转基因动物

转基因动物是把基因工程和胚胎工程结合起来,创造了改变动物遗传性状的新方法,用这种技术可使不同物种同的基因人为地按着人们的设计进行转移。把由此创建的具有异种物种基因的动物叫转基因动物。基因导入方法首先通过热处理超速离心法、散弹射击法或人工合成法等技术获得目的基因(使之具有启动子和增强子序列),再与载体质粒体外重组,而后把这种含目的基因的重组质粒转入细菌形成了工     

转基因猪

1980年Gordon等人将疤疹病毒胸苷激酶基因和SV 40早期基因启动子重组到质粒PBR322中,再显微注入小鼠受精卵原核,获得第一只转基因小鼠。1982年Palmiter将含有小鼠金属巯因基因启动子的DNA片段与大鼠生长激素结构基因融合的质粒,用同样的方法,导入小鼠的基因组,获得了比正常小鼠生长速度加快一倍的“巨型小鼠”。这一结果揭示了通过基因转移的方法改良家畜的巨大潜力,引起了科学界的轰动,从而把对转基     

基因药物对动物生长的影响

正一、基因药物基因药物也称DNA药物,是基因工程药物的一种。基因工程药物包括重组蛋白多肽药物、反义核酸药物、DNA药物和基因工程抗体等。它是将具有治疗意义的基因重组进真核表达载体,再直接转移到动物或人的细胞内,表达出具有治疗作用的多肽或蛋白质,从而达到预防疾病、治疗疾病、调节动物生长、生产性能等目的。它与传统的蛋白质工程药物不同,不需要在体外合成和表达蛋白质,也不需要在体外     

重组宁乡猪生长激素真核表达质粒(pCI-GH-EGFP)的构建及其在Vero细胞中的表达

为了构建宁乡猪生长激素(GH)真核表达系统,并转染非洲绿猴肾细胞系(Vero)观察其表达情况,试验选用宁乡猪脑垂体组织总RNA反转录获得的c DNA为模板,克隆宁乡猪生长激素(nxGH)基因序列,将其定向插入p CI载体构建重组质粒p CI-GH,并将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因酶切后连入质粒p CI-GH中,构建真核表达载体p CI-GH-EGFP。将该重组质粒在脂质体作用下转染Vero细胞,倒置荧光显微镜下观察到GH-EGFP融合蛋白可稳定表达。结果表明:宁乡猪生长激素基因编码区序列含有1个由651个核苷酸组成的开放阅读框(ORF),编码216个氨基酸残基。     

表达小黄鱼生长激素的转基因家蚕品系构建

构建转小黄鱼生长激素基因的家蚕新品系,外源表达鱼生长激素。通过检索小黄鱼转录组序列,获得小黄鱼生长激素和转铁蛋白的编码序列,设计并合成以接头序列连接,N端为生长激素、C端为转铁蛋白的融合蛋白编码框。利用piggyBac转座子介导的转基因方法,将融合基因转入家蚕基因组中,转育得到可表达小黄鱼生长激素且人工饲料摄食性较好的转基因家蚕品系皓月-Fc,蛹体中小黄鱼生长激素表达量最高约为0.27 ng/mg,蚁蚕24 h疏毛率约为85%。构建的转基因家蚕品系为下一步小黄鱼功能性饲料添加剂的研发打下基础。     

重组DNA技术及其在动物科学中的应用

DNA重组技术是基因工程的核心,指在体外条件下,将不同生物的基因进行入工"剪切""组合"和"拼接",使遗传物质重新构建,然后通过载体转入受体细胞内并使所需要的基因在受体细胞内表达,DNA重组技术涉及核酸分子杂交技术、PCR反应、限制性核酸内切酶等工具酶的应用、基因转移等多项技术方法,本文就该技术在实验动物科学中的应用作一综述。     

精子介导法制备GHRH转基因猪的研究

以eGFP为报告基因,生长激素释放激素(GHRH)为目的基因,利用精子介导的基因转移方法,将构建慢病毒载体质粒LV-EGFP-GHRH直接和猪精子孵育,再通过体外人工受精建立GHRH转基因猪模型.经PCR检 测,52头后代中发现7头阳性个体,转基因效率为7.42%.本研究探索了应用精子介导的转基因方法将GHRH转移到动物体内,为猪的转基因育种提供了新的依据.     

家畜（禽）转基因研究现状

家畜（禽）转基因研究现状李光鹏严云勤徐立滨（东北农业大学生物工程系·哈尔滨·１５００３０）收稿日期：１９９６－０４－３０１转基因家畜（禽）研究概述１．１猪最早进行的转基因猪研究，是将人生长激素（ｈＧＨ）基因导入猪的基因组中。但ｈＧＨ基因在猪中的表达，...     

转基因猪的遗传特性

整合人生长激素释放因子(RH—GH)基因和人生长激素与小鼠WAP为启动子的融合基因的大白猪,其F_2代与F_1代相比较,外源基因的基因型数量减少。转基因公猪同非转基因母猪交配,所得到的转RH—GH基因猪中,雄性的占65%,雌性的占35%;而在转WAP—hGH基因猪中,雌性的占到82.8%.F_1、F_2和F_3代外源基因数量上的差别是明显的,在4月龄和6月龄时,转WAP—hGH基因猪的活重和平均日增重与对照组相比,明显提高.由于DNA重组技术的发展,通过外源基因定向整合、改变动物基因型的方法得到应用,使家畜出现新的、可以遗传的生物学特性.俄罗斯和德国的学者合作,从1990年起在实验农场,以大白猪为试验材料进行了繁殖转基因猪的实验,这些转基因猪是通过受精卵显微注射外源基因的方法得到的.用大学教授提供的转基因公猪的冷冻精液以及在该实验农场新得到的转基因公猪的精液进行人工授精.     

双表达去势DNA疫苗的构建及其稳定性研究

试验旨在构建一种更安全有效的新型免疫去势DNA疫苗,通过选取下丘脑-垂体-性腺轴（hypot halamic-pituitary-gonadal axis,HPG）的上游调控基因吻素1（KISS1）和促性腺激素释放激素（GnRH）作为靶标,借助2A肽的自剪切功能,引入平衡致死系统代替抗性基因筛选流程,成功将GnRH和KISS1转入非抗性筛选质粒pVAX-asd中,酶切验证和测序对比验证目的基因的插入方向和序列完全正确。重组质粒转染HeLa细胞,反转录后扩增目的基因结果显示,重组质粒在真核细胞内能够正常转录,保证重组质粒在导入机体后能够正常表达,从而引起特异性免疫反应。将构建成功的质粒转入减毒的猪霍乱沙门氏菌C500中,获得可直接口服免疫的活载体疫苗,酶切和测序结果表明,双表达重组质粒成功导入工程菌中。将活菌疫苗在体外连续传代50次,选取0、2、5、10、20、30、40、50代的菌株进行稳定性研究,生长曲线检测结果表明,工程菌在体外连续传代50次的过程中,其生长特性无明显变化,且与减毒猪霍乱沙门氏菌C500的生长特性一致,未因携带质粒发生明显变化;同时将各代菌液扩增沙门氏菌标志基因（invA）和毒力基因（crp）,结果表明多次传代后工程菌仍然具有沙门氏菌的特性,其减毒特性也无变化。各代菌液质粒酶切验证显示,多次传代并不影响质粒的稳定性,重组双表达质粒能够在沙门氏菌C500中维持正常拷贝功能。综上所述,该重组质粒和工程菌疫苗均具有良好的稳定性,可直接应用于动物免疫去势的研究。     

表达猪圆环病毒2型核衣壳蛋白重组杆状病毒的构建与鉴定

本研究根据GenBank数据库中的猪圆环病毒2型全基因组序列设计并合成了1对能扩增完整Cap序列的引物,采用PCR扩增猪圆环病毒2型YZ株的Cap基因,并将其克隆到杆状病毒转移载体pFastBacHTA中,获得阳性质粒pFastBacHTA-Cap;测序后将该质粒转化到大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,获得含有Cap基因的重组杆状病毒质粒Bacmid-Cap;最后将获得的重组杆状病毒质粒Bacmid-Cap转染sf9昆虫细胞并成功拯救了能稳定表达猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组杆状病毒rBacmid-Cap,该重组病毒的成功拯救为研制猪圆环病毒2型的基因工程亚单位疫苗奠定了基础.     

转基因动物研究概况

转基因动物是指以实验方法导入的外源基因在其染色体基因组内稳定整合并能遗传给后代的一类动物.自从本世纪七十年代初期重组DNA技术问世以来,经过二十多年的探索,基因工程无论在理论研究上,还是在生产的实际应用方面都取得了惊人的成绩.随着重组DNA技术的不断发展,许多具有重要价值的蛋白基因及有关调控序列得以克隆,并通过体外培养细胞实现了表达.但是,体外培养细胞虽然可以无限繁殖,却不能反映出基因在正     

生物工程的现状与展望(四)

四基因工程基因工程主要是基因重组技术。利用类似工程设计的办法,按照人们的需要,将基因剪切下来,将目的基因与载体(微生物质粒、噬菌体、病毒)进行重组,然后把人工重组的基因转入宿主细胞(大肠杆菌等),进行无性繁殖,并使新的遗传性状得到表达,产生出人类所需要的产物,或创建新的生物类型,此即基因工程。基因工程构建新生物,目前已不仅限于微生物。但基因工程的成果已直接转给生产部     

流行性腹泻病毒M基因与甲病毒载体重组RNA的构建

将猪流行性腹泻病毒(PEDV)的M基因导入甲病毒载体(plasmid Semliki ForestViru,pSFV) ,研究该基因及其编码蛋白的表达。首先将扩增的病毒M 基因导入pSFV的SP6 启动子下游。用Spe Ⅰ酶将pSFV M重组质粒DNA 线性化,再将其体外转录成5′末端含帽子结构的重组RNA。然后通过电穿孔法将此重组RNA转染BHK 21 细胞,收集病毒样粒子用于感染BHK 21 细胞。采用细胞免疫化学的方法对转染和感染细胞的表达产物进行分析。pSFV M RNA 转染和病毒粒子感染哺乳动物细胞表达的M 蛋白,可与PEDV多克隆抗体起特异反应,证明体外转录的重组RNA 含有PEDV M的特异序列。     

猪IL-18基因原核表达载体的构建及表达

以含新兴猪IL-18基因的真核质粒pcDNA3.1-pIL18为模板,扩增出新兴猪IL-18基因,将其定向克隆至原核表达载体pET32c和pET41c的SacⅠ和KpnⅠ位点,构建了原核表达载体pET32c-pIL18和pET41c-pIL18。经酶切和PCR鉴定,表明所构建的重组质粒为特异性新兴猪IL-18基因原核表达质粒。将该重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)细胞,筛选的阳性菌落经SDS-PAGE分析及Western-blotting分析,表明成功构建了表达重组猪IL-18的大肠埃希菌基因工程菌株。蛋白的可溶性分析表明,重组蛋白呈不可溶表达,在菌体内以不溶性的包涵体形式存在。     

猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆及其真核表达载体的构建

为了给猪圆环病毒2型的诊断和基因工程疫苗的研究奠定基础,试验根据GenBank中猪圆环病毒2型的核酸序列设计了1对引物,采用PCR方法从疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的死亡仔猪病料组织中扩增出了ORF2基因,将其克隆到pMD18-T载体上,筛选获得了重组质粒pT-ORF2.结果表明:以重组质粒pT-ORF2为模板设计出1对引物,扩增出含ORF2主要抗原位点的区段566 bp,经Bam H Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切,将回收的ORF2基因转移入真核表达载体pcDNA3.0,成功构建了重组表达质粒pcDNA3.0-ORF2.     

禽类的转基因方法与研究进展（综述）

引言 Palmiter等(1982)采用显微注射法把有大鼠生长激素(GH)结构基因的DNA片段导入到了小鼠的受精卵原核中,21个胚胎发育成小鼠,其中7只小鼠携有导入的融合基因,血浆水平和生长速度均表明,GH基因得到了表达,显示了转基因动物诱人的前景。Hammar(1985)将人生长激素释放因子(hGRF)基因插入至小鼠的基因组内,转基因小鼠的血浆GRF和GH都增高,56日龄试验组较对照组增重高出25～50％,获得了可传代的超级小鼠,标志着动物转基     

一种新型家蝇幼虫抗菌肽基因(MDAP-2)的真核表达及抑菌活性检测

利用毕赤酵母表达系统表达新型家蝇抗菌肽MDAP-2基因(Musca domestica antimicrobial peptide,MDAP-2),为其作为新型抗菌物质应用于临床提供实验依据。根据已有的MDAP-2的氨基酸序列,采用PCR技术扩增获得MDAP-2基因,构建真核重组表达质粒pPIC9K-MDAP-2,将线性化的重组质粒电击转入毕赤酵母(P.pastoris)感受态GS115细胞内,将PCR鉴定为阳性的重组酵母菌进行甲醇诱导表达,并采用Tricine-SDS-PGAE检测表达产物的大小,经镍柱亲和层析纯化获得纯度较高的重组蛋白,采用管碟法检测重组蛋白的生物学活性。结果显示,重组质粒pPIC9K-MDAP-2获得高效表达,蛋白分子量为7.8 kD,管碟法检测重组蛋白对大肠杆菌与沙门氏菌均具有体外抑菌活性。MDAP-2基因的成功表达为进一步研究表达产物的生物学及免疫学活性奠定基础。