拟南芥芥子酶基因TGG4的克隆、表达和酶活性鉴定

芥子酶是一类水解硫代葡萄糖苷的酶,广泛存在于十字花科植物中。人们在拟南芥中已经发现了3个芥子酶基因,分别是TGG1、TGG2和TGG3。通过对拟南芥基因组数据库的搜索,发现3个新的芥子酶基因TGG4、TGG5和TGG6。本研究克隆了TGG4基因全长cDNA序列,构建酵母表达载体,转化毕氏酵母GS115,进行甲醇诱导表达,重组蛋白用离子交换层析柱纯化。纯化的重组蛋白经测定具有芥子酶活性,而且其活性被低浓度的维生素C激活,具有芥子酶的典型特征。芥子酶系统发生树分析进一步表明,TGG4代表一个芥子酶基因新亚家族。     

酵母表达芥子酶基因TGG4、TGG5的酶学特性差异研究

十字花科植物广泛存在芥子酶,并利用芥子酶以抵御病虫害的侵袭。TGG4和TGG5是在拟南芥中发现的新型芥子酶基因,二者基因序列极为相近。本试验通过对转TGG4和TGG5基因酵母的诱导表达及相应重组蛋白的纯化,探讨两个蛋白的酶学差异性。结果表明:TGG4、TGG5的最大Vc激发浓度都为1mmol/L;但是在最适反应温度和最适反应pH上,两个重组蛋白略有不同,TGG4和TGG5的最适温度分别为67℃和57℃,而最适pH分别为6.5和5.5,TGG4比TGG5要耐高温耐碱性;这两个重组蛋白酶活性都受NaCl的抑制。     

植物RNA干涉载体的构建并用于拟南芥芥子酶基因的表达

为了研究RNA干涉在抑制芥子酶基因TGG4和TGG5表达中的作用,本文在TGG4、TGG5编码序列中设计IT45 siRNA的特异靶序列,以拟南芥7SL-4基因为模板扩增启动子和终止子,连接并克隆到植物表达载体pBP5中,构建成了siRNA真核表达载体.同时利用花序浸泡法转化拟南芥.最后酶活测定的结果显示,TGG4、TGG5基因的表达受到了大部分抑制.这说明本研究构建的RNAj载体对基因表达沉默是有效的.     

张家界不同植烟土壤类型腐殖质的组成研究

采用田间调查、取样及室内分析的方法,研究张家界5种不同植烟土壤类型的腐殖质含量、组成、性质。结果表明：胡敏酸碳含量由高到低为：黄壤>水稻土>黑色石灰土>红壤>紫色土;富里酸碳含量由高到低为：黄壤>水稻土>红壤>黑色石灰土>紫色土;胡敏素碳含量由高到低为：黑色石灰土>黄壤>水稻土>红壤>紫色土;胡敏酸/富里酸（HA/FA）为：黑色石灰土>紫色土>水稻土>红壤>黄壤。松结态腐殖质碳含量为：黄壤>黑色石灰土>水稻土>红壤>紫色土;紧结态腐殖质碳含量为黑色石灰土>黄壤>水稻土>红壤>紫色土;稳结态腐殖质碳含量为:红壤>黑色石灰土>黄壤>水稻土>紫色土;松/紧比值由高到低依次为:紫色土>红壤>水稻土>黄壤>黑色石灰土。这说明5种植烟土壤类型中黄壤的腐殖质含量最为丰富,紫色土的腐殖质品质最好,水稻土和黑色石灰土的腐殖质含量和品质均为中等,红壤最差。各腐殖质组分与有机质之间呈显著或极显著相关,胡敏酸和松结态腐殖质可作为衡量植烟土壤肥力的表征指标。     

豚草入侵湖南对植物多样性的影响

采用样方法调查了湖南省6个豚草入侵样地中4～10月杂草的种类和数量,分析了其物种丰富度指数、多样性指数和均匀度指数。结果表明,6个样地采得本地植物83种,其中常见本地植物41种,隶属19科。豚草入侵造成6种生境条件下物种丰富度指数、Simpson多样性指数和Shannon-Wiener多样性指数下降显著或极显著,均匀度指数变化小。豚草群落在不同季节物种丰富度指数变化小,多样性指数和均匀度指数在春夏季上升。表明豚草的入侵对生物多样性有不利影响。     

在控制环境下快速繁殖甘蓝的硫苷含量和黑芥子酶活性

芸苔属作物含有的硫苷（glucosinolates）用黑芥子酶水解时会产生与肿瘤化学防治、植物保护和植物害虫互作有关的物质。本试验在控制环境下栽培快速繁殖的一个甘蓝（B．oleracect L．）基础群体，测定了温度、光子通量和光期对硫苷浓度和黑介子酶活性的作用。在恒定的300μmol／m^2／S光照条件下，12和32℃时叶片中的全部硫苷含量分别比22℃时的高出44％和114％。     

一氧化氮对冷藏桃果实能量代谢的调控作用

能量状态与采后水果的成熟、衰老及生理失调紧密相关。为了研究NO处理在桃果实冷藏期间对其能量代谢的调控机理,选取八成熟"肥城桃"果实,分别用去离子水(对照)、5、15、30μmol·L-1NO溶液和5μmol·L-1c-PTIO(NO清除剂)溶液处理后于0℃下恒温贮藏。分别在果实贮藏当天、第1、2、3、4、5周测定不同处理"肥城桃"果实的冷害指数、硬度、丙二醛(MDA)、过氧化氢、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、单磷酸腺苷(AMP)的含量和能荷水平的变化,以及琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素氧化酶(CCO)、氢离子ATP酶(H+-ATPase)、钙离子ATP酶(Ca2+-ATPase)等线粒体呼吸代谢关键酶的活性变化情况。结果表明:在冷藏过程中,桃果实内ATP、ADP含量,能荷水平及桃果实线粒体内SDH、CCO、H+-ATPase、Ca2+-ATPase活性逐渐降低,而AMP、过氧化氢及MDA含量升高;与对照相比,NO处理能够显著延缓桃果实内ATP、ADP、能荷含量及能量代谢酶活性的降低,抑制过氧化氢、MDA、AMP含量的上升,其中以15μmol·L-1NO处理桃果实最为显著,而NO清除剂c-PTIO处理则加剧了桃果实ATP、能荷含量及能量代谢酶活性的下降以及过氧化氢、MDA、AMP含量的上升。上述结果表明,15μmol·L-1外源NO处理能有效维持桃果实在冷藏期间的能量代谢,延缓膜脂过氧化过程,提高桃果实的抗冷性,而c-PTIO处理则促进了冷藏期间桃果实能量代谢紊乱,加剧了桃果实的冷害程度。     

异源表达棉花GhPRP5基因增强了拟南芥对盐和ABA的敏感性

富含脯氨酸的蛋白(proline-rich proteins, PRPs)代表一类富含脯氨酸和羟脯氨酸的细胞壁结构蛋白质,最先在伤害诱导的胡萝卜贮藏根中被发现。越来越多的证据显示这类蛋白在应答多种生物和非生物胁迫中起作用。我们之前从棉花cDNA文库中分离了一个命名为GhPRP5的编码富含脯氨酸蛋白的基因,为研究其功能,构建了GhPRP5的过量表达载体,转化拟南芥,获得GhPRP5高表达的8个株系的纯合体。在正常培养条件下,转基因株系和野生型种子的萌发率一致,但盐胁迫和ABA处理显著抑制了转基因拟南芥株系种子的萌发。盐胁迫条件下野生型的绿苗率明显高于转基因拟南芥株系,与正常生长条件相比,ABA处理抑制转基因拟南芥主根伸长的程度更大。利用Quantitative RT-PCR技术分析几个胁迫相关标记基因的表达情况表明,盐和ABA诱导了RD29A、RD29B和KIN1的表达,但诱导水平在转基因株系和野生型中不一样,说明GhPRP5参与调控拟南芥胁迫相关标记基因的表达,但具体参与的胁迫应答信号传导途径仍需进一步研究。     

兰花上凤仙花坏死斑病毒和建兰花叶病毒双重RT-PCR检测方法的建立

根据凤仙花坏死斑病毒(Impatiens necrotic spot vjrus,INSV)和建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CyMV)的保守序列设计特异性引物,建立了双重RT-PCR同时检测两种病毒的方法.用该方法对兰花基地的可疑发病兰株进行检测,结果从田间采取的12株可疑兰花中有6株检出INSV,1株检出CyMV,2株同时检出两种病毒.     

江苏水稻黑条矮缩病病毒的RT-PCR分析和快速检测

为了明确江苏新发生的矮缩病害为水稻黑条矮缩病,采用RT-PCR和序列测定方法对其病原进行了精确鉴定。根据水稻黑条矮缩病病毒基因组序列的信息,设计扩增RNA聚合酶基因、外壳蛋白基因和RNA沉默抑制子基因以及核心蛋白基因部分编码区的4对引物,提取感染水稻黑条矮缩病病毒的水稻植株总RNA并进行RT-PCR扩增,可以在感病植株中分别扩增出水稻黑条矮缩病病毒基因组特有的4个条带,测序结果表明,来源于江苏南京的分离物的4个基因部分编码片段与已登录的对应基因片段核苷酸序列同源性达99％以上,共发现7个碱基的突变。经生物信息学分析发现7个单碱基突变都是同义突变,氨基酸序列没有改变。根据以上结果确认该病病原为水稻黑条矮缩病病毒。利用该方法可以对水稻和其他寄主进行早期病毒检测。     

海胆和海参中microRNAs的研究进展

MicroRNAs(MiRNAs)是一种长度为20 nt左右的内源调控型非编码RNA,主要参与基因的转录后调控,在真核生物的生长发育、细胞分化和免疫防御等过程中发挥重要作用.海胆和海参属棘皮类动物,是高等的海洋无脊椎动物,它们不仅是研究无脊椎动物向脊椎动物进化的重要模式生物,其中的一些种类还是重要的渔业资源,具有较高的...     

一种适宜棉花microRNA实时定量分析的总RNA提取方法

为满足棉花组织micro RNA结构与功能研究的需要,建立了棉花高质量的总RNA提取方法.以陆地棉纤维和胚珠为供试材料,采用改良的异硫氰酸胍-硫氰酸铵-酸酚法提取总RNA,利用stem-loop RT-qPCR法鉴定成熟的miRNA.结果表明此方法能得到高质量的总RNA,并且miRNA的回收率较高,足以满足mi-croRNA水平的实时定量分析.     

生态途径控制果树病毒病的效果与问题探析

分析了长期困扰福建柑桔(黄龙病)、龙眼(鬼帚病)、香蕉(束顶病、花叶心腐病)、番木瓜(环斑病)等果树多种病毒和病毒一类病害的发生、为害特点,提出生态系统的优化控制和生态环境的净化防治果树病毒病的新思路。以此指导龙眼鬼帚病等病毒病的防治,取得成效,表明这是防治病毒病的有效途径,符合发展生态农业和生产绿色果品的要求,也是植保今后的发展方向。同时提出深入探讨生态系统的优化控制、生态环境的净化以及进一步完善其技术体系等问题。     

Brief Discussion on the Characteristics of the Building Decorations with Woodcarving and its Functions

In this paper, the author makes researches on the characteristics of the traditional building decorations with woodcarving in our country and its functions in modern environmental designs, so as to improve its traditional technology and weed through the old to bring forth the new in modern designs.     

狂犬病毒株适应Vero细胞生产株的生物学研究

本文对狂犬病固定毒株适应Vero细胞生产株3aG—V的生物学特性进行了研究,包括毒株的形态、抗原结构、培养条件、致病性、免疫原性、纯毒试验及其在中枢神经系统是否形成尼氏小体检查。结果表明狂犬病病毒3aG—V株具有抗原性好,培养产毒量高,保持有aG固定株弱毒性、传代稳定、无变异,可作为替代地鼠肾细胞狂犬病疫苗aG毒株,用于Vero细胞培养病毒生产出毒液毒力高,灭活后效力高,安全性好的纯化Vero细胞狂犬病疫苗的生产用疫苗株。     

4种病毒抑制剂对昭通烟草番茄斑萎病毒病和马铃薯Y病毒病的防治效果

番茄斑萎病毒病(Tomato spotted wilt virus, TSWV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是云南烟草生产上的主要病毒病,本研究旨在筛选有效的药剂防控烟草番茄斑萎病毒病和马铃薯Y病毒病,从而减少烟草经济损失。通过小区试验,分别研究了1%香菇多糖水剂、3%超敏蛋白微粒剂、5%氨基寡糖素水剂和2%嘧肽霉素水剂对田间烟草番茄斑萎病毒病和马铃薯Y病毒病的防治效果。结果表明：试验所选的4种病毒抑制剂对烟草番茄斑萎病毒病和马铃薯Y病毒病均具有一定的防控作用,1%香菇多糖、3%超敏蛋白、5%氨基寡糖素和2%嘧肽霉素对烟草TSWV的防治效果分别为：31.11%~39.90%、54.34%~59.91%、8.69%~38.21%和22.75%~43.32%,4种药剂对烟草PVY的防治效果分别为55.08%~71.06%、68.10%~82.24%、37.76%~55.36%和58.07%~68.86%,其中,3%超敏蛋白的防效最好,其烟草TSWV和PVY防治效果分别高于50%和60%,其次是2%嘧肽霉素,对烟草TSWV和PVY防治效果分别高于22%和58%。防治烟草番茄斑萎病毒病和马铃薯Y病毒病以3%超敏蛋白微粒剂的防治效果最佳,其次是2%嘧肽霉素水剂。     

禽脑脊髓炎病毒在BGM-70传代细胞系上培养特性的初步研究

进行了禽脑脊髓炎病毒Ｌ２Ｚ株在ＢＧＭ－７０传代细胞系上培养特性的研究,该毒株在细菌上盲代３代后能产生明显的细胞病变,并且传代过程中细胞病变稳定地出现,利用琼脂扩散试验,免疫荧光试验,免疫试验及负染电镜观察研究表明,Ｌ２Ｚ株接种ＢＧＭ－７０细胞具有良好的增殖特性,并且病毒是在细胞浆中进行复制,该研究报道禽脑脊髓炎病毒能成功地传代细胞系上培养增殖。     

白纹伊蚊细胞系Aa—778对蓝舌病病毒的敏感性

Aa-778单层细胞接种BTV-17后,于第三天出现细胞集聚,进而融合,脱落。细胞病变在第四天达高潮,第六天后,由于抗感染细胞繁殖逐渐覆盖单层空洞而恢复原样。用荧光抗体技术观察到Aa-778病变细胞中BTV-17包涵体和病毒抗原堆积物。TCID_(50)测定,初步表明第一代细胞病毒不仅能在Aa-778细胞中繁殖传代,而且它的毒力类似于在BHK_(21)细胞中的毒力。     

植物抗病毒基因工程研究进展

简要讨论了近年来植物抗病毒基因工程的方法策略，主要包括：植物自身的抗病毒基因策略、来源于病毒的抗性基因策略,干扰素等抗性策略；并分析了其存在问题和发展趋势。     

植物抗病毒基因工程研究进展

植物病毒是一类重要的植物病原微生物,每年都给全球的农业生产带来了巨大的损失。近年来,通过基因工程技术培育抗病毒植物已经成为抵抗植物病毒的有效手段。本文阐述了目前植物抗病毒基因工程的主要方法策略,包括由蛋白质介导、RNA介导、非病毒来源基因介导及交叉保护介导的抗性机制,分析了这些机制的存在问题及发展趋势,同时还对一些RNA水平的抗性策略进行了探讨