家畜生殖细胞移植与睾丸组织异种移植

生殖细胞从可育的供体小鼠移植到不育的受体小鼠的睾丸中可以导致供体小鼠的精子发生,使得供体的遗传物质可以传递到受体的后代中。生殖细胞移植技术可以为研究雄性生殖干细胞系生理特性提供一种生物鉴定方法、开发一种分离培养精原干细胞技术以及检查精子发生的缺陷和治疗雄性不育问题的研究体系。尽管大部分研究都是在小鼠中进行的,生殖细胞移植已经用于大型哺乳动物。在家畜包括猪、山羊、牛以及灵长目动物中,通过超声波辅助以中空管子进入睾丸网将生殖细胞移植到受体睾丸。生殖细胞可以在无亲缘关系的免疫正常的猪或山羊中移植成功,然而在啮齿动物中却要求受体与供体同系或者受体有免疫缺陷。通过对分离的精原干细胞系进行基因操作,可以移植到受体生产转基因精子。雄性生殖细胞的转基因技术在家畜品种改良上具有巨大的应用前景,特别是在那些胚胎干细胞技术无法实现或当前方法生产转基因动物效率低下的情况。异种睾丸组织移植在多种哺乳动物包括马、灵长目中实现,为研究精子生成、检验药物提供了一种潜在的新颖方法。这对于提高或抑制雄性生育能力以及从供体不成熟精原细胞中生产出成熟的精子提供了理论依据。因而,生殖细胞的移植或睾丸组织的异种移植技术对家畜繁殖力的研究、维持以及改良具有特殊的意义。     

羊睾丸组织在小鼠皮下异种移植

将幼年羊的睾丸组织块移植到小鼠背部皮下，同时用环孢素A（CsA）抑制受体小鼠的免疫功能，在不同时间阶段观察了移植的睾丸组织的存活和发育状况。结果表明，添加CsA组与不添加组的移植试验结果无显著差异；移植入的羊睾丸组织块可在受体动物中存活，体积明显增大，但不能分化以实现精子发生。经组织块培养试验发现，移植3个月后的羊睾丸组织仍有存活的精原细胞，说明受体小鼠皮下环境能长期支持羊睾丸组织块的存活。     

鸡睾丸组织移植初步研究

本文对鸡睾丸组织的自体移植和异体移植作了初步的研究。将50日龄广西土鸡睾丸组织（0．3mm^3）自体移植到腹腔和腹部皮下，将30日龄竹丝鸡的睾丸组织（0．2mm^3）异体移植到新生广西土鸡的腹部皮下，在不同时间段（自体移植分为3周、1个月、2个月和3个月，异体移植定为3个月）取出移植物，检测移植组织的体积和重量，并通过组织切片观察曲精细管形成和精子发生情况。结果表明，自体和异体移植组织分别在移植后1个月和3个月内都保持生长状态，体积和重量明显增加。其中自体移植组织切片观察发现移植后3周、1个月时都有形态正常的精予形成，在异体移植组织切片中发现组织中有明显的曲精细管形成，但没有完整的精子发生。这初步证明，在鸡中进行睾丸组织自体或者异体移植是可行的。     

受体和移植时间对小鼠睾丸移植效果的影响

通过比较不同受体和不同移植时间对睾丸移植效果的影响,以期探索建立疾病模型小鼠安全保存的新方法。按受体不同分为C57BL/6J受体8周组和裸鼠受体8周组,按移植时间的不同分为裸鼠受体8周组和裸鼠受体10周组。移植后处死受体鼠回收移植物。测试和分析移植物存活率、回收物增重的倍数和生殖细胞的分化情况。结果表明:不同试验组移植睾丸的生殖细胞分化差异显著,裸鼠受体8周组的分化情况好于C57BL/6J受体8周组(P<0.01);裸鼠受体10周组分化好于裸鼠受体8周组(P<0.05)。由此可见裸鼠受体的移植效果要好于同品系受体,将睾丸移植时间从8周延长到10周有利于生殖细胞的分化。     

白消安对睾丸的毒害作用及机制探讨

白消安（busulfan）对精子发生具有较强毒害作用,可导致雄性不育,是制备精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）移植受体的理想药剂。睾丸炎对生精机能也有重要影响,甚至能导致雄性不育。然而,白消安损害血睾屏障（blood-testis barrier,BTB）,影响精子发生的机制尚不清楚,尚不知其是否会导致非传染性睾丸炎症,并影响细胞因子分泌,损害生育能力。因此,本文综述了白消安对BTB的破坏作用、对睾丸细胞相关功能蛋白的影响,以及白消安损伤睾丸的缓解方法,以深入揭示白消安对睾丸细胞和BTB功能与结构的毒害作用,为研发高效安全的SSCs移植受体制备技术,以及化疗药物治疗和环境毒素作用下生精机能科学防护与恢复提供科学参考。     

白消安对睾丸的毒害作用及机制探讨

白消安(busulfan)对精子发生具有较强毒害作用,可导致雄性不育,是制备精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs)移植受体的理想药剂。睾丸炎对生精机能也有重要影响,甚至能导致雄性不育。然而,白消安损害血睾屏障(blood-testis barrier, BTB),影响精子发生的机制尚不清楚,尚不知其是否会导致非传染性睾丸炎症,并影响细胞因子分泌,损害生育能力。因此,本文综述了白消安对BTB的破坏作用、对睾丸细胞相关功能蛋白的影响,以及白消安损伤睾丸的缓解方法,以深入揭示白消安对睾丸细胞和BTB功能与结构的毒害作用,为研发高效安全的SSCs移植受体制备技术,以及化疗药物治疗和环境毒素作用下生精机能科学防护与恢复提供科学参考。     

羊胚胎移植的实用操作技术

胚胎移植是一种应用于哺乳动物的繁殖技术，通过采用外源生殖激素对优秀供体个体进行超排处理，在早期胚胎时期从输卵管或子宫内将胚胎冲洗出来。移植到另一只经同期化处理的未配种的受体内，使其发育成为胎儿。羊的胚胎移植是从经过超数排卵处理的少数优秀母羊（供体羊）的子宫内取出多个具有优良遗传性状的早期胚胎，移植到另一群母羊（受体羊）的相应部位，来生产供体羊后代的技术。其基本程序主要包括：供体和受体的选择、供体的超排、受体同期化处理、胚胎冲冼。回收、检胚和移植。早在1949年，世界首例羊胚胎移植便获得成功，如今，胚胎移植技术已发展成为家畜繁殖生物工程中成熟度较高的技术之一，它在羊的纯种繁育、快速扩群及提高优质高产种羊繁殖率等方面具有重要作用。     

雌激素对睾丸发育及生精功能的影响

雌激素与睾丸的功能密切相关.人和哺乳动物体内雌激素的合成需芳香化酶(Ar)的参与,而雌激素与特异受体(ERα、ERβ)结合后才发挥生物学效应.在睾丸所有发育阶段,芳香化酶和雌激素受体几乎都有表达.在睾丸发育过程中,雌激素的缺乏对胎儿睾丸的发育有利.但对成年动物来说,大剂量的雌激素可以引起睾丸功能紊乱和生精障碍,而体外条件下小剂量的雌激素又能促进精原细胞的分裂、增生和分化,诱导精子发生和精子成熟,减少细胞凋亡.文章主要从睾丸内雌激素的来源、芳香化酶和雌激素受体的分布、雌激素对胎儿和新生儿睾丸发育以及对精子发生的影响这几个方面进行了综述.     

精原干细胞移植的研究进展

精原干细胞移植原理与其它细胞移植原理相似,主要利用显微注射法,将供体的精原千细胞移入受体睾丸内,使其能够继续进行生精过程。结合精原干细胞分离培养、纯化、冷冻,该技术开创了基因工程和家畜生产的新途径。本文对精原干细胞的分离培养、纯化、冷冻,以及同源移植和异源移植进行了简要综述。     

牛胚胎移植技术及其主要影响因素

胚胎移植（ET）是继人工授精技术之后家畜繁殖技术领域的又一次革命。胚胎移植是指将供体早期胚胎从其体内取出或体外生产的胚胎,移植到另一头同种且与胚胎发育阶段相符的受体子宫内，使之继续妊娠发育为新个体的过程。基本程序包括：供体和受体的选择、超数排卵处理、供体母畜的配种、胚胎的收集、胚胎的检查、胚胎的保存与培养、胚胎的移植、供体和受体的术后观察及饲养管理。     

体外精子发生培养方法研究进展

近1个世纪以来,科研人员致力于研究在体外培养的条件下产生具有功能的精子。直到近几年,研究人员才成功利用体外组织培养的方法获得了具有受精能力的精子。体外研究精子发生的方法主要有组织培养法和体外培养分离细胞的方法,结合两种方法将分离的生殖细胞移植到睾丸组织中进行组织培养。作者回顾了体外精子发生的培养方法,为临床应用和阐明精子发生机制的基本问题提出相关见解。     

牦牛与犏牛联会复合体蛋白b-FKBP6基因的表达特征分析

<正>联会复合体蛋白FKBP6是哺乳动物精子发生减数分裂联会复合体形成必需的。采用RT-PCR和荧光定量PCR技术对牦牛和犏牛b-FKBP6基因的组织表达特征,以及牦牛与犏牛睾丸组织中b-FKBP6 mRNA表达水平进行了分析。结果显示:b-FKBP6基因在牦牛、犏牛睾丸和卵巢组织中特异表达,且牦牛睾丸组织中b-FKBP6mRNA表达水平极显著高于犏牛(P0.01)。结合犏牛精子发生减数分裂联会复合体形成障碍表型,推测睾丸组织b-FKBP6 mRNA表达     

用猪皮异种移植物治疗马皮肤缺损

早在100年前就有人企图用异种移植物传到皮肤缺损初步闭合的目的。移植技术之难度和受体部位不良的条件常阻碍分离的厚皮移植的应用。缺乏供给大面积烧伤、擦伤和皮肤撕脱病例应用的皮肤,增加这种方法的难度。应用异种移植物具有许多潜在的优点。Silvetti等人与1957年首次报导了牛胚胎异种移植物的应用及其治疗结果的研究情况。发现了抗原性     

牛的胚胎移植

胚胎移植又称受精卵移植 ,是从一头母畜 (称为“供体”)的生殖器官里取出附植前的受精卵 (又称为“胚胎”) ,直接或经冷冻保存再解冻后移植到另外一头与供体同时发情排卵但未经配种的母畜 (又称为“受体”)的相应部位 ,使这个外来的胚胎在受体的子宫着床 ,并继续生长和发育 ,最后产下供体的后代 ,即“借腹怀胎”。牛的胚胎移植是选择遗传品质优良、体质健壮结实、体型优美具有高产能力的母牛 (供体 ) ,使用人工措施使之超数排卵 ,经受精后 ,将胚胎取出借用其他母牛 (受体 )的子宫 ,同时生出供体的多个犊牛的方法。牛的胚胎移植具有极为重要…     

精原干细胞标记及活体追踪的研究进展

研究表明,精原干细胞（spermatogonial stem cells,SSCs）具有重建不育个体精子发生的能力。采用细胞标记试剂标记精原干细胞,可以活体追踪移植至睾丸的精原干细胞命运,即在发育过程中的增殖、运动及分化情况。标记和追踪精原干细胞将有助于了解精子发生恢复的机理并选择最优的移植策略。     

影响牛胚胎移植效果的因素分析

近年来,胚胎移植技术在我国发展迅速,并在生产中得到了一定的应用,但由于费用比较高,且移植成功率受到很多因素影响,使其推广受到了很大限制。本文就牛胚胎移植过程中影响其移植成功率的几个方面因素,包括供体和受体牛的选择、供体和受体牛的同期发情程度、胚胎质量、移植者的技术操作水平、受体牛的饲养管理以及移植季节等作一综述。     

羊驼睾丸细胞凋亡及凋亡相关蛋白的定位

本研究旨在观察羊驼睾丸的出生后发育和精子发生过程中的细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl2和Caspase3 的定位.取材新生、12月龄和24月龄羊驼的睾丸,用TUNEL法检测睾丸发育和精子发生过程的细胞凋亡,用免疫组织化学技术检测凋亡相关蛋白Bcl2和Caspase3在羊驼出生后发育和精子发生过程中的定位.结果显示在新生羊驼睾丸未检测到TUNEL阳性细胞,Caspase3和Bcl2表达于间质细胞,提示在新生期凋亡蛋白参与间质细胞凋亡的调节,为曲精小管的发育提供空间;12月龄羊驼睾丸TUNEL阳性细胞定位于曲精小管中央部分,Caspase3 和Bcl2定位于间质细胞和曲精小管中央生殖细胞,提示在青春期(12月龄)羊驼睾丸,细胞凋亡和凋亡相关蛋白参与曲精小管管腔形成的调节;24月龄羊驼睾丸TUNEL阳性细胞定位于精原细胞、精母细胞和精子细胞,Caspase3 和Bcl2定位于间质细胞和各个发育阶段的生精细胞,Caspase3阳性细胞在精原细胞最高,向精母细胞和精子细胞逐渐减少,Bcl2在精原细胞弱阳性表达,在血睾屏障以内的曲精小管近腔室部分呈弥散性强阳性表达,提示在性成熟(24月龄)羊驼睾丸精子发生过程中,细胞凋亡主要发生于精原细胞和早期精母细胞,Bcl2可能抑制精母细胞之后生殖细胞的凋亡.结果提示在羊驼睾丸出生后发育和精子发生过程中存在细胞凋亡现象;凋亡蛋白Caspase3和Bcl2参与羊驼睾丸发育和精子发生过程中细胞凋亡的调节.     

猪内源性逆转录病毒对异种组织器官移植影响的研究进展

猪内源性逆转录病毒(Porcine en-dogenous retrovirus,PERV)是新发现的对人细胞具有感染性的且存在于正常猪体内的病毒,在异种组织器官移植过程中可能向人传播,直接威胁到接受移植者的健康甚至生命,这是异种组织器官移植首要克服的难题。由于PERV近年来才受到广泛关注,所以人们对PERV的分类,对人类和其他动物的危害性及病原的检测均不能完全确定。文章旨在提供上述几方面的研究现状,以期为PERV的深入研究奠定基础。PERV能影响移植受体的生殖,抑制受体免疫体系;对其他物种的细胞或活体都可能产生体外和体内感染性;目前有多种PERV检测方法,为受体和供体的病毒监控提供了依据。     

犬同种异体半月板的移植

为了探索犬半月板损伤的有效治疗方法,本研究建立了犬半月板缺损模型,并采用同种异体半月板全移植和半移植2种方式修复半月板缺损。术后第5周末,所有移植犬站立、行走和上台阶均趋于正常,但不移植的半月板缺损对照犬行走时仍有轻度跛行,上台阶困难。术后第6周膝关节功能Lysholm评分,全移植组和半移植组与正常对照组差异不显著,不移植组与对照组差异显著。肉眼检查见供体半月板在受体内生长良好。半移植组供体半月板的色泽和弹性更接近正常半月板。组织学观察,供体半月板和受体关节囊、供体半月板和保留的受体半月板接合良好,接合处组织生长旺盛。胫骨平台软骨Mankins评分,全移植组和半移植组与对照组差异不显著,不移植组与对照组差异显著。本研究结果表明同种异体半月板移植可有效保护胫骨平台软骨、改善膝关节功能,完全可以用于犬半月板损伤的治疗。     

精原干细胞及其在转基因技术中的应用

睾丸内生殖细胞分化起源于不断更新的干细胞小池,继而首先引起生精细胞(精原细胞)分化。这些定型细胞然后遵循一个固定的程序进行演化,它们首先同步化地进行六次有丝分裂,然后进入第一次减数分裂期。以形态学和细胞学标准,鉴别精原干细胞,根据注入不育者睾丸的分化活力,进行功能检测。目前干细胞的纯化和鉴定研究取得了日新月异的发展。生殖系生物学基本理论和多个领域中的临床前研究将会从中得益,同时附植前的基因转移为转基因技术开辟一条崭新的途径。细胞特征:①源于初生睾丸生长捕获生殖母细胞的少量精原干细胞(2～3×104/成年睾丸),主要分布在生精小管的周围;②细胞遗传学分析首次鉴定表明,它们是缺乏异染色质的圆形小细胞;③通过移植入缺乏生殖细胞的受体睾丸,在功能上表现为具有重建永久精子发生的能力;④基于α6β1整合素和CD9表达,可以获得较高浓度的精原干细胞,在转基因启动子驱动下异源表面蛋白质得以表达,可进一步纯化产物;⑤逆转录病毒载体能使基因转移先于移植,转基因后代随后即可产生。