兽药残留分析技术

随着兽药特别是抗生素在畜牧生产中应用的增加,导致动物性食品中尊药残留问题日益突出。动物性样品的分离纯化是兽药残留分析技术中的重点和难点,也是当前研究的热点。其难点在于样品基质复杂,干扰物质多,而且残留物浓度很低,因而不易从样品中分离、纯化。因此,研究和发展一些新的样品分离纯化技术已成为兽药残留分析领域中的关键技术之一。文章从样品的前处理和检测方法两方面对兽药残留分析技术现状以及发展动向进行了阐述。     

兽药残留分析技术研究进展

随着兽药在畜牧生产的广泛应用以及人们对食品安全的要求,检测动物源性食品的兽药残留分析技术已成为迫切需求并取得较大的发展,作者通过对该技术的综述,旨在较深入了解兽药残留检测样品分离纯化技术及确证技术的现状和发展趋势。     

应用兼并引物RT-PCR快速检测及鉴别气载鸡新城疫病毒

为了快速检测并鉴别鸡舍内外空气中的新城疫病毒(NDV),应用AGI-30气体收集器在一大型商品肉鸡舍舍内外收集气体,同时采集鸡的气管和泄殖腔拭子,采用兼并引物RT-PCR检测气体样品和拭子中的NDV,并鉴别NDV的毒力;同时分离、纯化气体样品中的NDV,用常规毒力学试验鉴别分离株的毒力.结果RT-PCR检测到舍内2/15的气体样品和4/15的拭子中同时有强毒和弱毒株,3/15气体样品和13/15的拭子只有弱毒,舍外上风向5 m处气体样品检测结果均为阴性,舍外下风向5 m处1/3的样品只有弱毒;其他样品均为阴性;从RT-PCR检测为阳性的样品中分离到3株强毒和4株弱毒株;从RT-PCR检测为阴性的样品中均未分离到NDV.结果表明兼并引物RT-PCR可直接、快速对气体样品进行检测及鉴别诊断.     

多重PCR-变性高效液相色谱法快速检测结核致病菌群并同步鉴别致病菌种

本研究旨在运用多重PCR联合变性高效液相色谱(DHPLC)技术原理,建立快速检测人兽结核致病菌群并鉴别主要致病菌种的新方法。建立了四重PCR-DHPLC方法,可同时检测结核分枝杆菌复合群(MTC)特异的IS6110和IS1081插入序列、结核分枝杆菌特异结构基因和牛分枝杆菌特异结构基因共4个目标基因。采用13种分枝杆菌标准菌株和分离株以及23种常见微生物样品进行特异性试验,采用纯化标准菌株DNA以及克隆了扩增序列的重组质粒DNA进行检测灵敏度试验,采用从临床疑似发病牛群采集的牛组织样品进行临床检测试验,并与细菌分离培养方法进行比对。结果表明:所建立的多重PCR-DHPLC方法能特异检测MTC并准确鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌,而对其它11种分枝杆菌以及23种常见微生物样品均呈典型阴性检测结果;检测灵敏度达到每个反应102～103基因拷贝或3.6～6.8fg DNA模板浓度。采用该法从39份临床疑似样品中检出33份MTC阳性并检出其中28份为牛分枝杆菌阳性,而培养法检出21份阳性样品。采用该法临床检测全程可缩短至1d之内,其中对纯化DNA样品的检测分析可在2h内完成。本研究为人兽结核致病菌(群)的快速检测鉴别提供了新型分子生物学方法,所建立的四重PCR-DHPLC方法能实现快速检测结核分枝杆菌复合群并鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌     

农业部新发布一批水产品质量安全标准

农业部最近新发布11项水产品质量安全应急标准,其中《水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱一串联质谱法》等7项标准为国家标准,《水产品中硫丹残留量的测定气相色谱法》等4项标准为行业标准。这些标准的发布实施将为水产品质量安全监督抽查,特别是对水产品中农兽药残留及其他污染物残留的检测提供有力的技术支撑。     

鸡肿瘤坏死因子的分离纯化样品和未分离纯化样品免疫活性比较

在鸡体内诱导产生肿瘤坏死因子,取血清、外周白细胞及脾细胞样品,然后分别取一定量样品用硫酸铵盐析法和葡聚糖凝胶G-200柱层析法进行分离纯化。再将分离纯化的样品和未分离纯化的样品分别作用于L929细胞,检测细胞死亡率。结果表明分离纯化的样品活性高于未分离纯化的样品活性,这种纯化方法能提高鸡TNF的纯度和活性。     

代谢组学平台在兽药检测中的研究应用评价

随着兽药在畜牧生产上的广泛应用及人们对食品安全的要求,兽药分析技术已成为迫切需求,并取得较大的发展。代谢组学是一门新兴的学科,是研究生物体系因不同条件因素而影响内源性代谢物变化的研究平台。通过对该技术的综述,旨在较深入了解兽药残留检测样品分离、纯化技术及确证技术的现状和发展趋势。     

苯并咪唑类兽药残留分析研究进展

苯并咪唑类化合物作为一类广谱抗蠕虫药,已被列入《中华人民共和国动物及动物源食品中残留物质监控计划》药物之中。笔者总结了近年来的苯并咪唑类兽药相关研究情况,对其在动物源食品中的残留分析技术进行综述,介绍此类药物残留检测的样品分离纯化技术及确证技术的现状及发展趋势。     

气相色谱-串联质谱法测定饲料中硫丹

建立气相色谱-串联质谱法测定饲料中α-硫丹、β-硫丹、硫丹硫酸盐的方法。饲料样品经过粉碎,乙腈提取,浓缩尽干,正己烷溶解,硅藻土固相萃取柱(SPE)小柱净化。采用Agilent122-5532UIDB-5MS(30 m×0.25 mm,0.25μm),以流速1.0 mL/min高纯氦为载气,使用电子轰击离子源(EI),多反应监测模式(MRM)检测,外标法定量。结果表明,硫丹在5～1 000μg/L浓度范围内线性良好,相关系数为99.96%～99.97%。方法的检出限和定量限分别为1μg/kg和4μg/kg。4、8、20μg/kg的平均加标回收率为79.4%～100.3%,方法的相对标准偏差为5.2%～13.8%(n=5)。检测方法快速高效、检出限低、准确度和精密度高,能够满足饲料硫丹检测的需求,可用于饲料中硫丹的检测。     

浙江省舟山地区水产品及其养殖环境中霍乱弧菌污染状况调查

为了解浙江省舟山地区水产养殖环境及水产品中霍乱弧菌的污染状况,于2007年与2009年采集水样、泥样及多种水产品等176份样品。用TCBS选择性培养基从样品中分离弧菌,并应用基于编码胶原酶的霍乱弧菌看家基因(vcc)的特异性PCR方法检测霍乱弧菌。霍乱弧菌的总检出率为5.1%(9/176),其中2007年的检出率(5.5%)稍高于2009年(4.5%)。9株霍乱弧菌分离株中,5株来自环境,4株来自水产品。虾类产品中检出3株,而检出这3株霍乱弧菌的虾类产品均为南美白对虾。由此可见,水产品及其养殖加工环境存在安全隐患。     

荧光RT-PCR技术快速检测新城疫病毒

利用荧光RT-PCR技术对910份样品进行NDV检测,结果应用荧光RT-PCR技术可在4小时内从910份样品中检出NDV阳性30份,用病原分离技术检测部分样品,结果完全一致。荧光RT-PCR技术具有特异性高,操作简便,快速高效的特性,而且可以大大地缩短对NDV的检测时间。     

猪链球菌1、7、9型多重PCR诊断方法的建立及初步应用

为了建立猪链球菌（Streptococcus suis,SS）1、7、9型（SS1、SS7、SS9）的快速鉴别诊断和分型方法,本研究根据GenBank已登录的SS1型特异性的CPS1I基因、7型CPS7H基因、9型CPS9H基因设计引物,以标准SS1、SS7、SS9株基因组DNA为模板,建立了SS1、SS7和SS9的多重PCR检测方法,并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的多重PCR检测方法对11份猪链球菌的临床分离纯化菌株进行了的应用检测。结果表明,成功建立了SS1、SS7和SS9的多重PCR检测方法,该方法的检测灵敏度可达100 CFU/mL,特异性和重复性好;利用多重PCR检测方法对11份猪链球菌临床分离纯化菌株检测结果表明,11份样品中有3份样品为SS9阳性、2份样品为SS7阳性、1份样品为SS1阳性。本研究为临床上SS1、SS7、SS9的快速鉴别诊断提供了一种新方法。     

两种方法纯化猪血清免疫球蛋白IgG的比较

为了从猪血清中纯化免疫球蛋白IgG,得到纯度更高的样品,采用饱和硫酸铵分级沉淀和Protein G柱吸附分离两种方法进行纯化,将获得的IgG经SDS-PAGE凝胶电泳纯度鉴定和HPLC浓度测定,结果表明,利用Protein G柱吸附分离纯化出的样品在纯度和浓度方面都要高于盐析法,Protein G柱吸附分离纯化IgG更适合于实验室小规模的操作,能够获得纯度高的样品。     

应用新城疫病毒强弱毒株RT-PCR鉴别诊断技术检测多种禽类副黏病毒

应用已建立的新城疫病毒(NDV)强、弱毒株RT-PCR快速鉴别诊断技术，对来自广西各地疑为禽副黏病毒血清1型(APMV-1)感染的144份不同禽类的病料进行了检测，并用常规方法对RT-PCR检测为阳性的部分病料进行了病毒的分离和鉴定。结果，从鸡、鸽、鹅、鸭、鹌鹑、珍珠鸡、孔雀、鸵鸟和画眉鸟9种禽的病料样品中检测到A19MV-1，阳性检出率为64．58％(93／144)；从7种禽病料中分离到29株APMV-1地方野毒株。部分分离株用NDV强、弱毒株快速鉴别技术鉴定属中、强毒株。     

日本鳗鲡脾脏抗菌肽抗菌活性检测方法的比较

本试验旨在建立一种在日本鳗鲡脾脏抗菌肽分离纯化过程中简便、灵敏的检测其抗菌活性的方法。试验以日本鳗鲡脾脏分子质量小于10 ku的蛋白质为抗菌肽样品,选择琼脂板孔穴扩散法和微孔液体培养法2种传统方法及微量液体培养法为检测方法,比较这3种方法在抗菌肽对3种鳗鲡常见致病菌株(迟钝爱德华菌、气单胞菌、嗜水气单胞菌)抗菌活性检测中的灵敏度和优缺点。结果表明:与琼脂板孔穴扩散法及微孔液体培养法相比,微量液体培养法简便、易于观察结果,具有最高的灵敏度且样品用量最少,适合在鳗鲡脾脏抗菌肽分离纯化过程中跟踪检测抗菌活性,尤其适合分离纯化后期获得微量单一样品抗菌活性的检测。由此得出,微量液体培养法适用于检测日本鳗鲡脾脏抗菌肽的抗菌活性。     

单增李斯特菌单克隆抗体制备及免疫磁珠分离方法的建立

免疫磁珠技术操作简单、快速高效，目前已广泛应用于细菌的快速分离纯化等领域，本研究旨在建立一种捕获率高、特异性好的单增李斯特菌免疫磁珠分离方法。首先通过杂交瘤技术制备出8株抗单增李斯特菌单克隆抗体，效价均达到1∶1 024 000,且特异性较好。利用效价最高的腹水6-E6制备单增李斯特菌免疫磁珠，并对单增李斯特菌免疫磁珠最适条件进行优化，结果选择MEST(7.0)为偶联缓冲液、磁珠直径为750 nm、免疫磁珠添加量为0.4 mg、捕获时间45 min、单增李斯特菌含量在1×10⁴ CFU/mL时，免疫磁珠捕获率最高可达76.29%。在模拟牛奶样品中免疫磁珠特异性捕获率可达到67.71%。该分离方法可快速且特异地分离单增李斯特菌，操作简便，为快速分离食品中的单增李斯特菌并实现快速检测提供了技术支持。     

肉用犊牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定与药敏试验

为了确定宜春市肉牛犊牛腹泻的发病原因,试验采用牛腹泻五联病原体快速诊断试剂盒初步检验9头腹泻犊牛的粪便样品,对试剂盒检测为阳性的样品进行细菌的分离、纯化、生化鉴定和药敏试验。结果表明:使用牛腹泻五联病原体快速诊断试剂盒检测到有7份产气荚膜梭菌为阳性,2份大肠杆菌为阳性;细菌分离培养、生化鉴定结果符合产气荚膜梭菌的特性;青霉素、呋喃唑酮、多西环素和苯唑西林等药物能够明显抑制分离菌的生长。说明产气荚膜梭菌感染是引起犊牛腹泻的主要原因。     

毛细管电泳技术在兽药和农药残留检测中的应用

随着养殖业和农业的发展,兽药和农药残留对食品安全的危害日益受到人们的重视,由于检测技术的不断完善,多残留检测技术已逐渐占据残留检测中的主导地位。毛细管电泳技术作为一种高效、快速的分离技术已得到广泛应用。文章就毛细管电泳技术在兽药和农药多残留检测分析中的应用做一介绍。     

液相色谱技术在饲料中抗菌肽分离纯化和含量测定的应用研究

文章旨在分析纯化饲料添加剂中的抗菌肽，为抗菌肽的含量测定及样品检测提供了参考依据。本研究采用过滤膜超滤浓缩，采用固相萃取柱进行洗脱和分离，用过滤膜进行过滤，用高效液相色谱仪进行分离纯化，优化色谱条件，并对不同类型的饲料中抗菌肽的含量进行测定，流动相为甲醇，实验将流速设置为0.75 mL/min，甲醇的体积比为10%，柱温度为31℃，检测波长为526 nm，进样量为10 ul，而后用高效液相色谱仪测定饲料中抗菌肽含量。结果显示：该方法分离纯化获得的抗菌肽蛋白活性较强。该方法检测饲料中抗菌肽的保留时间为7.25 min，呈现单峰，峰值较好，在误差范围呈现线性关系，方法操作简单、快速、安全环保、灵敏度高，应用范围广泛。液体动物饲料添加剂的抗菌肽测定值为2.45 mg/kg，水产动物饲料和家禽饲动物料的抗菌肽测定值分别为3.14 mg/kg和2.56 mg/kg。因此，本实验建立了高效液相测定法有利于饲料中抗菌肽的纯化和饲料中抗菌肽的测定。 [关键词]抗菌肽|高效液相色谱|分离纯化|含量测定     

饲料中多肽类抗生素检测技术的研究进展

本文主要综述了近年来饲料基质中多肽类抗生素检测分析方法。简要介绍了关于多肽类抗生素在饲料中使用的相关规定,以及添加使用多肽类抗生素的用途和违禁使用的危害。重点介绍了饲料中多肽类抗生素含量检测的前处理技术和检测技术,包括样品的提取、分离、纯化和检测等,并分析了不同检测技术的优缺点。最后指出了在多肽类抗生素的各种检测方法中,液相色谱-质谱联用技术用的最普遍,技术最成熟。同时,需要加大力度研究饲料中多肽类抗生素的检测,为更好地监督和规范饲料中多肽类抗生素的使用提供可靠的依据。