葡萄柚贮藏期病原细菌的分离鉴定

为明确云南省元江地区"哈路比"葡萄柚贮藏期果实病原细菌的种类,为葡萄柚的长期贮藏保鲜提供理论参考依据。以采后葡萄柚果实为试材,于室温贮藏(温度18~22℃,湿度80%~90%),从新发病的葡萄柚果实的病健交界处获取分离材料。采用组织分离法分离培养病原菌,运用传统形态学鉴定、革兰氏染色进行初步鉴定;并采用分子鉴定法进行综合鉴定。试验通过组织分离法共分离出3株病原细菌,分别命名为Y-1、Y-2、Y-3。经致病性鉴定结果表明,菌株Y-3致病性最强;经传统形态学和16S r DNA序列分析比对综合鉴定,3株细菌分别隶属于2个系统发育分支,所测得细菌菌株Y-1与Serratia marcescens DSM30121T(AJ233431)相似性为99.23%;菌株Y-2与Enterobacter asburiae JCM6051T(AB004744)相似性为97.73%,菌株Y-3与Enterobacter cancerogenus LMG2693T(Z96078)相似性为97.23%。其结果明确了元江地区葡萄柚贮藏期病原细菌的种类有粘质沙雷氏菌(Serratia)和肠杆菌属(Enterobacter),云南省元江县"哈路比"葡萄柚贮藏期的优势致病细菌为肠杆菌属(Enterobacter),这为以后葡萄柚贮藏保鲜提供了一定的理论参考依据。     

‘Cocktail’葡萄柚黄龙病菌检测及鉴定

采用直接组织免疫印迹(Direct tissue blot immunoassay,DTBIA)和常规PCR技术,对采自广东梅州新建‘Cocktail’葡萄柚园内表现疑似黄龙病症状的样品进行检测。DTBIA检测发现疑似样品的韧皮部存在特征性紫红色反应,与黄龙病阳性对照反应一致。PCR检测发现枝条、叶片和果实样品中均检测出了黄龙病菌特异性条带,其中果蒂、中柱和种皮内病菌含量较高。进一步测序分析发现,来自‘Cocktail’葡萄柚病样的16Sr DNA和ef Tu基因与NCBI中的柑橘黄龙病菌亚洲种(Candidatus Liberibacter asiaticus,CLas)对应基因的序列相似性均为100%,证实‘Cocktail’葡萄柚感染了柑橘黄龙病菌亚洲菌株。     

应应用PCR及Nested-PCR技术检测柑橘黄龙病病原研究

 以采自田间和广东省农业科学院果树研究所防虫隔离网室内嫁接并感染黄龙病的5 个柑橘品种叶片为材料, 以草本指示植物长春花( Catharanthus roseas) 和木本指示植物　柑( Citrus reticulata Blanco) 鉴定为基础, 采用改良的CTAB 法提取总DNA , 在此基础上进行常规PCR 与Nested-PCR 检测, 并对特异目的片段进行克隆、测序。试验证明Nested-PCR 比常规PCR 的灵敏度更高。这两种方法均可以检测出未显症的黄龙病材料, 但Nested-PCR 可以在木本指示植物嫁接后40 d 左右、草本指示植物摩擦接种1 个月左右检测到病原;而常规PCR 在木本植物嫁接后60 d 左右、草本植物摩擦接种近2 个月左右才能检测到病原。常规PCR 所能检测到的最低DNA 的量为pg 数量级; Nested-PCR 检测病原DNA 灵敏度约为常规PCR 的104 倍。     

百合疫病病原鉴定及其PCR检测

 对从百合疫病病株上分离得到的病原菌进行了形态特征观察、致病性测定及核糖体DNA-ITS序列分析。结果表明,该菌为疫霉属真菌,与GenBank中烟草疫霉ITS序列的同源性为98% ~ 99%。结合病原菌PCR检测结果,进一步证实其为烟草疫霉菌（Phytophthora nicotianae）。这是烟草疫霉菌侵染云南切花百合的首次报道。     

云南泸西苹果病虫害调查与病原及害虫鉴定

云南红河州泸西县为云南重要的苹果新产区,调查鉴定泸西县苹果病虫害的发生情况,对泸西县的苹果病虫害防控,苹果产业发展具有重要意义。本研究系统调查和鉴定了云南红河州泸西县向阳乡习峨村、三塘乡、向阳乡沙马村等3个苹果产区的病虫害。通过室内病原显微观察,对真菌病原进行形态鉴定,应用RT-PCR检测技术与测序鉴定病毒,害虫形态鉴定。最终结果表明:云南泸西苹果病虫害共8种,其中真菌病害3种,有斑点落叶病、枝干轮纹病、褐斑病;病毒病害2种,有苹果茎沟病毒病、苹果花叶病毒病;虫害3种,蚜虫、蓟马和金纹细蛾3种虫害。其中斑点落叶病和褐斑病为主要病害,病毒病害其次,虫害发生率较小。其次通过调查与鉴定,否定了危险性病害苹果炭疽叶枯病在云南泸西的存在。     

杭州地区辣椒病毒病病原分子鉴定

辣椒等茄科蔬菜病毒病发生普遍,一种作物往往遭受数十种植物病毒的侵染,是典型的病毒库。近年来随着蔬菜栽培密度的不断提高,反季节栽培和设施栽培的不断扩大,蔬菜病毒病呈逐年上升趋势,除了在番茄、黄瓜等茄果类蔬菜上发生外,辣椒也有     

柑桔黄龙病病原遗传多样性研究进展

柑桔黄龙病是世界范围内一种毁灭性的柑桔病害,严重阻碍了柑桔产业的发展。对柑桔黄龙病病原的种群分化及遗传变异进行研究,有助于了解柑桔黄龙病流行、起源与进化。近年来柑桔黄龙病病原遗传多样性研究已成为热点之一,本文对国内外在该领域的研究进展进行概述。     

红掌根腐病病原鉴定及其PCR 检测方法

 利用真菌通用引物ITS1 和ITS4 扩增红掌根腐病菌转录间隔区并进行序列测定,通过序列 比较,设计了1 对红掌根腐病菌的特异引物SF1/SR2,对30 个红掌根腐病病原菌、8 种其它真菌和2 种 细菌基因组DNA 进行PCR 扩增。结果表明,只有红掌根腐病菌获得572 bp 的特异带。使用引物SF1/SR2 对华丽腐霉进行PCR 扩增,其检测灵敏度在DNA 水平上可达1 pg。运用设计的引物从红掌根腐病菌基 因组DNA 以及人工接种和自然发病的红掌植株中扩增到572 bp 的特异片段,实现了对红掌根腐病菌的快 速可靠的检测。     

牡丹根腐病病原的形态与分子鉴定

以河南洛阳各大主要牡丹园栽培的牡丹典型根腐病病株为试材,采用组织分离法获得纯菌株,并对所得菌株进行致病性测定、形态学鉴定及rDNA-ITS序列分析,研究牡丹根腐病的病原菌种类。结果表明:分离获得的4个菌株在PDA培养基上均产生茂密、呈疏松棉絮状的菌丝及黄、红、紫等色素,大型分生孢子镰刀形或椭圆形,无色,多胞;小型分生孢子卵圆形至椭圆形,无色,单胞或双胞。致病性测定表明,4个菌株能侵染离体牡丹根尖使其变黑。在GenBank序列数据库中,F1~F4菌株的DNA序列与编号为HM214456.1和AB498917.1等的F.solani ITS区段DNA序列的同源性为99%~100%。据此,将河南洛阳牡丹根腐病的病原菌鉴定为F.solani。     

河南周口番茄黄化曲叶病病原分子鉴定

应用分子生物学的方法鉴定了河南周口地区番茄黄化曲叶病的病原.鉴定结果表明,侵染河南周口番茄的双生病毒为番茄黄化曲叶病毒,与安徽AH-HB1分离物相似性最高,达到98.7%;从构建的系统关系树也可以看出,河南周口的番茄黄化曲叶病毒与安徽AH-HB1分离物的亲缘关系最近,推测河南周口番茄黄化曲叶病毒可能来源于安徽.     

柑桔黄龙病病原类细菌的分离培养

柑桔黄龙病遍及菲律宾、印尼、马来西亚、泰国和南非等地,在我国更是柑桔的首要病害。1978年我国科研工作者首先用电子显微镜技术,证实柑桔黄龙病的病原是类细菌(Bacterium—like Organism,BLO)。类细菌属难培养菌类,而柑桔黄龙病BLO不仅培养难,而且常规提纯获得完整菌体也难,以致有些研究者不得不从病株筛管里直接抽提,提纯BLO。本文报道柑桔黄龙病病源BLO的分离提纯,以及在培养基上体外培养获得成功的研究结果。     

柑桔黄龙病的病原研究与防治建议

近半个世纪以来,在我国南方的许多柑桔产区,如福建、广东、广西等省区,由于黄龙病的猖獗为害,柑桔生产事业兴而复衰,产量一直上不去。从我省柑桔生产的历史上看,柑桔面积不断扩大,而柑桔年产量仍然徘徊在40万担左右。一些有经验的老产区,柑桔越种越少,甚至改种其它的作物。不少亩产万斤的高产园,也在短短的几年内出现大量柑桔树衰退死亡的现象。造成这种反常状况的原因当然是复杂的,而黄龙病的摧残就是其中主要的原因     

甜瓜白粉病病原鉴定及苗期抗性鉴定

以上海市设施栽培条件下发生的甜瓜白粉病为材料,对其病原菌进行了形态学观察鉴定,确定该白粉病病原物属单囊壳属单囊壳菌(Sphaerotheca fuliginea)。同时,利用该白粉病病原对4个不同的甜瓜品种进行了白粉病抗性鉴定,结果表明哈密瓜新品种东方蜜4号和东方蜜5号抗病性较强,尤其是东方蜜5号病情指数、黄化率均较低。     

仙客来软腐病病原鉴定及防治

仙客来(Cyclamen)别名萝卜海棠、兔耳花、一品冠等,为报春花科仙客来属球茎花卉,是世界著名的盆栽观赏花卉,其纷繁美丽的叶片衬托着反转上翘的花朵,形态别致,色泽艳丽,因其品种繁多,花叶具佳而深受人们喜爱.特别是仙客来的花期很长,从秋季可一直延续到第二年春天,因而成为圣诞节、元旦以及春节等喜庆节日重要的礼仪用花[1].     

柑橘黄龙病、裂皮病和衰退病病原的多重RT-PCR检测

 建立了一种同时检测柑橘黄龙病病原类细菌(Candidatus L iberibacter asiaticus, HLB) 、柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis viroid, CEVd) 、柑橘衰退病病毒(Citrus tristeza virus, CTV) 的多重RT-PCR技术体系。运用根据3 种病原核苷酸保守区序列设计的特异性引物, 成功的对同一样品中的HLB、CEVd、CTV进行多重RT2PCR扩增, 得到1 160 bp、371 bp、273 bp 3条特异性大小与试验设计相符的条带。就影响多重PCR 的主要因素引物浓度和退火温度进行了一系列优化, 建立了能同时检测HLB、CEVd、CTV的多重RT2PCR技术体系。该体系最低能从10 pg总RNA中检测出黄龙病类细菌和柑橘裂皮类病毒, 从1 pg总RNA中检测到柑橘衰退病毒。对采自田间37份材料的实际检测表明: 存在两种或3种病原的复合侵染。     

柑橘黄龙病检测技术概述

中国是世界上重要的柑橘生产国，生产面积第一，产量也达到了世界第二位。但在柑橘产业的发展当中，病虫害严重制约了发展速度，特别是柑橘黄龙病（citrus huanglongbing，HLB）。由于柑橘种类、品种繁多，砧穗组合比较复杂，而且，即使是同一品种甚至同一植株，在自然情况下可感染多种病害，而不同的病害又有不同的症状，所以加大了其田间诊断的难度。     

柑橘黄龙病检测方法研究进展

柑橘黄龙病是世界柑橘产区的重要检疫性细菌病害之一,严重阻碍柑橘产业的健康持续发展。因抗性品种和特效药剂的缺乏,目前对柑橘黄龙病以预防为主,因此,加强病害的诊断和检测技术研究就显得尤为重要。本文综述了多年来柑橘黄龙病的检测诊断方法。     

基于分子技术的柑橘黄龙病研究进展

黄龙病是柑橘生产上的一种毁灭性病害。近年来该病害在世界多个柑橘主产区发生与流行,使其再次引起了世界柑橘生产者和研究者的高度关注。目前认为柑橘黄龙病病原是一种韧皮部难养细菌,暂命名为"Candidatus Liberibacter spp."。随着现代分子生物学技术的迅猛发展,柑橘黄龙病相关菌的全基因组和柑橘全基因组序列日趋完善。我们在这一大背景下主要介绍近5 a来柑橘黄龙病分子水平的研究概况,特别是在分子流行学、基因组学、转录组学、蛋白质组学、病原致病性和寄主抗病性分子机理及防控方法等方面的进展,并对目前研究中存在的困难进行分析,对今后的研究方向进行展望。     

云南·美国葡萄柚推广种植达200公顷

本刊讯（特约通讯员柏斌）在国家林业局和云南省科技厅项目支持下,自2001年以来,西南林业大学李贤忠教授等先后从美国引进葡萄柚优良品种13个（加工型9个,鲜食型4个）,筛选出适宜云南热区种植的加工型葡萄柚品种4个。