黄瓜未授粉子房离体培养获得胚囊再生植株

以7种F1代黄瓜(Cucumis sativus L.)未授粉子房为试材进行再生植株培养,通过石蜡切片观察、激素含量测定探究胚囊再生植株形成过程及相关生理变化。结果表明:在MS+0.06 mg·L^-1 TDZ培养基中有3个供体黄瓜材料未授粉子房获得再生植株,经流式细胞检测、染色体计数、SSR验证分别为单倍体、双单倍体和同源四倍体。MS+0.04 mg·L^-1 TDZ+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.1 mg·L^-1 NAA+12mg·L^-1 AgNO₃培养基中子房产生大量胚状结构,但分化培养后没有获得再生植株。石蜡切片观察到在MS和MS+0.06 mg·L^-1 TDZ培养基中培养5 d和17 d时胚囊已经发育。供体黄瓜子房切片中GA、IAA含量随培养天数增加呈现先降低后升高的趋势,在培养8 d时最低,17 d时GA含量比2 d时更高,IAA含量无明显变化。     

甜瓜未受精子房或胚珠离体培养研究进展

该研究综述了影响甜瓜未受精子房或胚珠离体培养获得再生植株的若干因素,以及再生苗的倍性鉴定方法,对甜瓜未受精子房或胚珠离体培养上亟待解决的问题做了初步的阐述分析,以期为进一步的探究提供参考。     

西瓜未受精子房离体培养技术

西瓜未受精子房离体培养作为单倍体育种的有效方法,可极大提高育种效率。以西瓜‘早佳’未受精子房为试材,对西瓜未受精子房出胚率的影响因素进行了研究,并鉴定了再生植株倍性。试验结果表明,栽培季节对西瓜未受精子房离体培养有很重要的影响,在相同的培养条件下,秋季栽培出胚率可达21.33%,高出春季栽培约6%;取材当天的日最低、最高气温对西瓜未受精子房离体培养出胚率也有一定的影响,在21～35℃范围内日平均出胚率均可达10%,显著高于过低或过高气温下统计的出胚率;4℃低温预处理并不能提高西瓜胚状体诱导效率。利用染色体计数法与流式细胞仪鉴定36棵再生植株倍性,单倍体率为97%、二倍体率为3%。     

黄瓜未受精胚珠离体培养及单倍体植株再生

以欧亚杂交类型黄瓜（Cucumis sativus L.）65G × 228 的F1 为材料,对未受精胚珠进行离体培养,通过6 因素5 水平的正交试验,研究预处理温度、诱导培养基、TDZ、KT 和BA 浓度对未受精胚珠雌核发育的影响。结果证明TDZ 浓度对胚发生频率有极显著影响,是诱导黄瓜离体雌核发育的最主要因素,当其浓度为0.02 mg · L-1 时胚状体的诱导率最高。诱导培养基和KT 浓度显著影响胚发生率,而预处理温度和BA 浓度影响不显著。硝态氮（NO3-）和铵态氮（NH4+）含量比例均接近1∶1 的诱导培养基,较其他比值较大的培养基的胚发生率有显著提高。利用流式细胞仪进行倍性鉴定,再生植株中单倍体率为18.2%。     

黄瓜未授粉子房离体培养条件的优化及植株再生

为优化黄瓜未授粉子房培养高频胚诱导体系,以9个不同黄瓜基因型为试材,对影响未授粉子房培养胚发生和植株再生的因素进行研究,并对再生植株的倍性和同质性进行检测。结果表明,不同基因型之间出胚率差异显著,其中SG033出胚率最高,达95.93%,SG035出胚率最低,为8.15%;杂交种的胚胎发生能力显著高于产胚能力弱的亲本。在不同因素组合的处理中,处理11(秋季播种,定植于塑料大棚,盛花期取样,以开花前1 d的未授粉子房为外植体,4℃预冷处理4 d,接种于诱导培养基MS+0.08 mg·L^-1TDZ+30 g·L^-1蔗糖+7 g·L^-1琼脂,35℃热激暗处理2 d)的出胚率最高,比处理6、14、3分别提高了12.96%、30.00%、30.74%。采用形态学观察、流式细胞检测和SSR验证再生植株,分别获得了单倍体、二倍体、双单倍体及三倍体。综上所述,将产胚困难的黄瓜材料与产胚能力强的材料杂交后,用处理11进行子房培养能明显提高低出胚材料的诱导率。     

厚皮甜瓜品种离体培养再生植株能力的基因型差异研究

以6个厚皮甜瓜品种为材料,对其子叶外植体的再生能力进行了比较。结果表明:在诱导不定芽分化培养基MS+6-BA1.0mg/L上,不同品种的不定芽分化频率差异显著,其中绿宝石品种的不定芽分化频率最高,达到100%,西域1号和黄河蜜次之,分别为96.67%和73.33%,玉金香和黄醉仙较低,分别为33.33%和16.67%,白兰瓜品种最低,为6.67%。在不定芽伸长培养基MS+6-BA0.05mg/L上,分化完全的不定芽能够长大伸长,当高度达到2cm左右时,切下转接于MS+IAA0.5mg/L培养基上诱导生根,形成完整再生植株。试验结果还表明,组培环境中光照条件的改变对不定芽分化频率影响较大,外植体置于黑暗处进行5d预培养,6个品种的不定芽分化频率均有所降低,但愈伤组织的生长更加旺盛或不受影响。     

草莓未受精子房离体雌核发育的研究

 将凤梨草莓（Fragaria × ananassa Duch.）品种‘明旭’未受精子房在适宜离体条件下培养,诱导其雌核发育。在雌核发育的不同时期采用爱氏苏木精整体染色—石蜡切片法、整体染色—冬青油透明—石蜡切片法、解剖—整体透明法观察研究,结果表明雌核发育有3种不同的现象：①卵细胞启动分裂形成原胚,即卵细胞孤雌生殖;②偶尔有反足细胞启动分裂形成细胞团,但进一步发育的方向不清楚,很难形成胚体,未发现助细胞的无配子生殖;③个别极核分裂形成少数类胚乳游离核、游离核集团或胚乳状细胞结构等自发胚乳。胚的形态表现多样,可划分为典型胚、具畸形细胞胚和愈伤组织化胚。但无论哪种胚均是卵细胞孤雌生殖的结果;典型胚的发育和体内正常胚胎发育途径相似;胚囊植株主要经典型胚发育而成。具畸形细胞胚和愈伤组织化的胚很难形成胚囊植株。     

西瓜子叶离体培养获得再生植株

３个西瓜品种在无菌培养下，用５天左右苗龄的子叶作为外值体，在ＭＳ＋５．０ｍｇ／ＬＢＡ＋０．５ｍｇ／ＬＩＡＡ培养基上分化出营养胚，分化率达５０％以上。营养胚芽在ＭＳ＋０．２ｍｇ／ＬＫＴ培养基中增长，在ＭＳ＋０．１ｍｇ／ＬＮＡＡ培养基中生根，成为完整植株。上述离体培养程序，是生物基因转移工程的最佳配套方法。     

大蒜未受精子房离体诱导单倍体的研究

 以苍山大蒜品种‘糙蒜’为试材,通过花茎离体培养获得发育健壮的花器官。以其未受精子房为外植体进行离体培养,研究不同培养基（MS、B5、N6）及外源植物生长调节剂对单倍体诱导的影响,以建立大蒜单倍体诱导体系。结果表明,诱导未受精子房产生愈伤组织的适宜培养基为B5 + 2 mg · L^-1 6-BA + 1 mg · L^-1 NAA,愈伤组织及雌核发育胚总诱导率可达12.24%;诱导愈伤组织分化不定芽的适宜培养基为B5 + 3 mg · L^-1 6-BA + 1 mg · L^-1 NAA,不定芽分化频率可达46.15%;将不定芽转移至B5 + 0.05 mg · L^-1 NAA培养基中可诱导生根,发育成完整植株。以再生植株叶片为材料,采用流式细胞仪进行倍性鉴定,所得18株再生植株中有16株为单倍体植株。     

西瓜未授粉子房的离体培养

为了探讨西瓜未授粉子房诱导率的影响因素,以‘早春红玉’、‘西农9号’和‘小绿皇’为供试材料进行西瓜未授粉子房的离体培养,研究供体植株的黑暗热激处理、基因型、不同取样时间、2,4-D浓度和不同激素浓度组合等因素对其芽点诱导率的影响。结果表明:西瓜未授粉子房离体培养以33℃的条件下黑暗热激4 d效果最佳;以开花前1 d的子房诱导率最高为17.2%;3个品种中仅‘早春红玉’获得了再生植株,且在激素组合为4.0 mg·L-12,4-D+2.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA时芽点率最高为15.0%;根据再生植株的根尖染色体数目,初步鉴定再生植株中有单倍体植株,还有二倍体和四倍体植株。     

黄瓜未授粉子房离体培养的研究进展

根据近年来国内外黄瓜未授粉子房离体培养的最新研究进展,主要对离体培养至成苗过程中的主要影响因素进行了全面总结、对比和分析,讨论了目前该技术在黄瓜育种应用上存在的问题及展望,以期对黄瓜分子育种技术提供丰富的理论支持。     

西瓜未受精胚珠的离体培养

以‘西农9号’和‘蜜桂’为供试材料进行了西瓜未受精胚珠的离体培养,研究了供体植株的黑暗热激处理、基因型、不同取样时间、2,4-D浓度和不同激素浓度组合等因素对其芽点诱导率的影响。结果表明:西瓜未受精离体培养以33℃的条件下黑暗热激4 d时效果最佳;CPPU处理3 d的胚珠诱导率最高;‘西农9号’在2.0 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA的条件下芽点率最高为13.3%,‘蜜桂’在3.5 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+0.2/0.5 mg·L-1NAA,3.0 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA的条件下芽点诱导率最高均为6.7%。     

番茄花药离体培养获得植株

我们自1975年开始番茄(Lycopeisicvm esculenetum Mill)花药离体培养的研究。大量的工作证明番茄花药离体培养的最适合时期为单核期。供试验的品种均可诱导产生愈伤组织。诱导产生愈伤组织的培养基为MS 激动素1-2毫克/升 萘乙酸0.5-1毫克/升 3％蔗糖。当培养基内加入10％的椰乳时能明显地提高诱导频率。诱导愈伤组织分化的培养基为MS 6-苄基腺嘌呤2毫克/升 吲哚乙酸0.2毫克/升 2％蔗糖。已从大叶早粉、满丝、北京早红×402番茄品种的愈伤组织中诱导产生出大量花粉植株。诱导生根的培养基为H 吲哚丁酸0.5毫克/升 2％蔗糖或MS 吲哚乙酸0.2毫克/升 2％蔗糖。培养适宜的温度条件为25-27℃。 通过花药压片的显微观察,已看到2-4个细胞的花粉粒和多细胞团。诱导出的植株经根尖压片检查,染色体n=12,证明是来源于花粉的单倍体植株。     

核桃离体培养和植株再生

 以5个核桃品种(株系) 10年生植株的茎段为外植体, 进行了离体培养和植株再生的研究。结果表明, 附加2 g·L^-1聚乙烯吡咯烷酮的DKW + 6-BA 1.0 mg·L^-1 + IBA 0.01～0.10 mg·L ^-1是诱导茎段萌发最适宜的培养基, 5个品种(株系) 间的萌发率存在差异; DKW + 6-BA 110 mg·L^-1 + IBA 0.01mg·L^-1 + 蔗糖40 g·L^-1是最适宜的增殖培养基; 采用二步生根法最高生根率为41.67% , 生根试管苗移栽于草炭土∶河沙= 1 ∶1的基质中, 控制温度20～30 ℃, 保湿20 d, 期间遮荫, 40 d后成活率95%。     

醉蝶花离体培养植株再生研究

 诱导醉蝶花下胚轴和子叶形成愈伤组织, 以MS + 6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.5 mg/L + KT 0.5 mg/L培养基中子叶的出愈率最高, 达到100 % , 下胚轴出愈率最高只有93 %。MS + 6-BA 2 mg/L + NAA 0.05 mg/L最适合于芽的诱导, 诱导率达到100 %。再生苗在MS + NAA 0.1 mg/L 培养基中生根完成植株再生。带单个侧芽的茎作为外植体接种在MS + 6-BA 1 mg/L + NAA 0.05 mg/L 培养基中, 一个月以后形成无数丛生芽。     

大白菜子叶离体培养再生植株

 探讨了植物激素、AgNO₃ 和琼脂浓度对大白菜子叶培养芽再生和植株再生的影响。结果表明:优化培养基条件为MS 培养基中加入5 mg / L BA、0. 5 mg/ L NAA、2 mg/ L AgNO₃ 和1. 2%~ 1. 6 %琼脂。培养过程中, 子叶的乙烯释放量对芽再生起很重要的作用, 具有高芽再生率的基因型或高浓度琼脂的培养条件下, 子叶产生的乙烯量较少。培养基中有AgNO₃ 存在时, 尽管子叶的乙烯释放量增加, 芽再生率也有提高。对子叶的乙烯释放量和不定芽再生的关系进行了讨论。     

蝴蝶兰未受精胚珠离体培养的研究

 以蝴蝶兰大孢子母细胞时期的胚珠为外植体进行了离体培养的研究。结果表明, 在VW +BA0.2 mg·L ^{- 1} +NAA 0.2 mg·L ^{- 1} +蔗糖2.0% +植物凝胶0.3%中蝴蝶兰的大孢子母细胞可以发育至二核胚囊; 在VW +BA 0.2 mg·L ^{- 1} +NAA 0.2 mg·L ^{- 1} +蔗糖2.0% +植物凝胶0.3% +椰子汁10%中大孢子母细胞可以发育至四核胚囊或形成胚性细胞团, 这些胚性细胞团有可能发育成单倍体植株。     

草莓花药离体培养获得单倍体植株

作者扼要叙述了目前为止国际上用花培或其他方法获得草莓单倍体的进展情况。作者用东方草莓的花药离体培养得到了植株,并经染色体数检定确证为单倍体。这些植株已分别低温保存、移入土盆试栽、用秋水仙碱加倍处理。盆栽成活的已达五个多月。