构建了重组表达载体pET-Srt△N59,并纯化出Sortase A蛋白.荧光检测结果显示,芦丁对Sortase A的活性具有一定的抑制作用.当芦丁浓度为128,64,32,16,8μg/mL时,对Sortase A的抑制率分别为63.58％,62.80％,47.43％,20.37％,13.26％,IC50为57μmol/L;纤维蛋白原结合试验表明,芦丁对金黄色葡萄球菌的黏附具有一定的抑制作用.当芦丁浓度为64 μg/mL时,黏附率为27.97％,与阴性对照组相比显著降低(P＜0.01).     

咖啡酸通过抑制分选酶A治疗金黄色葡萄球菌感染小鼠

利用荧光共振能量转移试验(FRET),测定咖啡酸对金黄色葡萄球菌分选酶A(Sortase A,Srt A)的抑制作用;利用蛋白结合试验,验证咖啡酸通过抑制Sortase A的活性影响金葡菌黏附于纤维蛋白原;通过构建小鼠腹膜炎模型,观察咖啡酸对金葡菌引起感染的治疗作用。结果表明:咖啡酸对Sortase A活性有明显的抑制作用,咖啡酸质量浓度为256μg/m L时,抑制率达到88.90%,IC_(50)为(37.13±4.55)μg/m L;咖啡酸对金葡菌的黏附有一定的抑制作用,当咖啡酸质量浓度为256μg/m L时,黏附率为18.77%;咖啡酸对金葡菌引起的腹膜炎有一定的治疗作用,给药组小鼠脓肿程度降低,腹腔载菌量显著减少。这说明咖啡酸可能成为金葡菌感染治疗药物研发的先导化合物。     

重组家蝇抗菌肽Des-HF在酵母中的表达及对金黄色葡萄球菌的抗菌活性

参考家蝇防御素抗菌肽基因序列(AY260152) 设计4条引物,用降落PCR方法获得家蝇防御素抗菌肽成熟肽基因.将基因克隆人酵母表达载体pPICZα-A,构建分泌型重组酵母表达载体pPIC-Des-HF,转化Pichia pastoris受体菌SMD1168,在醇氧化酶(AOX) 启动子调控下,相对分子质量约5 000的重组抗菌肽Des-HF获得表达.抗菌试验结果表明,该表达产物对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌活性.以小鼠为试验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,试验结果表明,240μg重组Des-HF可分别保护小鼠免受10倍最小致死浓度的金黄色葡萄球菌(ATCC26003) 和Cowan I的攻击.     

SEB单克隆抗体的制备

[目的]获取能应用于快速检测致病微生物的蛋白质芯片点印用单克隆抗体。[方法]用金黄色葡萄球菌B型肠毒素（SEB）作为抗原免疫BALB/C小鼠,然后取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/O融合,再进行选育、检测、鉴定等。[结果]成功获得了分泌SEB单克隆抗体的杂交瘤细胞。[结论]抗体特异性经酶联免疫吸附测定法检验,单克隆抗体细胞特异性强,能够用作蛋白质芯片点印的材料。     

毛兰素缓解金黄色葡萄球菌腹膜炎的作用机制

采用微量肉汤稀释法、荧光共振能量转移试验和分子对接技术,分别探究毛兰素对金黄色葡萄球菌的体外抑制作用、对分选酶A(Srt A)的抑制作用及其作用的分子机制;通过构建小鼠腹膜炎模型,评价毛兰素对金葡菌腹膜炎的缓解作用。结果表明:毛兰素对金葡菌的体外最小抑菌质量浓度为512μg/m L,最小杀菌质量浓度大于1024μg/m L;毛兰素对SrtA活性有明显抑制作用,IC50为(20.91±2.31)μg/m L;毛兰素以紧凑的构象结合至SrtA的活性中心,与SrtA形成稳定的复合物来影响SrtA的生物活性;毛兰素对金葡菌引起的腹膜炎有良好的缓解作用,可减轻金葡菌所导致的小鼠脓肿症状。     

金黄色葡萄球菌肠毒素基因分布的研究

为了研究g型肠毒素基因(SEg)i、型肠毒素基因(SEi)在金黄色葡萄球菌菌株中的分布状况,本试验以分离自人化脓组织、生牛乳等8种不同来源的371株金黄色葡萄球菌菌株作为研究对象,利用PCR技术对肠毒素基因的分布进行检测。结果表明:267株金黄色葡萄球菌检出含有肠毒素基因,总检出率为71.97%。其中SEg基因的总检出率为67.93%,SEi基因的总检出率为57.68%。各来源间金黄色葡萄球菌肠毒素的检出率不同,且同一来源的菌株其SEg和SEi的检出率也不同,表明不同来源以及不同肠毒素的基因型在金黄色葡萄球菌中的分布存在差异。     

亚抑菌质量浓度的百里香酚对金黄色葡萄球菌α-溶血素表达的影响

【目的】α-溶血素在金黄色葡萄球菌(金葡菌)肺炎的感染过程中起着非常重要的作用,可作为治疗金葡菌肺炎的新靶标。因此,研究百里香酚对金葡菌α-溶血素表达的影响具有重要意义。【方法】测定最小抑菌质量浓度(MIC)和生长曲线并进行了溶血试验、蛋白免疫印迹分析、荧光定量PCR以及细胞毒性试验。【结果】百里香酚对金葡菌USA300的MIC为256μg/mL,亚抑菌质量浓度的百里香酚(32μg/mL)可下调金葡菌hla和RNAIII的转录水平,降低α-溶血素的表达,对溶血素介导的肺癌上皮细胞A549损伤具有保护作用。【结论】百里香酚具有成为新型抗金葡菌感染药物的潜力。     

星点设计-效应面法优化酿酒酵母活性蛋白提取工艺

采用星点设计-效应面法优化酿酒酵母活性蛋白提取工艺,为进一步研究酿酒酵母提供理论依据。以超声波破壁法提取酿酒酵母活性蛋白,采用单因素试验和星点试验设计,研究超声总时间、工作时间/间歇时间、超声功率对酿酒酵母活性蛋白得率的影响。结果表明,酿酒酵母活性蛋白提取最佳工艺:超声总时间为15.32 min,工作时间/间歇时间为17.96 s/17.96 s,超声功率为461.45 W,期望值37.53μg/m L;按最佳提取条件提取后测得的实际蛋白含量为36.48μg/m L。星点设计-效应面法优化超声波破壁法提取酿酒酵母活性蛋白工艺,方法简便,预测性良好。     

凉茶体外抗菌作用研究

采用琼脂扩散法、稀释法方法研究了凉茶对幽门螺旋杆菌菌株、大肠杆菌、金黄葡萄球菌和沙门氏菌的抑菌活性。琼脂扩散法结果显示凉茶对幽门螺旋杆菌、大肠杆菌、金黄葡萄球菌和沙门氏菌具有良好的抑制作用;通过二倍稀释法测定凉茶对不同菌株的最低抑菌浓度(MIC),结果显示幽门螺旋杆菌和大肠杆菌为12.5g/mL,金黄色葡萄球菌和沙门氏菌为25g/mL。     

复配植物源杀菌剂的开发研究

研究了植物源化合物肉桂醛、丁香酚、麝香草酚和单宁酸对5种常见致病菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单胞菌、肠炎沙门氏菌和单核细胞增生李斯特氏菌)的抑制作用。采用肉汤稀释法测定各成分对5种致病菌的最小抑菌浓度(M IC),在浓度范围19.53~2500μg/mL内,各成分对各致病菌均表现出了抑制活性。对化合物之间的相互作用也进行了研究,肉桂醛、丁香酚、麝香草酚和单宁酸两两复配后各成分的最小抑菌浓度都有所降低,采用部分抑菌浓度(FIC)判定表明它们之间存在协同增效的作用。     

Detection and Analysis on Staphylococcal Enterotoxins in Raw Cow Milk from Different Regions of Jinan,China

[Objective] This study was conducted to investigate the pollution caused by staphylococcal enterotoxins (SE) in raw milk and the safety of dairy products in Jinan,and to provide a scientific basis for food safety risk analysis.[Method] A total of 130 raw milk samples were collected from different regions of Jinan,and detected for Staphylococcus aureus by referring to GB 4789.10-2010.Then,enzyme-linked immunosorbent assay was performed to detect whether the S.aureus strains produced enterotoxins,and the enterotoxin type was identified using colloidal gold-based immunochromatographic test strips.[Result] Fiftyseven of the raw milk samples were polluted by S.aureus,so the detection rate of S.aureus was 43.85％;and 11 of the strains produced enterotoxins.Among the 11 enterotoxin-producing strains,seven produced SEB,only one produced SEC,and the SE type of other three strains was not identified.[Conclusion] Enzyme-linked immunosorbent assay and colloidal gold-based immunochromatographic test strips can be used in combination to rapidly detect staphylococcal enterotoxins and identify enterotoxin type,although there are some limitations.SEB is the main type of staphylococcal enterotoxin causing pollution in milk of Shandong Province.     

泰妙菌素的MIC测定

采用试管2倍稀释法,测定了泰妙菌素对鸡毒支原体、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、类马链球菌的体外最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:泰妙菌素对鸡毒支原体、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、类马链球菌的MIC分别为0.003 13、6.4、0.2、0.2μg/mL。对鸡毒支原体的MBC为0.006 25μg/mL。     

双黄连口服液联合青霉素G对金黄色葡萄球菌的体外抗菌作用研究

用美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)介绍的方法,分别测得双黄连口服液和青霉素G对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC);使用棋盘联合药敏试验法,以部分抑菌浓度(Fractional inhibitory concentration,FIC)指数为指标,观察双黄连口服液和青霉素G联用对金黄色葡萄球菌的抗菌作用.结果表明,双黄连口服液对金黄色葡萄球菌的MIC是46.88 mg/mL(稀释度1:32);青霉素G对金黄色葡萄球菌的MIC是0.25 U/mL;双黄连口服液和青霉素G联用对金黄色葡萄球菌的FIC指数是0.125.双黄连口服液联用青霉素G对金黄色葡萄球菌联合药敏结果呈协同作用.     

不同加工方式对EGCG抑制金黄色葡萄球菌活性作用的影响

[目的]研究经不同加工处理后表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对金黄色葡萄球菌抑菌活性的影响,从而为EGCG在食品生产加工中的抑菌应用提供依据。[方法]利用3种不同加工方式对EGCG进行处理,采用最低抑菌浓度测定法(MIC法)与纸片琼脂扩散法(KB法)检测EGCG的抑菌效果,利用Baird-Parker平板计数法检测EGCG对牛奶中金黄色葡萄球菌的抑制效果。[结果]EGCG抑菌能力随着浓度的增高而提升。相同浓度下,EGCG经过不同加工方式后抑菌能力大小依次为巴氏杀菌法(72℃,20 s)高压蒸汽灭菌法(121℃,15 min)薄膜过滤法(0.22μm),最低杀菌浓度(MBC)依次为0.062 5、0.125 0和1.000 0 mg/m L,经巴氏杀菌法处理的EGCG抑菌效果最强。而EGCG在牛奶中的抑菌作用不显著。[结论]在多种食品加工条件下,EGCG对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性。     

红花紫荆叶总黄酮提取工艺及其抑菌和抗氧化活性

研究了超声波提取红花紫荆(Bauhinia blakeana Dunn)叶黄酮的条件及其抗菌、抗氧化的性能。结果表明,经过正交试验分析,总黄酮最佳提取工艺为乙醇体积分数60%,超声时间45 min,超声温度70℃,料液比1∶20(m∶V),该条件下总黄酮提取率为4.11%。红花紫荆叶总黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌均有抑菌效果,对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好,对青霉的抑菌效果不明显;红花紫荆叶总黄酮对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌最小抑菌溶度为0.025 g/m L,对白色念珠菌最小抑菌浓度为0.05 g/m L,对青霉最小抑菌浓度为0.6 g/m L。红花紫荆叶总黄酮对羟自由基、超氧阴离子自由基、亚硝酸盐均具有一定的清除作用,在浓度0.5~2.5 mg/m L的范围内,清除能力随着浓度的增加而增强,且强于阳性对照维生素C的清除能力,抗氧化能力较强。     

万寿菊杀菌素水乳剂抑菌作用的研究

用万寿菊杀菌素水乳剂对11种病原微生物进行抑菌试验,结果表明:万寿菊杀菌素水乳剂对这些微生物的生长有明显的抑制作用,0.8 μg/mL的杀菌素可完全将丝核病菌抑制,对西瓜枯萎病菌及稻瘟病菌的抑制率可达到70%以上,对辣椒枯萎病菌的抑制作用较弱,只有35.57%。0.8 μg的药量对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌有明显的抑制作用,但是对大肠杆菌没有抑制作用。上述结果表明万寿菊杀菌素水乳剂具有开发为农用杀菌剂的潜力。     

苹果多酚抑菌作用的研究

为建立多酚浓度与细菌生长速率之间的关系,该文采用微量量热法研究了不同浓度的苹果多酚对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑制作用。结果表明,苹果多酚对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有一定程度的抑制作用,且多酚浓度与细菌生长速率常数之间存在线性关系,其抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的临界生长用药浓度分别为0.218 6和1.558 0 mg/mL。      

几种抗菌药物体外抑菌试验

目的：观察4种复方抗菌药物对常见细菌的抑菌作用。方法：配制不同浓度梯度的药物溶液,通过药敏纸片法测量药物对细菌的抑菌圈直径来确定该药物的抑菌效果,评价其在实际生产中的应用价值。结果：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌对浓度为128μg/mL氟苯尼考高敏,大肠杆菌对浓度为64μg/mL氧氟沙星高敏,金黄色葡萄球菌对浓度为256μg/mL盐酸多西环素高敏,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌对氨苄西林敏感性不高。结论：氟苯尼考、氧氟沙星对大肠杆菌有较好的抑菌作用效果,氟苯尼考、盐酸多西环素对金黄色葡萄球菌有较好的抑制效果。