猪传染性水疱病与口蹄疫的快速鉴别诊断——用反向间接血凝和血凝抑制试验检测抗原与抗体

用反向间接血凝试验,检测猪水疱病类病料(水疱皮或水疱液)共18个样品,其中检出:9个口蹄疫O型抗原,6个猪传染性水疱病抗原,3个未能检出.以2日龄乳鼠保护试验作比较,结果相符合.抽样作补体结合反应试验,结果也相符.间接血凝抑制试验,可以测出康复或免疫血清中的抗体.口蹄疫O型康复血清滴度一般较低(1∶20至1∶160),高免血清较高,有的滴度可达1∶5120.间接血凝试验在3～7小时内,可同时作出口蹄疫或猪传染性水疱病的鉴别诊断,快速、简便、特异性强,可作为该两病的流行病学调查之用.     

猪传染性胃肠炎的快速诊断——用反向间接血凝试验检测猪传染性胃肠炎的抗原

本试验用反向间接血凝试验检测人工感染传染性胃肠炎病猪的抗原。结果表明,以小肠内容物和生前拉出的粪水作为检验材料较为适宜;滴度一般为1:128～1:2048;检验时间,一般2～3小时。以小肠粘膜作检验,滴度虽相当高,但非特异性凝集较多。 血球致敏条件,采用1％双醛固定绵羊红血球悬液。pH4.0醋酸缓冲液稀释。每毫升血球悬液含IgG80～160微克。在37℃致敏3～4小时最为适宜。致敏血球在4℃可保存198～227天。血凝试验结果判断标准,应以血清中和后抑制4个凝集孔以上,作为阳性。检出率为42/47(89.36％),以其他致敏血球作血凝试验和其他血清作抑制试验作比较,证明本试验的特异性相当可靠。 检测猪传染性胃肠炎的抗原,一般采用细胞培养和荧光抗体技术。前者比较困难,要传几代,才能获得细胞致病效应,且往往不上细胞。后者则适用于早期急性病例,在发病后期,尤其在上皮再生时期不易检出。采用间接血凝试验,国外仅见用于检测抗体,用作抗原检验,中外文献尚未见报导。本试验用反向间接血凝试验,检测人工感染猪的小肠粘膜、小肠内容物及粪水中的抗原,获得初步结果。     

间接血凝试验检测鸡传染性法氏囊病抗体研究

本试验用鸡传染性法氏囊病(IBD)弱毒抗原致敏绵羊红细胞(SRBC),通过间接血凝试验(IHA)检测了10份接种 IBD 疫苗后第35日龄鸡的血清,10份高免血清,10份未免疫健康鸡血清,并辅以对流免疫电泳(CIEP)相对照。结果 IHA 与 CIEP 的阳性符合率为94.7％,并通过鉴别试验和间接血凝抑制试验,证明此法具有很高的特异性。     

伪狂犬病毒血凝及血凝抑制试验

对两株伪狂犬病毒在４、２８、３７℃下进行血凝试验（ＨＡ）和血凝抑制试验（ＨＩ）。试验结果表明，伪狂犬病毒能够凝集小白鼠红血球，ＨＡ可被抗伪狂犬病毒的高免血清特异性抑制（１：６４）。并不受温度的影响。因此，该方法是诊断伪犬病的一种快速、简便、易于推广的方法。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝性的研究

用中国和澳大利亚分离的Ａ型魏氏梭菌培养液、Ⅰ型卵磷酯酶Ｃ和胰酶处理鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ），制备的血凝抗原能凝集鸡红细胞，为鸡传染性支气管炎的诊断提供了方法。对鸡传染性支气管炎Ｍ（４１）、Ｈ（１２０）、Ｈ（５２）、Ｇｒａｙ、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｔ、ＧＩＢＶ等７个毒株进行了血凝性的比较，以Ｈ（１２０）毒株血凝价最高，其次是Ｍ（４１）、ＧＩＢＶ、Ｇｒａｙ，而Ｈ（５２）、Ｃｏｎｎｅｃｔｉｃｕｔ、Ｔ等毒株血凝性低或无血凝性。作者还对影响鸡传染性支气管炎病毒血凝试验的各种因素进行了研究。     

新城疫病毒广西强毒株的分离与鉴定

从广西某规模化鸡场两个鸡群病死雏鸡中分离到2株有血凝性的病毒，这2株病毒的血凝性均能被新城疫标准阳性血清抑制和中和，经过血凝(HA)试验、血凝抑制(HI)试验、血清中和试验和RT-PCR检测结果，确定为新城疫病毒。2株病毒的鸡胚平均死亡时间(MDT)分别为52和54h，脑内致病指数(ICPI)分别为1．975、1．875；鸡胚半数致死量(ELD50)分别为：10^-9.38／0.1mL、10^-9.68／0．1mL，实验结果证明该2株病毒为新城疫病毒强毒株。     

间接血凝试验检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体

以猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）病毒致敏猪红细胞作诊断液,用间接血凝试验（IHA）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体。检测了可疑猪场80份血清样本,PRRS阳性32份,阳性率40%,与ELISA试验比较符合率98%。用此方法检测PRRS疫苗免疫猪血清,发现其抗体水平在初免后15天升高,二免后15天达最高峰,二免后45天抗体水平消失。     

应用正向间接血凝试验检测山羊痘抗体

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-200柱层析的方法纯化山羊痘病毒,以病毒抗原致敏绵羊红细胞建立了山羊痘正向间接血凝试验,并进行了最佳试验条件的摸索.结果表明,试验所制备的诊断液能与山羊痘参考阳性血清发生特异性凝集,其凝集现象能被山羊痘阳性抗原特异性抑制,与其它常见的动物病阳性血清无交叉反应.用本方法及琼脂扩散试验对山羊痘血清进行检测,IHA阳性检出率为89.1%（41/46）;而AGP阳性检出率为34.8%（16/46）.表明正向间接血凝试验比琼脂扩散试验敏感性高.本次试验制备的正向间接血凝试验诊断液可用于兽医临床上进行快速诊断.     

传染性法氏囊病病毒DNA疫苗的免疫原性研究

 将传染性法氏囊病病毒弱毒株 (IBDV JD1)和强毒株 (IBDV ZJ2 0 0 0 )的基因组A节段全长cDNA、多聚蛋白 (VP2 /VP4/VP3)和主要宿主保护性抗原 (VP2 )基因 ,分别克隆入两种真核表达载体pCI和 pcDNA3,构建成 12种真核表达质粒。将制备的DNA疫苗以 2 0 0 μg的剂量经腿肌和皮下结合途径首免 14日龄SPF鸡 ,2 8日龄以相同的剂量二免 ,二免后 14d攻击IBDV标准强毒BC6 / 85株。结果表明 ,含A节段或多聚蛋白基因的表达载体均能诱导较高水平的中和抗体并能提供对强毒的免疫保护 ,多聚蛋白基因构建成的DNA疫苗与弱毒苗B87的免疫效果相当 ;编码VP2基因的DNA疫苗仅能诱导很低水平的中和抗体 ,几乎不能提供免疫保护 ;以 pCI为表达载体的免疫效果优于pcDNA3;源于ZJ2 0 0 0株基因构建成的DNA疫苗诱导的免疫反应优于JD1株 ,提示DNA疫苗的免疫效果与VP2蛋白的构象、表达载体的调控元件和毒株差异等因素有关。     

鸡传染性支气管炎病毒Jin13株的分离与鉴定

为了对近年从郑州郊区鸡群中分离到的1株传染性支气管炎病毒(Jin13株)进行定型鉴定,作者采用气管环(TOC)中和试验、血凝抑制(HI)试验、单抗交叉ELISA、序列分析和免疫试验对其进行了研究。气管环(TOC)中和试验和血凝抑制(HI)试验表明Jin13病毒只与M41阳性血清反应,而与其它ND、EDS76、H9AI、IBD标准阳性血清不发生反应,序列分析证实该分离毒Jin13株是IBV。在交叉气管环(TOC)中和试验和交叉血凝抑制(HI)试验中Jin13株与肾变型Y株不交叉(R≤0.25),而与马萨株血清型的M41株和H52株有明显交叉(0.25≤R≤0.8);单抗交叉ELISA结果显示Jin13株与针对M41株的J1单抗有很好的反应(≥640～1 280),而与针对肾变型Y株的单抗C2几乎不反应(≤40),这进一步证实了Jin13与呼吸型M41株、H52株属同一血清型。与M41株相比较,Jin13株S1氨基酸序列在第126,386,390,461位出现了突变,又在S1基因第1 166位出现一个新Aiu I酶切位点,是M41株的一个变异株。对Jin13株纯化后原代毒进行免疫效力检测证实其免疫原性优于M41株和H52株。Jin13毒株是一株免疫原性良好的IBV地方流行毒株。     

鸡传染性法氏囊病高免血清的制备与检验

[目的]探索一种新的制备鸡传染性法氏囊病高免血清的方法。[方法]采用IBDV灭活苗对27日龄SPF鸡作基础免疫,活疫苗作3次加强免疫,四免后21 d采血制备高免血清。[结果]试验结果表明随着免疫次数的增加,试验鸡IBD中和抗体滴度逐步增加,一免和二免后中和抗体分别为12 log2和13 log2,三免和四免后中和抗体达到最高值15 log2。[结论]采用该方法免疫SPF鸡,有效保护了法氏囊不受损伤,3次免疫即可获得高效价的IBDV抗血清。     

伪狂犬病病毒(PRV)不同毒株抗原相关性研究

为了解PRV不同毒株之间的抗原性差异,评价弱毒FB株预防新型PRV的潜力,以4株PRV(FA、FB、Bartha-K61和FJ2012)毒株及其高免血清为材料,应用交叉中和试验测定PRV不同毒株的抗原性差异,通过FB免疫猪攻毒试验评价弱毒FB株对新型PRV的保护潜力。结果表明:中和抗体测定表明兔抗FB株、FA株、Bartha-K61株和FJ2012株高免血清的中和效价分别为1∶54、1∶91、1∶91和1∶215。交叉中和试验显示FB株与FA株、FB株与FJ2012株、FA株与FJ2012株的抗原相关性(R值)均大于0.8,Bartha-K61株与FA株、FB株、FJ2012株的R值均小于0.4,表明FB株与FJ2012株的抗原相关性高于Bartha-K61株与FJ2012株。仔猪免疫攻毒试验显示FB免疫猪能抵抗新型PRV(FJ2012株)的攻毒,保护率100%。提示PRV弱毒FB株有望成为预防新型猪伪狂犬病毒(FJ2012株)的疫苗候选株。     

猪口蹄疫与猪水疱病鉴别诊断

有一种临床症状十分相似的猪水疱性疾病,但病情比猪水疱病严重。病猪四蹄常呈严重的水疱、溃烂和蹄壳脱落,伏地不起和尖叫,并伴有体温升高,尤其是鼻端出现较多水疱,大而透明,一般约占30％左右。水牛也感病,但同舍黄牛未见发病。猪水疱病康复猪和注射猪水疱病免疫血清猪仍对此病有高度易感性。为了鉴定此病的性质,进行了研究。     

家蚕表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的免疫原性初步研究(英文)

在家蚕培养细胞及幼蚕中表达传染性法氏囊病病毒（IBDV）主要宿主保护性抗原VP2蛋白的基础上,初步研究了该表达产物的免疫原性。Western免疫印迹和ELISA均检测到春蚕和秋蚕中的VP2蛋白活性。含VP2的春蚕蚕血制成的注射疫苗皮下注射18日龄非免疫鸡,两周后二免;含VP2的秋蚕蚕血冻干制成口服疫苗,隔天喂服18日龄非免疫鸡。于首免后第10,13,21,28,37日分别采血,第37日攻毒。病毒血清中和试验显示注射组及口服组的中和抗体滴度最高可达1∶4211.3和1∶3118.9,攻毒结果显示它们对IBDV中国标准强毒株BC6/85的攻击保护率为100%和80%。以上研究表明家蚕表达的VP2蛋白具有良好的免疫原性,从而为开发实用化低成本的疫苗打下了扎实基础。IBDV亚单位疫苗的口服免疫有效是一个重要发现。     

猪瘟的快速诊断——用反向间接血凝试验检测猪瘟抗原

以猪瘟免疫血清提取1gG,致敏用丙酮醛、甲醛固定的绵羊红血球,作反向间接血凝试验,可以检出猪瘟病料(脾及淋巴结)中的抗原。以其他IgG,如出败血清IgG、正常猪IgG致敏的血球作对照试验,非特异性凝集极小。以健康猪或其他高热病如出败、猪丹毒、弓形体病猪脾脏作阴性样品对照,血凝滴度也很低或阴性。以猪瘟高免血清作血凝抑制试验,有明显抑制作用。说明这种试验,对猪瘟抗原是有特异性的,可以作为猪瘟诊断用。 在40头血毒猪中,其脾脏有31头(77.5％)是阳性,淋巴结有30头(75％)是阳性。在此40头猪中,仅有3头在脾或淋巴结均为阴性,未检出抗原,因此,实际有37头(92.5％)的脾脏或淋巴结或两者都检出猪瘟抗原。但是,在病猪血液中不能检出抗原(凝集滴度过低),在脾脏浸出液中,如含有血色素过多,也不易检出。在新鲜采取的脾脏或淋巴结中,非特异性凝集不易排除,影响检出结果。脾脏或淋巴结1克剪碎,加蒸馏水或生理盐水5毫升,在8—10℃静置1—2天后,即可排除大部分非特异性凝集。堪称猪瘟诊断中最简便的方法之一,具有血清学的一般特异性。但尚缺乏天然病例的试验。     

醛化红细胞在鸡新城疫血凝和血凝抑制试验中的应用

血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）是疫情免疫监测及病毒鉴定的传统方法。然而此方法中一直使用的新鲜鸡红细胞由于性质不稳定,质脆易碎,保存稍久即可能污染细菌或溶血;应用时现采现配,麻烦费时,而且不同的鸡只或同一鸡只不同时期所采的红细胞的敏感性都可能存在差异。因此,试验重复性差、不易标准化,影响检测结果。本试验采用醛化红细胞作指示剂,对鸡新城疫病毒做了HA和HI平行比较试验,以检验醛化红细胞应用于病毒抗原和抗体检测的可行性。     

鸵鸟新城疫病毒微量血凝抑制试验影响因素的研究

对鸵鸟新城疫病毒微量血凝抑制试验进行了研究,找到了影响该试验的主要因素,即被检血清中的非特异血凝抑制因子和凝集因子、稀释剂及其pH值、实验室温度、鸡红细胞的来源等。消除这些因素的影响,可明显提高这一试验的准确性。     

用间接血凝法诊断绵羊东毕吸虫病的研究

用间接血凝法对绵羊东毕吸虫病的诊断作了试验及其研究。在试验中采用戊二醛固定绵羊红血球,对影响血凝效果的诸因素作了测定。作者认为在 pH6.8条件下,用每 ml 含20μg 蛋白质浓度的雄虫粗抗原致敏1:20000鞣酸处理的红血球获得的试验效果最佳。被检血清在1:160以上的稀释度凝集时,定为阳性。用间接血凝法对近百只寄生有东毕吸虫的绵羊和数十只寄生有其它蠕虫的绵羊作了试验观察。该方法对东毕吸虫病绵羊的检出率为91.11%。由肝片吸虫,前后盘吸虫病绵羊引起的假阳性率为8.6%。寄生有消化道线虫的绵羊均为阴性。该试验结果表明,间接血凝法诊断绵羊东毕吸虫病有较高的敏感性,较好的特异性和重复性。用间接血凝法和粪孵法分别对20只患有东毕吸虫病的绵羊作了诊断试验。其结果,间接血凝法对东毕吸虫病绵羊的检出率比粪检法高20%。     

血凝试验和血凝抑制试验的影响因素及应对措施

介绍了血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）中的常见问题,主要包括：对照孔凝集;全部凝集;红细胞全部下沉;标准阳性对照血清的抗体效价与原结果误差大于1个滴度;泪滴状流淌（完全血凝抑制）线细等;结果出现慢或结果出现快,并且整板无凝集现象等。分析了其影响因素,并提出了应对措施。     

湖南山羊传染性脓疱首次诊断

1991年3月我院胚胎移殖山羊和会同县农户山羊,口角上、下唇等部长有瘤状硬痂,疑为羊口疮.利用自然病例痂皮毒悬液,划痕接种健康山羊和家兔,山羊能复制出与自然病例相同的疾病,家兔亦能感染发病.利用人工感染康复家兔制备的高免血清,经琼脂扩散试验和对流免疫电泳试验均可出现特异性沉淀线,从而初步确诊本病为羊传染性脓疱.