鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、传染性脑脊髓炎四联油佐剂灭活疫苗的研究

用NDV La Sota株、IBV M41株、EDS76V HSH23株、AEV Van Roekel株为种毒，分别接种鸡胚或鸭胚，制备各种病毒抗原液，经福尔马林灭活后，采用FIL TRON盒式超滤系统对制苗病毒抗原液进行浓缩，然后按一定比例混合，以司本80及吐温80为乳化剂，10号白油为佐剂，制成ND-IB-EDS76-AE四联灭活疫苗。对四联苗各项技术指标进行了测定，证明本疫苗安全、无任何副作用；免疫10～14d后产生免疫力；ND部分效检，攻毒100％保护，每羽份含ND效价达50～123PD50；IB部分效检，免疫21～28d后攻毒保护率达80％～100％，IBHI效价≥1：64；EDS76效检。免疫后21d HI效价≥1:128;AE效检,保护率达80%～100%。     

蟾酥注射液对新城疫疫苗免疫效果的影响研究

为了探讨蟾酥注射液对新城疫疫苗免疫效果的影响。选取1日龄健康雏鸡240只,随机分成4组,每组60只,设试验组（低剂量组、中剂量组和高剂量组）和对照组,选择不同浓度的蟾酥注射液与新城疫疫苗联合使用作为试验组。分别在21、28、35、42、49和56日龄,通过β-微量法,检测血清中ND-HI抗体;通过MTT法,检测外周血T细胞吸光度值（OD值）;通过称量体重和免疫器官重量的方法,检测免疫器官指数。结果显示：蟾酥注射液各组与对照组比较,ND-HI抗体水平、外周血T细胞转化、胸腺指数、法氏囊指数和脾指数均有不同程度的提高。说明蟾酥注射液能够提高机体的体液免疫和细胞免疫水平,从而增强新城疫疫苗的免疫效果。     

蟾酥注射液对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用

摘要：本实验研究蟾酥注射液对免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。采用药理免疫学方法制造免疫低下的动物模型,测定脾脏重量并计算脾脏指数;ELISA方法检测IgG,IgG1,IgG2b抗体水平;MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应;ELISA方法检测细胞因子（IFN-γ、IL-4、IL-10）水平。测定结果表明,蟾酥注射液能够增强免疫低下小鼠脾脏指数,提高抗体水平;在ConA或者LPS刺激下提高脾细胞增殖率,促进淋巴细胞分泌细胞因子,说明蟾酥注射液在一定剂量下能够缓解氟苯尼考引起的免疫抑制。     

3种免疫植物多糖对法氏囊活疫苗的免疫效果的影响

将60只1日龄北京白鸡,饲养至14日龄,随机分组进行传染性法氏囊中等毒力疫苗的免疫,各组分别添加黄芪、岩藻和油菜3种植物提取的多糖成分,添加剂量为10 mg/只。26日龄进行二免,首免及二免都采用滴鼻点眼方式进行。二免后定期采血检测法氏囊中和抗体效价和外周血淋巴细胞体外转化率。结果表明:二免后2周,除了油菜多糖以外,其他2种多糖添加组的中和抗体滴度与对照组相比无显著差异;各组的淋巴细胞体外转化率显著高于对照组,表明3种植物多糖成分能促进淋巴细胞增殖,有待于进一步开发为传染性法氏囊病的免疫增强剂。     

蟾酥注射液对小鼠淋巴细胞影响的研究

为了研究蟾酥注射液对机体淋巴细胞免疫功能的影响,选择不同浓度的蟾酥注射液作为试验组,分别与小鼠的脾淋巴细胞共同孵育48 h,检测细胞增殖水平的影响;用ELSIA法检测蟾酥注射液对几种重要的细胞因子(IFN-γ、IL-2和IL-12)分泌的影响;应用流式细胞技术检测蟾酥注射液对小鼠脾中T淋巴细胞CD4/CD8表达和细胞周期的影响。结果显示,蟾酥注射液在一定剂量范围内能够显著增强小鼠脾淋巴细胞的增殖能力;能够显著增强IFN-γ、IL-2和IL-12分泌;能够显著提高小鼠脾中CD4+ CD8-和CD4- CD8+表型的T淋巴细胞亚群百分率;能够显著提高小鼠脾中淋巴细胞进入S期的百分率。表明蟾酥注射液在体外能够显著提高淋巴细胞的增殖及功能,说明蟾酥注射能显著地增强机体特异性免疫功能。     

蟾酥注射液对小鼠免疫细胞影响的实验研究

为了观察蟾酥注射液对小鼠的免疫细胞增殖及其分泌细胞因子的作用,采用中药免疫药理学方法,选择不同浓度的蟾酥注射液作为试验组,分别与小鼠的脾淋巴细胞以及LPS或者ConA共同孵育48 h,检测细胞增殖水平的变化;将蟾酥注射液与小鼠腹腔巨噬细胞共培养,检测蟾酥注射液对巨噬细胞吞噬中性红能力的影响;将蟾酥注射液与自然杀伤细胞共培养,检测蟾酥注射液对NK细胞杀伤能力的影响;取脾细胞与蟾酥注射液共培养上清,ELSIA法检测蟾酥注射液对几种重要的细胞因子（IFN-γ、IL-2、IL-12）分泌水平的变化。结果显示蟾酥注射液在一定剂量范围内单独或者协同非特异性丝裂原（Con A或LPS）作用能够显著增强小鼠脾淋巴细胞的增殖能力（P〈0.05或P〈0.01）;蟾酥注射液单独作用可以显著提高巨噬细胞吞噬中性红的能力;蟾酥注射液能够显著提高小鼠NK细胞对靶细胞的杀伤活性;同时蟾酥注射液能够显著增强小鼠脾淋巴细胞分泌Th1型细胞因子。说明蟾酥注射液在体外能够显著提高几种主要免疫细胞的增殖和功能,研究结果显示蟾酥注射具有显著的非特异性免疫增强作用。     

中药蟾酥免疫增强剂对肉仔鸡免疫器官生长发育及免疫活性细胞影响的研究

本研究对肉仔鸡饲料中添加中药蟾酥免疫增强剂后,免疫器官的生长发育情况及免疫器官中免疫活性细胞的变化进行了观察。结果显示,中药蟾酥免疫增强剂组雏鸡胸腺、法氏囊和脾脏等免疫器官的重量和指数明显高于空白对照组,各免疫器官不同区域的T淋巴细胞和浆细胞数也明显增多,说明中药蟾酥免疫增强剂对肉仔鸡免疫器官的生长发育和免疫活性细胞的增殖都有明显的促进作用。     

不同中药复方对蛋鸡ND免疫效果的影响

本试验通过对试验鸡的免疫器官指数和不同日龄新城疫（ND）抗体水平进行检测,来探讨3个不同中药复方对鸡群免疫功能的影响。选取7日龄健康蛋公雏鸡500只随机分10组,并于7d、21d用La-Sota活苗免疫,1-9组从第7天开始分别用3个不同中药复方按饲料量的0.5%、1.0%、1.5%添加,第10组为不添加任何药物对照组。用药组连续给药15d,各组分别于21、28、35、42、49、56、63d采血测定新城疫血凝抑制（HI）抗体水平以及免疫器官指数的变化。添加3个不同的中药复方,复方Ⅰ1.0%、Ⅱ1.0%均能使鸡抗体水平显著提高,35-63日龄抗体水平一直在8-9log2。复方Ⅲ1.5%组与对照组比较差异显著。21、35日龄各指数与对照组比较差异显著,其他日龄无显著差异。3个不同中药复方对对雏鸡的ND抗体水平和免疫器官指数均有一定的提高作用,其中复方Ⅰ1.0%剂量的效果为最佳。     

黄白饮对雏鸡新城疫免疫效果的影响

机体免疫力的高低直接决定机体的抗病力和生产力,中草药在免疫促进方面显示出了独特的优越性,能够特异性地或非特异性地增强机体的免疫力。本次试验分别给免疫新城疫疫苗的雏鸡添加不同剂量(1ml/L、2ml/L、4ml/L)的玉屏风口服液并连续测定各组雏鸡的ND抗体水平和免疫器官指数的变化情况。结果发现,各个给药组雏鸡的ND抗体水平和免疫器官指数均有一定的提高。其中,中剂量组(2ml/L)效果最好,显著优于其它组和对照组。提示玉屏风口服液对雏鸡细胞免疫、体液免疫等具有一定的增强作用。     

不同佐剂对猪传染性胃肠炎病毒S蛋白和猪流行性腹泻病毒S蛋白免疫原性的影响

本研究旨在探究不同佐剂对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白和猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白免疫原性的影响。IPGT诱导重组表达菌株Rosetta(DE3)-pET28a-TGEV-S2/3和BL21(DE3)-pET28a-PEDV-S1/2/3,制备重组蛋白TGEV-S2、TGEV-S3、PEDV-S1、PEDV-S2和PEDV-S3,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,将重组蛋白等量混匀分别与3种佐剂ISA 71VG、ISA 201VG和ISA 15AVG进行乳化制备免疫原免疫蛋鸡;Western blot检测蛋鸡血清抗体效价,免疫过氧化物酶单层细胞染色法(IPMA)检测抗体与病原的反应活性;监测鸡群平均日增重。结果显示,重组蛋白TGEV-S2、TGEV-S3、PEDV-S1、PEDV-S2和PEDV-S3的分子量依次为25 ku、28 ku、26 ku、24 ku和21 ku。Western blot分析显示,5种蛋白均具有良好的免疫原性;疫苗二次免疫后7天抗体效价达到高峰,ISA 201VG佐剂组、ISA 71VG佐剂和ISA 15AVG佐剂组组最高抗体效价依次为64000倍、32000倍和8000倍,对照组未检测到特异性抗体;ISA 71VG和ISA 201VG组对产蛋率下降相对较大,ISA15AVG 佐剂疫苗免疫组对产蛋率影响相对较小,免疫后7天后试验组产蛋率恢复正常。ISA 71VG佐剂组蛋鸡平均日增重显著降低,ISA 201VG和ISA 15AVG佐剂组蛋鸡平均日增重与对照组无显著差异;ISA 201VG佐剂组血清抗体与病毒反应活性良好,中和效价可达1:256。ISA 201VG佐剂配伍的疫苗免疫效果优于其他两种佐剂疫苗。     

蟾酥注射液对马立克氏病的预防作用

为了研究蟾酥注射液对马立克氏病的预防作用,试验采用鸡马立克氏病动物模型来评价蟾酥注射液的预防效果。首先建立感染马立克氏病毒的雏鸡模型,然后通过蟾酥注射液对感染鸡的治疗,应用致病率、治愈率、保护率和相对增重率等指标评价药物对机体的保护作用,深入探讨蟾酥注射液对马立克病毒感染的预防效果。     

蟾酥注射液对马立克氏病疫苗的保护作用

为了研究蟾酥注射液对马立克氏疫苗的保护作用,通过蟾酥注射液对T淋巴细胞增殖率的影响,说明其在细胞免疫水平中的作用;通过蟾酥注射液对B淋巴细胞增殖率的影响,说明其在体液免疫水平中的作用;通过蟾酥注射液对白细胞数量的影响,说明其在非特异性免疫方面的作用;通过蟾酥注射液对巨噬细胞吞噬力的影响,说明其在特异性免疫与非特异性免疫中的作用;通过蟾酥注射液对血清超氧化物歧化酶活力的影响,说明其作为调节剂与马立克疫苗联合使用,具有抗氧化的作用或提高超氧化的作用;通过蟾酥注射液对雏鸡抗体效价的影响,说明其对马立克疫苗抗体产生具有增强的作用;通过蟾酥注射液对免疫器官指数的影响,说明其具有促进免疫器官发育的作用。     

鸡传染性鼻炎二价油乳剂灭活疫苗的近期免疫效力检验

应用３批鸡传染性鼻炎价油乳剂灭活疫苗进行了安全性和近期免疫效力检验,安全性试验采用１５只鸡进行,胸肌注射疫苗４￣５ｍＬ／只后,逐日观察,结果鸡只食欲、精神未见异常,２周后观察,注射部位未发现明显异常和病变。用该疫苗免疫（０．５ｍＬ／ｋｗ ）后的鸡只对Ａ型高致病力菌株的攻击保护率可达１００％,对Ｃ型高致病力菌株的攻击保护率为９３．３％。采用Ｂ－ＥＬＩＳＡ和ＳＰＺＡ对鸡群的抗体水平的评估表明该疫苗可激发产生较高的抗体水平。     

PRRSV弱毒细胞疫苗与灭活疫苗生殖道黏膜免疫效果观察

应用组织学方法比较观察了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)弱毒细胞疫苗与灭活疫苗生殖道黏膜免疫的效果。试验选用5月龄长白×大约克夏二元杂交母猪18头。PRRSV弱毒细胞疫苗和灭活疫苗通过生殖道黏膜免疫接种。结果表明PRRSV弱毒细胞疫苗生殖道黏膜接种组母猪的子宫黏膜上皮内淋巴细胞数较灭活疫苗生殖道黏膜免疫接种组和对照组母猪显著减少(P＜0.01);而且子宫黏膜上皮变矮变薄,变得有些不规则。灭活疫苗生殖道黏膜接种组母猪子宫黏膜上皮内淋巴细胞数与对照组母猪间差异不显著(P＞0.05)。本试验结果显示PRRSV弱毒细胞疫苗经生殖道黏膜免疫接种则对生殖道黏膜上皮内淋巴细胞产生抑制作用。说明PRRSV弱毒细胞疫苗和灭活疫苗经生殖道黏膜免疫效果不理想。     

新城疫-传染性支气管炎-减蛋综合症三联油乳剂苗的研制

以ＮＤ Ｌa Sota株,呼吸道型,ＩＢ（ＲＩＢ）Ｈ１２０株或肾型ＩＢ（ＫＩＢ）ＳＮ９３０１株和ＥＤＳ ＸＮ９２０３株制苗毒株,分别经鸡胚和鸭胚增殖后甲醛灭活。灭活毒液依毒价按比例混合加入油佐剂中,乳化剂成“ＮＤ－ＲＩＢ－ＥＤＳ”和ＮＤ－ＫＩＢ－ＥＤＳ两种三联油乳剂苗。测试结果表明：三联疫苗安全性好,无毒副作用;乳化度、稳定性和通针性良好;免疫效果即,用三联苗免疫２０日龄鸡,免疫后１４、２８、５８d、ＮＤ、ＲＩＢ、ＫＩＢ、ＥＤＳ的ＨＩ抗体均可达７．０和９．２log2以上,于免疫后６０d用相应强毒攻击,８３．３％－１００％的鸡获有效保护。疫苗保护期长,常温避光１８０d和4℃左右３６０d,免疫效果与新制苗无明显差异。     

鸡传染性囊病二价活疫苗攻击保护滴度的测定

使用ＳＰＦ雏鸡进行鸡传染性囊病二价活疫苗的攻击保护滴度的测定。ＳＰＦ雏鸡１４日龄免疫,于免疫后７ｄ、８ｄ、９ｄ、１０ｄ、１２ｄ、１４ｄ采血进行ＩＢＤ中和抗体的测定,同量分别进行标准Ｉ型强毒ＣＪ８０１株和标准变异株强毒１０８４Ａ株的攻击,建立抗体滴度与攻击保护率之间的直线回归方程。二价苗免疫后１４ｄＩＢＤ中和抗体滴度达到２９６８（ＧＭＴ）,其对ＣＪ８０１株和１０８４株的攻击保护率分别为８９．２１％和     

中草药复方制剂对肉鸡新城疫免疫影响研究

将210只1日龄的肉仔鸡随机分成7组,每组30只,在ND免疫过程中按每公斤体重0.2 g添加中草药复方制剂,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别在免疫前5天、3天和免疫当天开始连续饲喂3天,Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ组分别在免疫前5天、3天和免疫当天饲喂1天,对照组（VII组）不喂药,分别于免疫前1天和免疫后14天、21天、28天和40天翅下静脉采血检测ND抗体水平。结果表明,免疫后投药组抗体效价均高于对照组,抗体达到峰值时平均高出20.2-1.6个滴度,其中Ⅲ组与对照组差异显著（P＜0.05）,其他组与对照组差异不显著（P＞0.05）。