生防细菌ML-3抗菌蛋白稳定性研究

为确定ML-3表达的抗菌蛋白在不同外部环境下的稳定性,本研究采用不同温度、p H、紫外光照时间、金属离子、蛋白酶处理,对ML-3抗菌蛋白抑菌性进行研究。结果表明:该抗菌蛋白在低于60℃、p H5～8、紫外光照24h下可以保持较高抑菌活性;对Cu2+和Mg2+敏感,对Na+、K+、Zn2+和Fe2+不敏感;对胃蛋白酶和胰蛋白酶敏感,对蛋白酶K不敏感。提示ML-3抗菌蛋白在田间生物防治中具有一定应用潜力。     

西瓜枯萎病生防菌XG-1拮抗蛋白的分离纯化(英文)

[目的]分离纯化枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株XG-1的抗西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp niveum FON)的拮抗蛋白。[方法]通过硫酸铵分级沉淀获得粗蛋白,采用DEAE-Sepharose FF离子交换柱和Sephacryl S-100凝胶柱层析进行分离纯化,对具抗西瓜枯萎病菌的蛋白纯进行MALDI-TOF-MS结构分析。[结果]该拮抗蛋白与来源于枯草芽孢杆菌(B.subtilis)的鞭毛蛋白(gi|14278900)同源性较高,蛋白分值为248,覆盖率为63%,推测该拮抗蛋白可能是菌株XG-1的一种鞭毛蛋白,分子量约为30.6kD。[结论]该研究为阐明生防菌XG-1的作用机理提供理论依据,为西瓜枯萎病的防治提供重要的参考。     

2株生防细菌协同拮抗马铃薯疮痂病及其防治效果研究

为筛选出对马铃薯疮痂病具有显著拮抗作用且较强田间防效的生防细菌,采用室内平皿拮抗及田间防效应用试验,检测菌株对马铃薯疮痂病的抑制效果.采用对峙培养试验确定了荧光假单孢菌、解淀粉芽孢杆菌菌体及其发酵菌液对马铃薯疮痂病菌均有明显抑菌效果,抑菌圈直径分别为11、5 mm和15、9 mm;将2种菌株发酵菌液按照1:1、2:1复配后,抑菌圈直径分别提高至17、28 mm,说明2种菌液复配对马铃薯疮痂病菌的抑制作用可以起到一定增效效果.通过田间防效试验验证了单一菌肥施用及2种菌肥混合施用对马铃薯疮痂病的防治效果.单一菌肥对马铃薯疮痂病的防效荧光假单孢菌(73.18％)优于解淀粉芽孢杆菌(49.31％),而2种菌肥配施防效显著优于单一菌肥,防效达91.7％.说明荧光假单孢菌及解淀粉芽孢杆菌2种菌肥配施可以有效防治马铃薯疮痂病,在田间应用及推广过程中具有巨大的潜力.     

黄瓜白粉病拮抗细菌的筛选鉴定及其生防效果

为发掘对黄瓜白粉病有较好防治效果的生防菌株,对黄瓜白粉病根际土壤细菌进行分离纯化,采用盆栽活体生测方法对白粉病拮抗细菌进行筛选,发现1株对黄瓜白粉病生防效果较好的细菌SDNY-038。经过菌株鉴定以及进一步的生测验证表明,该菌株属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)细菌,对黄瓜白粉病具有一定的防治效果,7、14 d后生防效果分别达到78.00%、84.67%,与阳性对照药剂相比,防效施高55.93、66.37百分点,该菌株具有进一步开发成为生物农药的潜质。     

棉花黄萎病菌拮抗细菌TYG-2抑菌蛋白的分离纯化

拮抗细菌TYG-2是从根际土壤中分离得到的一株芽孢杆菌,其菌株发酵液产生的抑菌物质对棉花黄萎菌具有较强的抑制作用。为了得到它的抑菌活性组分,将TYG-2菌株去菌体发酵液经硫酸铵沉淀,得到的沉淀物脱盐后经DEAE-Sepharose Fast Flow分离得到4个组分,经抑菌活性测定得到一个抑菌活性组分,再通过Sephacry S-100凝胶过滤分离得到两个组分P1和P2,经检测表明P1组分对V.dahliae的菌丝生长具有抑制作用,为有效抑菌活性组分。经SDS-PAGE电泳纯化为单一蛋白带,分子量约为30kDa。     

香樟黑斑病病原菌鉴定及其拮抗菌B505的生防效果

为明确引起香樟黑斑病的病原菌,发掘防治该病害的生防细菌资源,根据科赫法则,采用组织分离法对引起香樟黑斑病的病原菌进行分离纯化。依据形态特征及ITS、 Alta1、gdp基因对病原菌进行分类鉴定;测定不同培养基、温度、pH等因素对病原菌生长的影响;采用平板对峙法筛选香樟黑斑病拮抗细菌,并对其进行抑菌活性试验。结果表明,引起香樟黑斑病的病原菌为互隔交链孢菌Alternaria alternata,其最佳生长温度为25 ℃,最适pH为6.5,最适培养基为PDA培养基。筛选获得1株对香樟黑斑病有较强抑制作用的菌株B505,鉴定为贝莱斯芽胞杆菌Bacillus velezensis,该菌株可强烈抑制香樟黑斑病病原菌的菌丝生长和孢子萌发,对香樟离体叶片黑斑病的抑制率为55.6%,以上结果为生物防治香樟叶部病害提供了新的思路。     

生防细菌A57的鉴定及拮抗蛋白理化性质的研究

通过培养形态、生理生化特征以及16S rDNA的分子序列同源性分析,16S rDNA测序结果在GenBank数据库进行同源性比较,确定A57为短芽孢杆菌(Brevibacillus sp.)。采用不同浓度硫酸铵沉淀法提取拮抗蛋白。以枯萎病菌作指示菌,A57在70%的硫酸铵饱和度下拮抗蛋白的拮抗活性最大,抑制率为23.7%。对A57拮抗蛋白理化性质研究,结果表明该拮抗蛋白对热均稳定,对氯仿均不敏感,对胰蛋白酶敏感;A57拮抗活性最佳pH值为5～7,强酸(pH3)和强碱(pH9)条件下仍具有部分的拮抗活性。     

小麦全蚀病拮抗细菌Z0-j的鉴定及其生防潜力评估

为获得针对小麦全蚀病的优质生防资源,从16S rDNA序列分析、抑菌效果及显微观察、活性物质稳定性等方面鉴定和评估内生细菌Z0-j及其生防潜力。结果显示,内生细菌Z0-j为铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa),对靶标菌禾顶囊壳小麦变种(Gaeumannomyces graminis var.tritic)拮抗效果明显,引致靶标菌菌丝畸形、顶端膨大、原生质外渗、细胞膜透性增强的现象。同时,菌株Z0-j活性物质对温度、pH值、紫外光照、超声波以及蛋白酶等外界因素有良好的耐受性。由此可见,内生细菌Z0-j是一株对小麦全蚀病具备良好开发潜力的生防菌株。     

产蛋白酶生防细菌的筛选及其对病原真菌的拮抗作用

从小麦根际土壤中分离到一株高产蛋白酶并对多种植物病原真菌具有拮抗作用的生防细菌T2.通过形态特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析,初步鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).其发酵液经硫酸铵沉淀后的粗酶液可明显抑制棉花枯萎病菌菌丝生长及孢子萌发,在显微镜下观察到棉花枯萎病菌孢子萌发的芽管短、孢子膨大变形呈泡囊状,菌丝呈串珠状膨大、细胞破裂、细胞质外渗,表明该细菌菌株产生的胞外蛋白酶可能与病菌菌丝生长受抑制密切相关.     

苹果树腐烂病菌拮抗枯草芽孢杆菌E1R-j抗菌蛋白的分离纯化

【目的】从枯草芽孢杆菌E1R-j菌株的发酵液中分离纯化抗菌蛋白,分析确其对苹果树腐烂病菌菌丝的抑制作用,为更好地利用该菌株防治植物病害和研制生物农药奠定基础。【方法】采用盐酸沉淀法从E1R-j发酵液中提取粗蛋白,并筛选酸沉淀的最佳pH值,然后通过反相柱RESOURCETMRPC、凝胶柱Superdex-75、阴离子交换柱DEAE-Sepharose和脱盐柱层析技术,提取并分离纯化粗蛋白;在粗蛋白分离纯化过程中,以皿内对峙试验测定蛋白的抗菌活性;通过扫描电镜技术,观察抗菌蛋白对病原菌菌丝的抑制作用。【结果】以pH 4.0盐酸沉淀获得的粗蛋白活性最强,抑菌效果最佳。反相柱RESOURCETMRPC获得的活性峰收集物经凝胶柱Superdex-75、阴离子交换柱DEAE-Sepharose和脱盐柱层析后,得到1个对称的活性峰,其收集物经非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)检测为单一条带,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图谱中显示有2个分子质量相近的条带,表明该抗菌蛋白可能含有2个亚基,2个亚基的分子质量分别为55和60ku,将该活性蛋白命名为EP-1。扫描电镜结果显示,抗菌蛋白EP-1可使苹果树腐烂病菌菌丝出现膨大、弯曲以及原生质外渗等现象。【结论】通过盐酸沉淀及柱层析技术,从枯草芽孢杆菌E1R-j发酵液中分离纯化出一种分子质量为115ku的抗菌蛋白EP-1,其对苹果树腐烂病菌菌丝生长具有明显的抑制和破坏作用。     

辣椒水通道蛋白基因CaTIP1-1启动子的克隆及序列分析（英文）

利用巢式PCR技术分离获得CaTIP1-1基因上游1749 bp的片段。利用PlantCARE软件预测发现该序列含有启动子典型的基本元件TATA-box、CAAT-box及非生物胁迫相关的元件和光应答元件。以PBI121载体为基础,构建CaTIP1-1启动子驱动下绿色荧光蛋白GFP报告基因植物表达载体。利用叶盘法转化烟草获得转基因植株,通过荧光显微镜能够检测到T1代烟草悬浮细胞系能够稳定表达荧光。结果表明该启动子具有驱动绿色荧光蛋白表达的活性。该研究为今后CaTIP1-1启动子在植物基因工程育种中的应用奠定基础。     

5号和504号细菌分离株产生的拮抗蛋白的分离纯化(英文)

Ｒｉｃｅｂａｃｔｅｒｉａｌｂｌｉｇｈｔ（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｏｒｙｚａｅｐｖ．ｏｒｙｚａｅ）ｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｍｏｓｔｓｅｒｉｏｕｓｄｉｓｅａｓｅｓ，ａｎｄｎｏｐｒａｃｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓｃａｎｃｏｎｔｒｏｌｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｅｆｉｃｉｅｎ...     

1株粘细菌CMC0606的分离纯化及其抗菌活性研究

[目的]对成都西岭雪山土壤中粘细菌进行分离鉴定,了解其发酵产物粗提物的抗菌活性。[方法]以滤纸为唯一碳源,得到1株粘细菌CMC0606;通过观察其形态及16SrDNA克隆与测序进行菌种鉴定;向其发酵液中加入大孔吸附树脂XAD-16,收获发酵产物粗提物。[结果]菌株CMC0606被鉴定为珊瑚状珊瑚球菌Corallococcus coralloides CMC0606;其发酵产物粗提物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌及辣椒疫霉具有抑制作用。[结论]菌株CMC0606具有抗细菌和抗真菌的活性,尤其对植物致病菌辣椒疫霉抑制作用显著,具有潜在的研究和开发价值。     

贵州省黔东南州太子参立枯病的病害分析及生防初探（英文）

贵州省黔东南州太子参(Radix pseudostellariae)在每年3~5月份都会发生严重真菌病害,经实地调查、组织分离和显微鉴定,得到主要致病菌为立枯丝核菌(Rhizoctonia solani),其导致的病害为太子参立枯病。同时,还在病土中分离纯化得到对太子参种苗有致病能力的病原菌互隔文链孢霉(Alternariaalternate)。生防试验结果表明,芽孢杆菌(Bacillus spp.)GH18菌株对病原菌立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)和病原菌互隔文链孢霉(Alternaria alternate)的抑菌效果显著。     

小麦纹枯病菌拮抗菌株X2-3的鉴定及其抗菌特性分析

从小麦根际土中分离到一株对小麦纹枯病菌拮抗活性较高的菌株X2-3,为进一步利用该菌株,对其进行了鉴定,并对其抗菌特性进行了分析。根据菌落形态和产酶特征及16S r DNA分析,将菌株X2-3鉴定为辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)。平板对峙法测定其抑菌谱发现,X2-3对Rhizoctonia cerealis、Thielaviopsis basicola等多种植物病原真菌和Phytophthora parasitica等卵菌表现明显的抑菌活性,但对Xanthomonas oryzae pv.oryzae和Ralstonia solanacearum等革兰氏阴性细菌没有拮抗活性。抗菌物质稳定性分析结果发现,粗提纯的抗菌物对蛋白酶K和温度不敏感,表明该物质可能属于非线性蛋白,且具有一定的耐热性。     

Peat1蛋白及其3个缺失突变体的表达与热稳定性分析（英文）

[Objective] The research aimed to reveal the functions of NAC and UBA domains in Peat1's thermal stability.[Method] Fusion expression vectors of Peat1 protein and the 3 deletion mutants were constructed.The recombinant plasmids were induced by IPTG and the target proteins(Peat1,Peat1-△CD99,Peat1-△ND49 and Peat1-△ND108)were expressed obtained by AKTA and its thermal stability was analyzed.[Result] The research found that 3 deletion mutants have good thermal stability like Peat1.[Conclusion] The research demonstrated that the coexistence of NAC or UBA domains is not necessary to thermal stability of Peat1 protein,and they may give the protein particular stability structure seperately.     

3 种生防细菌 2种药剂剂型对芒果 炭疽病菌的拮抗作用初探

3 种生防细菌短短芽孢杆菌（Br evi baci l l us br evi s）HAB-5、枯草芽孢杆菌（Baci l l ussubt i l i s）A178、萎缩芽 孢杆菌（Baci l l usat r ophaeus ）HAB-1、对多种植物病原菌具有较好的拮抗作用。通过优化条件培养、将 3种生防细菌制 备成胶悬剂（SC）和微胶囊（CS）两种剂型、以芒果炭疽病菌（Col l et ot r i chum gl oeospor i oi desPenz. ）C7-2 菌株为靶标病 菌、测试两种剂型对 3种菌拮抗能力的影响。 结果表明、在制备的 3 种生防菌的胶悬剂中、只有 A178 胶悬剂在稀释 10倍和 800倍时抑菌效果好于原始菌株、 其他的均弱于原始菌株、HAB-1 胶悬剂甚至失去了抑菌能力曰3种生防菌 微胶囊剂型中、A178 的 100~800 倍稀释浓度下抑菌效果好于原始菌株、 抑菌能力分别提高 0. 49% 、0. 29% 、3. 04% 曰 HAB-5的微胶囊剂型 10、100、400、800、1 000倍的稀释度下、 抑菌效果都高于原始菌株、 分别提高 5. 00% 、3. 30% 、 5. 11% 、2. 22% 、1. 74% 、4. 25% 、但 HAB-1 微胶囊剂型抑菌效果较其原始菌株减弱、说明微胶囊剂型能够增强 HAB-5 和 A178菌株对病原菌的抑菌作用。     

2株油菜菌核病拮抗内生细菌的筛选鉴定及其拮抗活性初步分析

油菜菌核病是一种严重危害油菜生长的病害。于2017年3月从湖南农业大学生物科学技术学院试验田采集油菜湘油15盛花期植株的根茎叶,采用纯培养法对内生细菌进行分离纯化,共分离得到68株内生细菌;采用基于16S rRNA基因序列的系统发育分析法对内生菌株的多样性进行分析研究;利用琼脂扩散法对内生菌株进行抗菌活性筛选,共筛选出7株抗菌活性较强菌株,分别为Y171004、Y172014、Y173005、Y174007、Y174017、Y177001和Y177002;利用平板对峙法对油菜菌核病病原菌核盘菌的拮抗菌进行筛选,筛选出2株(Y171004和Y177002)油菜核盘菌的拮抗细菌,经初步鉴定为芽孢杆菌(Bacillus),继而对其拮抗活性进行初步分析,其中菌株Y171004的抗菌物质经鉴定为热不稳定性蛋白。研究结果能为该地区油菜内生细菌资源的进一步研究及其在油菜菌核病生物防治等方面的应用提供试验依据和理论指导。     

甘蔗赤腐病菌拮抗细菌TWC2的分离鉴定及其防效研究

由镰孢炭疽菌(Colletotrichum falcatum Went)引起的赤腐病是甘蔗生产上的主要病害之一,发病时可导致甘蔗产量严重损失。为探求赤腐病有效的生防措施,从热带牧草台湾草叶片上分离到一株生防菌TWC2。经形态观察、16S r DNA序列分析和生理生化鉴定,确定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。平板对峙试验结果发现,TWC2菌株对甘蔗赤腐病菌(Colletotrichum falcatum)、香蕉黑星病菌(Macrophoma musae)、橡胶树炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、柱花草炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)、甘蔗环斑病菌(Leptosphaeria sacchari)、王草茎点霉叶斑病菌(Phoma herbarum)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)等病原菌均具有一定的抑制作用。离体叶片接种试验发现,TWC2菌株对甘蔗赤腐病菌的抑制率达72.01%,盆栽试验与离体叶片接种结果一致,表明TWC2菌株对甘蔗赤腐病具有较好的防治效果。该结论为开发甘蔗赤腐病生防方法打下了基础。