影响水牛活体采卵效果的因素研究

为探讨不同采卵季节、供体牛年龄和连续采卵时间3个因素对水牛活体采卵效果的影响,本实验选择3～12岁、体重400～700 kg的尼里拉菲水牛52头（其中3～7岁40头、8～12岁12头）,根据单因子完全随机试验设计进行分组,分别观察不同采卵季节、供体牛年龄、连续采卵3个月以下（包含3个月）和3～9个月时间对活体采卵效果的影响。结果表明：冬季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均高于春季（P<0.05）和夏季（P<0.01）,且夏季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均低于其他季节（P<0.01）;3～7岁牛的头均可用卵母细胞数比8～12岁牛的多1.78枚（P<0.05）;活体连续采卵时间在3个月以下（包含3个月）的卵母细胞可用率比连续采卵3～9个月的多8.03(P<0.01)。可见,一年四季都可进行水牛活体采卵,但秋、冬季进行活体采卵较为适宜;3～7岁年龄段牛做供体的活体采卵效果更佳;卵母细胞可用率会随着连续采卵时间延长而明显下降,建议同一批牛连续采卵不超3个月。     

淘汰牛连续活体采卵效果及影响因素分析

为挖掘利用具有优秀遗传性能的淘汰母牛的卵泡资源，本实验开展淘汰牛连续活体采卵的效果及影响因素研究。选取6头5～6岁无卵巢疾病的淘汰西门塔尔牛，分别于7、10、11月和12月每间隔4 d进行1次活体采卵，每月最高进行5次活体采卵，记录每头次的卵泡抽吸次数、获卵数、优质卵数，并对影响活体采卵效果的因素进行分析。结果表明：平均头次获卵数和优质卵数分别为4.61枚和2.22枚，卵子回收率和优质卵率分别为47.21%和49.13%；试验牛的平均头次获卵数无显著差异，但第1次活体采卵的卵子回收率高于第2～5次（P<0.05），第2次活体采卵的优质卵率显著高于第5次；采卵月份对平均头次获卵数、回收率和优质卵率无显著影响；采卵次数与采卵月份间无交互作用（P>0.05）。综上，淘汰牛连续活体采卵的效果相对稳定，连续采卵次数对卵子回收率、优质卵率具有一定影响。     

牛活体采卵技术研究进展

应用活体采卵技术可以从活体母牛反复采集大量系谱明确的卵母细胞,用于胚胎的体外化生产。本文将对牛活体采卵技术的研究进展和操作方法进行综述,分析影响活体采卵效果的因素和存在问题,并论述活体采卵在家畜育种和胚胎生物技术等方面的应用前景。     

影响牛非手术法活体采卵效果因素的分析

利用非手术法活体采卵技术结合体外受精技术和胚胎移植技术,能够更大限度的发挥良种母牛的繁殖潜力,并能够用于患有生殖道疾病良种母牛的扩繁,使良种资源得以充分利用;通过活体采卵技术还可以为核移植、转基因、胚胎干细胞移植等生物工程技术提供必要的材料。本文综述了年龄、发情周期、非手术法活体采卵方法等五个方面对牛非手术法活体采卵效果的影响,为探索更加有效的活体采卵程序和方法,提高非手术法活体采卵的生产效率提供依据。     

奶牛活体采卵-体外受精效率的影响因素研究

为建立稳定高效的活体采卵-体外受精技术体系,提高体外胚胎生产效率,本研究先利用屠宰场采集的新鲜卵巢卵母细胞进行体外受精,通过胚胎发育潜力来筛选最佳的体外胚胎培养液;再进一步研究不同种公牛精液和供卵母牛对活体采卵-体外受精效率的影响。结果显示,CR1aa培养液和mCR1aa培养液卵裂率差异不显著（P>0.05）,但mCR1aa组的囊胚发育率显著提高（28.1% vs 20.6%,P<0.05）;选取的3头荷斯坦种公牛精液的活体采卵-体外受精胚胎的卵裂率差异不显著（P>0.05）,但1号种公牛精液体外受精后囊胚率（38.7%）显著高于2号和3号（23.8%&22.9%）（P<0.05）;随机选择的3头活体采卵供体母牛（H1、H2、H3）获得的头均可用卵母细胞数无显著差异,但H1和H2供体母牛体外受精胚胎的卵裂率和囊胚率均显著高于H3供体牛（P<0.05）,且H1供体牛体外受精囊胚率显著高于H2供体牛（P<0.05）。结果表明,mCR1aa培养液能显著提高体外受精囊胚发育率,适用于体外胚胎生产;种公牛精液和供体母牛个体差异会直接影响活体采卵-体外受精胚胎的生产效率,为奶牛活体采卵-体外受精生产技术体系的优化提供参考。     

雪龙黑牛活体采卵与屠宰采卵在体外受精技术中的应用研究

利用超声波活体采卵技术(ovum pick-up,OPU)对12头纯种雪龙黑牛间隔4d采卵2次,对51头F2代遗传性能优秀的雪龙黑牛每周采卵1次,并对活体采卵与屠宰采卵及体外受精后胚胎的发育进行了对比分析.结果表明,活体采卵第2次卵泡数比第1次多82个,而获得的卵母细胞数第2次比第1次少1 2枚;屠宰采卵优秀卵母细胞率高于活体采卵,并且囊胚发育率高于活体采卵.     

影响牛活体采卵效果因素的研究进展

利用活体采卵技术可以连续采卵数周，每周两次，而不影响供体的正常生产，而且几乎在任何体况下都可以采卵，因此，活体采卵是目前唯一一种可以替代超数排卵的技术。目前活体采卵主要用于牛，在羊、马、水牛等体型较大的家畜也有应用，但应用相对较少，在这以牛为例总结一下影响活体采卵的各种因素，主要包括以下四个方面。     

牛活体采集卵母细胞技术研究进展

活体采卵是良种胚胎产业化生产的关键技术，具有生产胚胎成本低、效率高，对供体母畜生产和繁殖性能无不良影响的特点。本文综述了牛活体采卵方法、影响采卵效果因素及存在问题等方面内容，并对其前景做了展望。     

牛活体采集卵母细胞技术研究进展

活体采卵是良种胚胎产业化生产的关键技术,具有生产胚胎成本低、效率高,对供体母畜生产和繁殖性能无不良影响等特点,本文综述了牛活体采卵方法、影响采卵效果因素及存在问题等方面的研究进展,对当前肉牛、奶牛发展具有重要指导意义。     

活体采卵技术在奶水牛繁殖中的应用研究

本文简述了奶水牛活体采卵方法、应用研究进展以及影响活采效果的因素,以期为提高奶水牛繁殖效率的研究提供参考.     

奶牛离体PBMC和体内免疫应答的个体差异及其机理的研究

检测１５头奶牛离体外周血单核细胞和体内产生抗体免疫应答的结果表明，１．０μｇ／ｍｌ的ＰＷＭ或ＳＥＢ使ＰＢＭＣ增殖达最高值，但在分泌Ｉｇ中却表现出不同作用，还发现在群体内离体细胞增殖强度的变异程度小于分泌的Ｉｇ量的变异程度。     

In vivo and in vitro metabolism of dexamethasone in the camel

The metabolism of dexamethasone (DXM) in the camel was assessed by in vivo and in vitro techniques. Liver samples were collected at the abattoir from camels of either sex, and microsomes were isolated and characterized as to their protein and haemoprotein content as well as for their ability to metabolise several cytochrome P450 model substrates. The expression of different P450 enzymes was evaluated by means of immunoblotting, and the glucuronidating capacity was assessed with 1-naphthol as the substrate. The activity of 11 beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 1 was assayed using metyrapone as a model substrate. To examine the in vitro metabolism of DXM, microsomes were incubated with the corticoid in the presence of either a NADPH-generating system or of uridindiphosphoglucuronic acid. In vivo metabolism of DXM was studied in two male camels, injected with a bolus intravenous dose of DXM (0.2 mg/kg body weight) and DXM metabolites were evaluated in urine samples collected at different times after the administration. DXM and metabolites were extracted using solid phase and liquid-liquid extraction, and analysed by liquid chromatography mass spectrometry (LC/MS) and by LC/MS/MS. Comparative results were obtained by in vitro and in vivo studies. Two phase I metabolites were detected: the major one resulted from reduction of the 3-carbonyl group in ring A and the minor metabolite from ring hydroxylation of ring A. Glucuronidation involved both phase I metabolites as well as the parent compound.     

Evaluation of in vitro methods to estimate the in vivo nutrient digestibility of barley in pigs

Two experiments were conducted for the comparison of the in vivo and the in vitro nutrient digestibility of barley in pigs. The first experiment studied the in vivo and in vitro apparent ileal digestibilities (AID) of protein (CP) and amino acids (AA) of seven barleys. The second experiment studied a further eleven samples of barley to compare the in vivo and in vitro values of AID of CP and AA and of apparent faecal digestibility (AFD) of dry matter (DM) and organic matter (OM). The in vitro digestibilities of the different barley samples were determined using the multi-enzymatic methods described by Boisen and Fernández [Boisen, S., Fernández, J.A. (1995). Prediction of the apparent ileal digestibility of protein and amino acids in feedstuffs and feed mixtures for pigs by in vitro analysis. Anim. Feed Sci. Technol. 51, 29–43. Boisen, S., Fernández, J.A. (1997). Prediction of the total tract digestibility of energy in feedstuffs and pigs diets by in vitro analyses. Anim. Feed Sci. Technol. 68, 277–286.]. A good fit to the linear regression equation between the in vivo and in vitro values was found for all the parameters (P < 0.05). When comparing the equation to the bisectrix (i.e. intercept = 0 and slope = 1), a good agreement was found in both experiments between the in vitro and in vivo AID values for CP, Leu, Phe, His and Lys, the values for Met, Cys, Val and Ile were in good agreement in only one of the two experiments and those for Thr did not agree for any of them. Finally, in the second experiment, while a good agreement between the OM AFD coefficients was observed, AFD for DM was underestimated with the in vitro method.     

牛胚胎体外生产技术的简化研究

利用屠宰牛卵巢分离的卵母细胞，以卵裂率和囊胚发育率为标准，对牛胚胎体外生产过程进行了简化试验。结果显示：不加卵丘细胞的高密度卵母细胞体外成熟（１００～２００枚／平皿）可代替加卵丘细胞的标准密度（５０枚／平皿）培养，其卵裂率（５７．６％比６２．５％）和囊胚发育率（２３．７％比２９．１％）没有显著差异（Ｐ＞０．０５），体外授精时间可从成熟培养后２２ｈ延长至２７ｈ，卵裂率和囊胚发育率均没有显著变化，卵母细胞体外成熟后可以不经洗涤直接移入受精滴，原成熟培养皿内残留卵丘细胞再培养４８ｈ形成的单层细胞，可代替标准方法制作的单层小滴用于体外受精胚胎的共同培养，供胚胎发育培养的单层细胞使用多次不影响囊胚发育率，经简化的ＩＶＦ技术获得的胚胎非手术移入情期同步受体牛子宫角２～２．５个月后直检有５８．３％（７／１２）妊娠。我们认为，传统的牛胚胎体外生产技术经过简化可以提高生产效率，不会减少囊胚发育率和妊娠率，值得推广应用。     

白牦牛早期胚胎发育条件的初步研究

研究了卵母细胞质量和体外受精卵培养温度对白牦牛早期胚胎发育的影响。结果表明:白牦牛体外受精时要选择A级质量的卵母细胞,体外受精胚胎发育的最适温度为38℃。为完善白牦牛胚胎的体外生产体系提供了实验依据。     

半胱胺对牛卵母细胞早期胚胎发育能力的影响

半胱胺（Cysteamine）是一种重要的巯基物,在体外培养体系中添加半胱胺能够增强谷胱甘肽（GSH）的合成和胚胎发育能力。本研究旨在探讨不同浓度半胱胺处理对牛卵母细胞体外成熟和早期胚胎发育能力的影响。结果表明,在牛卵母细胞体外成熟液中添加100μM的半胱胺,其囊胚率与对照组有显著差异;但是,与同时在成熟液和发育液中都添加100μM的半胱胺组差异不显著。研究结果也表明,在牛卵母细胞体外成熟培养液中添加半胱胺会提高牛卵母细胞的囊胚发育率,而且随着浓度的增加这种作用将达到饱和,其最佳作用浓度为100μM。     

猪卵巢卵母细胞的体外成熟和体外受精

将从屠宰母猪卵巢采得的卵母细胞-卵丘细胞复合体(Oocyte-cumulus Cell Complex.OCC)在含PMSG的M199培养40～44小时,卵丘细胞大部分扩散(86.4％)。48.1％(142/295)的卵母细胞排出第一极体(PBI)。将体外成熟的卵母细胞与体外获能精子授精后30～70小时,80.5％(103/128)的卵母细胞受精并可在体外发育到2～8细胞甚至桑椹胚。本文还对裸卵母细胞的体外成熟和体外受精进行了研究,对体外受精卵的早期发育作了观察。实验结果表明:PMSG对诱导卵丘细胞扩散及卵母细胞的全面成熟有重要作用,在OCC中的卵母细胞成熟率高于裸卵母细胞体外授精后8～10小时将受精卵放入改良KRB液培养可使卵裂比例明显提高。     

羔山羊卵巢卵母细胞体外成熟培养条件的研究

将出生后５０～７０日龄的羔山羊，经超数排卵处理以后，从卵泡中抽取卵母细胞，取外观形态正常的卵母细胞分成五组，在含有１０％胎牛血清（ＦＣＳ）的ＴＣＭ－１９９培养液中分别经１２、１６、１８、２０和２４ｈ的体外成熟培养后进行体外受精，探索不同体外成熟培养时间对体外受精及卵裂率的影响。另外，在成熟用培养基内还分别添加了发情母羊血清（ＥＮＧＳ）和ＦＣＳ以观察其培养效果。结果表明，经过１２～２４ｈ体外成熟培养的卵母细胞，在体外受精后的４８ｈ检查卵裂率分别为１０％、３７．１％、５０．０％，４１．２％和２５．０％，卵母细胞经体外成熟培养１６～２０ｈ的卵裂率显著高于１２ｈ和２４ｈ的卵裂率。在成熟培养基内分别添加ＥＮＧＳ和ＦＣＳ，其体外受精卵的卵裂率分别为６０．３和４６．８％，卵裂率在添加两种血清的培养基之间无显著差异。     

不同超数排卵方法所获羔山羊卵母细胞体外成熟率及体外受精率的比较

本研究观察了不同超排处理方法对羔山羊卵母细胞体外成熟及体外受精的影响，并将体外受精胚胎进行了移植，以便探讨利用羔山羊卵母细胞生产体外受精胚胎的技术途径。对２～４月龄羔山羊用ＦＳＨ、ＦＳＨ＋ＬＨ（静脉注射）和ＦＳＨ＋ＬＨ（肌肉注射）三种方法进行超排处理，平均分别回收１６．０、２０．３和１５．０枚卵母细胞。将这些卵母细胞进行２０～２４ｈ的成熟培养后，其成熟率分别为４５．５％，４４．４％和７６．５％。成熟卵母细胞经体外受精，体外发育培养后其２～４细胞胚胎的发生率分别为５．６％ａ、６．７％和３１．７％ｂ（ｂ，ｖｓ，ａ，Ｐ＜０．０５）。将９枚２～４细胞期胚胎移植给６只受体母羊，结果有２只妊娠并产羔２只。     

Effects of the preservation medium and storage duration of domestic cat ovaries on the maturational and developmental competence of oocytes in vitro

We examined the effectiveness of saline, Euro-Collins solution (EC), and ET-Kyoto solution (ET-K) as preservation media for the cold storage of feline ovaries. Ovaries were maintained in these media at 4°C for 24, 48, or 72 h until oocyte retrieval. The ET-K group exhibited a higher oocyte maturation rate than the saline group after 72 h of storage. Moreover, ET-K could sustain the competence of the feline oocytes to cleave after 48 h, and the morula formation rate of the ET-K group was higher than that of the other groups after 24 and 48 h. Furthermore, the ET-K group exhibited a higher blastocyst formation rate than the other groups after storage for 24 h, and only ET-K retained the developmental competence in blastocysts after 48 h of storage. In addition, regarding the cell numbers of the blastocysts, there was no significant difference among the tested groups. In conclusion, our results indicate that ET-K is a suitable preservation medium for feline ovaries.