人溶菌酶基因hLYZ在小鼠乳腺中的表达及其抗菌活性检测

从人胎盘组织中克隆获得人溶菌酶基因hLYZ,选用体内表达载体pcDNA3.1,构建表达载体pcDNA3.1hLYZ,并转染至小鼠体内,采集小鼠乳汁和乳腺组织,通过RT-PCR方法检测基因的表达水平,用免疫组化反应、Western blotting检测蛋白的表达,并通过体外抗菌活性检测重组人溶菌酶的抗菌活性。经酶切鉴定和核苷酸序列测定,表明重组质粒pcDNA3.1-hLYZ构建正确,小鼠乳清的SDS-PAGE电泳显示在约14700处有特异的蛋白条带出现,Western blotting检测表明成功表达了人溶菌酶,根据回归方程计算酶活性为4011U/mL,体外抗菌活性检测结果显示重组人溶菌酶对大肠杆菌有明显裂解作用。本试验成功地在小鼠乳腺中表达了重组人溶菌酶,表达的蛋白具有较高的酶活性,这些结果为哺乳动物乳腺生物反应器的研究奠定了基础。     

禽蛋溶菌酶的制备及改性研究进展

溶菌酶是一种专门作用于微生物细胞壁的糖苷水解酶,是天然防腐剂,广泛存在于自然界中,特别是禽蛋中。但是天然溶菌酶是一种非广谱抗菌剂,主要作用于革兰氏阳性菌,而对革兰氏阴性菌几乎没有作用,近年来,很多学者研究了对溶菌酶的改性方法,使其达到对革兰氏阴性菌的抑制作用。本文综述了禽蛋溶菌酶的结构特点、抗菌机理,重点介绍了禽蛋溶菌酶的分离纯化方法以及国内外对溶菌酶进行物理、化学、生物改性的研究进展,并展望了禽蛋溶菌酶改性的发展前景。     

根据卵蛋白中溶菌酶含量评定母鸡的繁殖品质

动物体各组织中存在的溶菌酶,其浓度高低是判断机体自然抵抗力强弱的一个标准,而卵蛋白中溶菌酶含量是最高的。根据某些研究者(E.Sauterefar,1970;Арыканов,1977;В.Митющн-иков 1980)的资料,蛋白中溶菌酶水平与鸡蛋的孵化率有关。可以推想,在育种工作中可能利用这一指标,即选择其鸡蛋具有高免疫生物学特性的母鸡作种。我们的研究目的是确定蛋白溶菌酶水平与鸡蛋形态指标(文内略去一本刊)以及胚胎发育的关系。以156只试验鸡的蛋白溶菌酶水平分成三个组:第一组含量最高,为8.9～10.7毫克/毫升,第二组中等,为7～8.8毫克/毫升,第三组最低,为5.1～6.9毫克/毫升。各组间的差异显测著性定为     

双黄连对大鼠血清溶菌酶活性的影响

本文观察了双黄连对大鼠血清溶菌酶活性的影响。注射双黄连５ｄ天，大鼠血清中溶菌酶含量实验组和对照组比较，相差极显著。实验表明，双黄连激活血清中溶菌酶是其抗菌的作用机理之一。     

蛋清中的溶菌酶

在广泛的有机物（从细菌到人类）中都发现有溶菌酶。含量分别为白细胞１００００、眼泪７０００、女人的奶汁＜５００、脾脏５０～４００、蛋清４５００、唾液２００ｍｇ／ｍＬ。产蛋鸡血液中，溶菌酶的浓度比哺乳动物低１０倍，这是因为血液中溶菌酶经输卵管粘膜到达了蛋清中。血清中溶菌酶的浓度和蛋清中溶菌酶的浓度呈正相关。预防接种可引起血液中溶菌酶浓度下降，蛋清中溶菌酶浓度上升。这是一种防病物质由母体传给后代的生理现象。蛋清中溶菌酶的含量和蛋白高度及哈夫单位呈正相关。在家禽胚胎发育过程中，到孵化的第２周末，蛋清溶菌…     

溶菌酶的修饰及其在动物生产中的应用研究进展

溶菌酶是动物体液和血液中重要的非特异性免疫因子,其以化学性质稳定、无残留、无抗药性等优良抗菌特性受到科研人员广泛关注.天然溶菌酶抗菌谱窄,对革兰氏阳性菌抑菌效果明显,而对革兰氏阴性菌几乎无抑菌作用,因此对天然溶菌酶实施分子结构调整以拓宽其抑菌谱具有非常重要的意义.本文主要综述了化学、物理、生物改性方法对溶菌酶进行修饰以...     

溶菌酶——先天性免疫系统中的重要防御物质

先天性免疫系统被认为是机体的第一道防线,能抵抗多数病原菌。溶菌酶在生物体内普遍存在,其水平或活性是先天性免疫力的一个重要指标。溶菌酶存在于黏液、淋巴组织、血浆等体液中,也在多种组织中表达,可溶解革兰氏阳性菌和阴性菌细胞,本质上具有调理作用,能激活补体系统和吞噬细胞。随性别、年龄、季节、环境及疾病感染、压力程度的不同,溶菌酶活性也不同。本文综述了溶菌酶在先天性免疫系统中的作用。     

溶菌酶对肉仔鸡生长性能及免疫功能的影响

选用288只1日龄的健康艾维菌肉仔鸡,随机分为6个处理,每处理4个重复,每重复12只鸡,分别饲喂基础日粮及在基础日粮中添加溶菌酶、益生菌和黄芪多糖.观察其对肉仔鸡的生长性能、免疫器官指数和血液生化指标的影响.结果表明:与对照组相比,日粮中添加溶菌酶、益生菌和黄芪多糖均能提高肉仔鸡的增质量(P<0.05),降低料重比(P<0.05),其中添加溶菌酶组与添加益生菌及黄芪多糖组相比,增质量有明显的提高;与对照组相比,溶菌酶、益生菌和黄芪多糖均可提高肉仔鸡的细胞和体液免疫功能,其中溶菌酶的效果显著,可有效提高肉仔鸡血清中的溶菌酶和总蛋白含量(P<0.05).     

柞蚕溶菌酶基因的克隆和序列分析

采用cDNA末端扩增(RACE)方法及简并引物克隆了柞蚕溶菌酶(Antheraea pernyilysozyme)基因(Gen-Bank登录号:DQ353869)。该基因cDNA序列全长675 bp,由3个外显子和2个内含子组成,其开放读码框(ORF)长420 bp,编码140个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因编码蛋白的1-20位氨基酸为信号肽序列,21-140位氨基酸为柞蚕溶菌酶成熟蛋白(分子质量14 kD,等电点8.46)。柞蚕溶菌酶氨基酸序列中含有c型溶菌酶分子所特有的活性中心Glu32、Asp50以及8个半胱氨酸残基,与鳞翅目昆虫溶菌酶的氨基酸序列同源性较高,属非钙结合型c型溶菌酶。柞蚕溶菌酶的模拟三级结构与印度柞蚕(Antheraea mylitta)溶菌酶的三级结构十分相似。     

驴乳溶菌酶原核表达及活性检测

为探究驴乳源溶菌酶特性,本研究人工合成了驴乳溶菌酶基因DKLYSC1,并连入原核表达载体pET32a(+)中经诱导、表达,通过SDS-PAGE、western blot及比浊法检测重组溶菌酶表达及活性。结果显示,重组溶菌酶主要以包涵体形式高效表达,分子质量约31 ku;纯化的重组蛋白可以与抗His标签抗体特异性结合,特异性较强;比浊法测定复性蛋白比酶活为124.74 U/mg。本研究在大肠杆菌中表达了驴乳溶菌酶,并获得具有活性的复性蛋白,为驴乳溶菌酶的基础研究和应用奠定了基础。     

溶菌酶及其在畜牧业中的应用

溶菌酶是一种广泛存在于生物体内,专一性地作用于微生物细胞壁的盐基水解蛋白酶,其具有无毒、无害、安全性高等特点。本文主要介绍了溶菌酶的基本特性、抑菌机理以及在畜牧业中的应用。     

绿色添加剂溶菌酶及其应用

溶菌酶广泛分布于动物、植物和微生物中,在鸡蛋清中含量较高。具有抗菌消炎、抗病毒、增强免疫力、促进双歧杆菌增殖等作用。溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖,使细胞壁变得松弛,细胞溶解死亡。溶菌酶在酸性条件较稳定,可与一些物质形成络合物导致其活性丧失。溶菌酶在食品防腐、在医学、畜牧和生物工程等领域将有广泛的应用。溶菌酶广泛分布于动物、植物和微生物中,在鸡蛋清中含量较高。具有抗菌消炎、抗病毒、增强免疫力、促进双歧杆菌增殖等作用。溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖,使细胞壁变得松弛,细胞溶解死亡。溶菌酶在酸性条件较稳定,可与一些物质形成络合物导致其活性丧失。溶菌酶在食品防腐、在医学、畜牧和生物工程等领域将有广泛的应用。     

番鸭唾液乳杆菌外膜蛋白提取方法的优化

为获得较大浓度的唾液乳杆菌外膜蛋白,试验对唾液乳杆菌外膜蛋白的提取方法进行了筛选和优化,比较了Sarkosy l法、PMSF法和溶菌酶法,筛选出最佳提取方法,并通过单因素试验和正交试验优化提取条件。结果表明:溶菌酶法所提取的蛋白量大,目的条带清晰,表明溶菌酶法优于PMSF法和Sarkosyl法;各提取因素影响的大小顺序为氯化锂水浴温度溶菌酶浓度氯化锂浓度氯化锂水浴时间溶菌酶反应时间溶菌酶反应温度;溶菌酶法的最佳提取条件为2.5 mg/mL溶菌酶,23℃水浴90 min,0.5 mol/mL氯化锂处理,30℃水浴25 h。     

乐至黑山羊肾溶菌酶基因克隆及原核表达

本研究对乐至黑山羊肾溶菌酶(LZLyK)基因进行了克隆、表达,并对其活性进行了测定。采用比较基因组技术,成功克隆了LZLyK基因,其cDNA长444 bp,编码147个氨基酸。同源性分析结果表明,氨基酸同源性与绵羊溶菌酶2(M32498.1)最高,达96.9%。构建原核表达质粒pET- LZLyK,转化大肠杆菌BL21(DE3)并诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白LZLyK得到正确表达,分子质量约为16、30 ku。采用比浊法测定了LZLyK蛋白的活性,其活性为15 U/mL,表明LZLyK蛋白具有一定抗菌活性。运用实时荧光定量PCR发现在乐至黑山羊肝脏、肾脏、气管和皱胃中均有肾溶菌酶基因的表达,在胃中表达量较高。     

溶菌酶抑菌活性及检测方法研究进展

溶菌酶是广泛分布于动物、植物和微生物等生物类群中的酶类,是生物体天然免疫系统的重要组成部分,是一种非特异性的防御机制。作者结合了细菌、真菌和病毒等的生理生化特性对溶菌酶的溶菌原理进行了总结,并对其抑菌活力检测方法进行了综述,最后对其抑菌作用的应用前景进行了展望。     

鸡蛋中生物活性肽的机遇与挑战

1鸡蛋中蛋白质的主要活性鸡蛋富含多种活性的蛋白质,如具抗菌作用的卵转铁蛋白和溶菌酶。卵转铁蛋白为转铁蛋白家族(铁螯合蛋白)成员。由于可传递铁离子而具有抗菌活性;当加入Fe3+后,卵转铁蛋白的抗菌活性可逆转。有研究表明,卵转铁蛋白也具有杀菌活性,且其杀菌活性与蛋白是否螯合铁离子无关卵转铁蛋白还有模拟超氧化物歧化酶(SOD)的抗氧化作用。     

溶菌酶及其在动物生产中的应用前景

溶菌酶广泛分布于动物、植物和微生物中,在鸡蛋清中含量较高。具有抗菌消炎、抗病毒、增强免疫力、促进双歧杆菌增殖等作用。溶菌酶能有效地水解细菌细胞壁的肽聚糖,使细胞壁变得松弛,细胞溶解死亡。溶菌酶在酸性条件下较稳定,可与一些物质形成络合物导致其活性丧失。溶菌酶在食品防腐、医学、畜牧和生物工程等领域将有广泛的应用。     

溶菌酶在动物生产中的应用研究进展

溶菌酶是一种广泛存在于生物体内，专一性地作用于微生物细胞壁的盐基水解蛋白酶，已被广泛应用于医药和生物工程领域，由于其无毒、无害、安全性高等特点，逐渐受到动物食品的上游——畜牧业的重视。论文主要介绍了溶菌酶作为一种新的添加剂在动物生产中的应用概况。     

重组人溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及活性研究

为了构建一种胞内表达人溶菌酶(hLZ)的毕赤酵母工程菌,此研究以人工合成人溶菌酶基因序列,通过酶切位点插入毕赤酵母表达载体pPICZαA,获得pPICZαA-hLZ。线性化该表达载体,电转化并筛选阳性克隆,甲醇诱导重组蛋白表达后,进行纯化和活性分析。结果表明,通过亲和层析树脂(Ni-IDA)从培养液上清纯化目标蛋白,SDS-PAGE表明目标蛋白为14.7 kDa左右,Western-blot结果表明目标蛋白即为带有6个His标签的重组人溶菌酶,BCA法测定表明纯化后的蛋白浓度为0.121 mg/mL;溶壁微球菌抑菌试验表明该重组人溶菌酶具有部分生物活性。此研究成功地获得了胞内表达且具有部分生物活性的人溶菌酶毕赤酵母工程菌,为重组人溶菌酶作为饲料添加剂开发应用奠定了一定的基础。     

2型猪链球菌毒力因子概述

2型猪链球菌感染已成为影响全世界养猪业的重要问题之一。它主要引起猪脑膜炎、肺炎、心内膜炎、关节炎、败血症等,并可感染人。猪链球菌2型致病机理还不太清楚,至今为止,已知的毒力因子有荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白、胞外蛋白因子、溶血素、粘附素等。文章对猪链球菌2型毒力因子做一系统概述。