外源性亚精胺对鼠卵巢生殖激素受体基因表达的影响

为探讨外源性亚精胺对鼠卵巢生殖激素受体基因表达的影响,采用不同质量分数(0.05、0.10和0.15 mg/g)亚精胺腹腔注射6周龄昆明鼠,24 h后采集卵巢组织样品,应用实时荧光定量聚合酶链式反应检测卵巢组织中促卵泡激素受体、促黄体生成素受体、雌激素受体1、雌激素受体2和雄激素受体基因表达量。结果显示:与对照组相比,0.05 mg/g亚精胺处理组卵巢促黄体生成素受体表达量显著高于对照组(P0.05),0.15 mg/g组促黄体生成素受体表达量显著低于对照组(P0.05);随亚精胺处理量的增加,卵巢组织中促卵泡激素受体、雌激素受体1、雌激素受体2和雄激素受体表达量均呈逐渐增加的趋势,且均在0.15 mg/g处理组中的表达量显著高于对照组(P0.05)。综上表明,亚精胺可通过介导鼠卵巢组织生殖激素受体基因表达来参与调控鼠卵巢功能。     

腹腔注射亚精胺对小鼠卵巢组织多胺含量及代谢相关基因表达的影响

【目的】研究腹腔注射亚精胺对鼠卵巢组织多胺代谢的影响。【方法】给鼠腹腔注射不同剂量亚精胺[0(对照组、0.05、0.10和0.15 mg·g~(-1)],应用实时荧光定量PCR检测多胺代谢关键基因表达量,应用高效液相色谱检测鼠卵巢组织中多胺含量。【结果】注射0.15 mg·g~(-1)亚精胺时,卵巢组织ODC、OAZ1、SPMS、SSAT、PAOX和SMOX基因表达量显著高于其他3组;注射亚精胺组鼠卵巢组织SPDS表达量均显著低于对照组;注射0.10 mg·g-1亚精胺组鼠卵巢组织中腐胺和亚精胺含量均显著高于对照组,而注射亚精胺对卵巢中精胺含量无显著影响。【结论】外源性亚精胺的腹腔注射可导致鼠卵巢组织中多胺含量以及多胺代谢相关基因表达量发生变化,且具有剂量依赖性,提示外源性亚精胺可通过介导卵巢组织的多胺代谢来参与调控卵巢功能。     

亚精胺对鼠免疫器官指数及炎症因子表达的影响

为阐明亚精胺对鼠免疫器官指数、胸腺和脾脏组织炎症因子表达的影响,采用0、0.05、0.10和0.15mg·g-1(体质量)亚精胺腹腔注射6周龄昆明小白鼠,测定鼠胸腺和脾脏指数,并定量检测胸腺和脾脏组织TNF-α、IL-1β、IL-6和IFN-γ表达量。结果表明:注射0.15 mg·g-1亚精胺组鼠胸腺指数和脾脏指数显著(P0.05)低于对照组;0.10 mg·g-1亚精胺组胸腺组织IFN-γ表达量显著(P0.05)高于对照组;0.05 mg·g-1亚精胺组鼠脾脏组织TNF-α和IL-1β表达量显著(P0.05)低于对照组,0.10 mg·g-1亚精胺组脾脏组织IL-6和IFN-γ表达量均显著(P0.05)高于对照组,0.15 mg·g-1组脾脏组织TNF-α表达量显著(P0.05)低于对照组。由此可见,亚精胺对炎症因子表达具有组织特异性和剂量依赖性。低浓度亚精胺能抑制炎症因子表达发挥抗炎作用,随着亚精胺浓度增加则表现为诱导炎症。     

混合菌种发酵对草鱼肉微生物和生物胺变化的影响

【目的】研究发酵草鱼的pH值、微生物菌群以及生物胺等特性的变化,为发酵草鱼的加工及其卫生品质的控制提供参考。【方法】新鲜草鱼宰杀后,切取宽度3cm的草鱼鱼块,加入30g/kg食盐腌制6h后,混合接种酵母、红曲和乳酸菌,于30℃发酵12h,然后进行微生物检测,并用高效液相色谱检测生物胺的变化。【结果】经过12h的发酵,鱼肉中的组胺、酪胺、腐胺、亚精胺和精胺的含量分别为(0.29±0.10)、(1.31±0.10)、(16.53±0.20)、(3.86±0.15)和(5.18±0.2)mg/kg,明显低于对照组的(1.31±0.10)、(1.96±0.10)、(21.62±0.30)、(10.93±0.20)和(12.69±0.25)mg/kg;发酵鱼肉pH值从起始的6.4下降到5.2;大肠菌群最近似数300CFU/kg,没有检出芽孢菌。【结论】接种混合菌种于30℃发酵12h,可以控制发酵草鱼制品中组胺、酪胺、腐胺、亚精胺及精胺的含量,抑制大肠菌群的生长,保证发酵草鱼制品的卫生品质。     

染料木素对性成熟前小鼠卵巢卵泡发生动力学的影响

【目的】旨在探究染料木素对性成熟前小鼠卵巢卵泡发生动力学的影响，为畜牧生产尤其是种猪饲养过程豆粕型日粮的合理饲喂以及黄酮类替抗产品的科学应用提供参考。【方法】将40只21日龄昆明小鼠随机分为4组，其中对照组处以0.1 mL的溶剂（含5%DMSO的玉米油），试验组分别处以等体积不同浓度的染料木素（25 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg），连续腹腔注射7 d。处理结束后，对部分小鼠进行PMSG-HCG促排并记录输卵管壶腹部的卵子数量，评估卵巢排卵潜能；剩余小鼠采集卵巢制成组织切片进行HE染色，统计分析卵巢内各级卵泡生长和闭锁状态。【结果】输卵管壶腹部成熟卵子数统计显示，染料木素处理组的卵子数量较对照组均显著增加（P<0.05），其中50 mg/kg染料木素组卵子排出数量最多，且显著高于25 mg/kg和100 mg/kg剂量组（P<0.05），而25 mg/kg和100 mg/kg剂量组之间差异不显著（P>0.05）。卵泡计数结果显示，染料木素处理组生长卵泡总数较对照组均无显著差异，但健康生长卵泡显著高于对照组（P<0.05），闭锁生长卵泡则反之（P...     

硒代蛋氨酸对肥育猪血浆和组织硒含量及抗氧化能力的影响

【目的】研究探讨硒代蛋氨酸对肥育猪血浆和组织硒含量及抗氧化能力的影响。【方法】选用64头体重约60kg的杜×长×大三元杂交肥育猪,随机分为4组,每组4个重复。饲粮硒添加水平分别为0(对照组)、0.15mg·kg-1(硒代蛋氨酸)、0.30mg·kg-1(硒代蛋氨酸)、0.30mg·kg-1(亚硒酸钠)。饲养至95kg左右结束试验。【结果】(1)添加硒组血浆、肝脏和背最长肌硒含量极显著高于对照组(P0.01),高水平硒代蛋氨酸硒组显著高于其它两个添加硒组(P0.05)。(2)饲粮添加硒代蛋氨酸提高了肥育猪血浆GSH-Px、CAT活性和T-AOC,降低了MDA含量(P0.05)。同时,硒代蛋氨酸组SOD活性和低水平硒代蛋氨酸组CAT活性显著高于亚硒酸钠组。硒代蛋氨酸或亚硒酸钠提高了肥育猪背最长肌宰后45minGSH-Px活性,降低羰基蛋白质含量(P0.05)。硒代蛋氨酸可降低宰后各时间点背最长肌MDA含量,宰后45min和72h也低于亚硒酸钠组(P0.05)。(3)硒处理组背最长肌GSH-Px基因相对表达量显著高于对照组(P0.05),低水平硒代蛋氨酸硒组SelW基因相对表达量显著高于对照组和高水平亚硒酸钠硒组(P0.05)。【结论】硒代蛋氨酸在血浆和组织中硒沉积率较高,抗氧化作用较强。     

SIRT1基因对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响

【目的】探讨沉默信息调节因子1(Silent information regulator1,SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。【方法】选取牛卵巢上直径2～6mm的卵泡,用注射器抽取卵泡中的颗粒细胞,进行体外培养。根据牛SIRT1基因的核苷酸序列,构建了4条干扰载体(shRNA-SIRT1-1597、shRNA-SIRT1-1471、shRNA-SIRT1-1186、shRNA-SIRT1-1306)及1条阴性对照载体(shRNA-NC),利用脂质体将质粒转入牛卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR法筛选出干扰效果最佳的干扰载体用于后续试验。以转染shRNA-SIRT1-1471的颗粒细胞为干扰组,转染sh-RNA-NC的颗粒细胞为阴性对照组,不做处理的颗粒细胞为空白对照组,采用CCK-8法检测转染后24,36,48和60h各组颗粒细胞增殖情况,用流式细胞术检测转染后24,36和48h各组颗粒细胞的细胞周期变化情况。【结果】转染后48hshRNA-SIRT1-1471干扰的颗粒细胞SIRT1表达量显著低于其他处理组(P0.05),故选用shRNA-SIRT1-1471作为最佳干扰载体。转染后24,36,48和60h,干扰组颗粒细胞增殖效果显著高于空白对照组和阴性对照组(P0.05);转染后24～48h干扰组与空白对照组和阴性对照组相比G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高,从而使更多细胞进入M期进行正常的有丝分裂,促进细胞增殖。【结论】SIRT1能抑制牛卵泡颗粒细胞的增殖,并阻滞细胞周期的进程。     

CTNNB1对猪卵巢颗粒细胞的调控

【目的】卵巢颗粒细胞的增殖和分化是原始卵泡生长启动的关键因素,卵巢颗粒细胞过度凋亡是卵泡闭锁的主要原因,因此卵巢颗粒细胞的功能对卵泡生长发育、排卵、激素分泌等至关重要。研究通过探究连环蛋白β1（catenin beta 1, CTNNB1）对猪卵泡发育过程中颗粒细胞的增殖、凋亡及类固醇激素分泌等功能的影响,为猪卵泡发育的分子调控机制研究提供参考。 【方法】利用RNA抽提、实时定量PCR（Quantitative real time PCR, qRT-PCR）等方法,构建CTNNB1在母猪卵巢、肌肉、大脑等9个组织的表达谱;检测母猪性成熟过程中卵巢组织和小（≤3 mm）、中（3—6 mm）、大（≥6 mm）卵泡颗粒细胞中CTNNB1的表达情况。构建CTNNB1的真核表达载体及合成siRNA,转染至猪卵巢颗粒细胞,采用EdU、Annexin V- FITC/PI双染、ELISA等方法,检测CTNNB1对颗粒细胞增殖、凋亡、类固醇激素分泌的影响,以及对类固醇激素合成通路重要基因转录表达的影响。【结果】与肌肉、大脑等组织相比,CTNNB1在卵巢中mRNA表达水平最高。性成熟母猪卵巢中CTNNB1转录水平显著高于性成熟前和性成熟后的母猪;卵巢卵泡中CTNNB1转录和蛋白水平随卵泡发育明显上调;且卵巢颗粒细胞中CTNNB1转录和蛋白水平也随卵泡的发育逐渐上调。更重要的是,CTNNB1显著促进颗粒细胞增殖,抑制颗粒细胞凋亡;CTNNB1能够上调CYP1A1和HSD17B7的转录水平,下调CYP11A1、ESR1、ESR2、FSHR、LHR和NR5A1等类固醇激素合成相关基因的转录水平,进而促进颗粒细胞雌激素的分泌,抑制颗粒细胞雄激素和孕激素的分泌。【结论】本研究证实CTNNB1可能通过促进颗粒细胞增殖及雌激素的合成和分泌,抑制颗粒细胞凋亡及雄激素、孕激素的合成和分泌,进而促进卵泡的生长发育。     

菝葜醇提物对小鼠脂肪代谢酶的影响

【目的】研究菝葜醇提物(SCE)的成分及对小鼠体内脂肪代谢酶的影响。【方法】采用HPLC等方法分析SCE的成分组成。将50只雌性ICR小鼠随机分成5组,分别为对照组、高脂组、高脂添加0.25%、0.50%、1.00%SCE。投喂8周后,解剖,摘取小鼠的肝脏及腹腔内脂肪(IPAT)并称量。测定小鼠肝脏中肉毒碱转移酶(CAT)、酰基辅酶A氧化酶(ACO)、脂肪酸合成酶及磷酸腺苷激活蛋白激酶(AMPK)活性及mRNA表达量。【结果】SCE中的总多酚、总黄酮、总三萜的含量分别为:(42.54±0.45)%、(29.69±0.37)%、(14.03±0.21)%,其中落新妇苷、黄杞苷、绿原酸、白藜芦醇的含量分别是(23.65±0.36)mg/g、(7.97±0.03)mg/g、(13.65±0.19)mg/g、(7.46±0.15)mg/g。与高脂组相比,SCE喂养小鼠的体质量及体质量增加显著降低,0.50%及1.00%SCE明显减少IPAT质量。0.50%以上SCE的CAT、ACO、AMPK活性与高脂组相比显著提高。SCE明显上调CAT、ACO、AMPK的mRNA表达量。【结论】SCE中富含酚酸类化合物,可通过激活AMPK,促进脂肪酸氧化,减少脂肪沉积和体质量增加。     

SIRT1基因对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响

【目的】探讨沉默信息调节因子1(Silent information regulator1,SIRT1)对牛卵泡颗粒细胞增殖及细胞周期的影响。【方法】选取牛卵巢上直径2～6 mm的卵泡,用注射器抽取卵泡中的颗粒细胞,进行体外培养。根据牛SIRT1基因的核苷酸序列,构建了4条干扰载体（shRNA-SIRT1-1597、shRNA-SIRT1-1471、shRNA-SIRT1-1186、shRNA-SIRT1-1306）及1条阴性对照载体（shRNA-NC）,利用脂质体将质粒转入牛卵泡颗粒细胞,通过实时荧光定量PCR法筛选出干扰效果最佳的干扰载体用于后续试验。以转染shRNA-SIRT1-1471的颗粒细胞为干扰组,转染shRNA-NC的颗粒细胞为阴性对照组,不做处理的颗粒细胞为空白对照组,采用CCK-8法检测转染后24,36,48和60 h各组颗粒细胞增殖情况,用流式细胞术检测转染后24,36和48 h各组颗粒细胞的细胞周期变化情况。【结果】转染后48 h shRNA-SIRT1-1471干扰的颗粒细胞SIRT1表达量显著低于其他处理组（Plt;0.05）,故选用shRNA-SIRT1-1471作为最佳干扰载体。转染后24,36,48和60 h,干扰组颗粒细胞增殖效果显著高于空白对照组和阴性对照组（Plt;0.05）;转染后24~48 h干扰组与空白对照组和阴性对照组相比G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著升高,从而使更多细胞进入M期进行正常的有丝分裂,促进细胞增殖。【结论】SIRT1能抑制牛卵泡颗粒细胞的增殖,并阻滞细胞周期的进程。