小麦纹枯病菌原生质体制备条件及再生菌株致病性研究

以小麦纹枯病菌HD-6为对象,进行原生质体制备与再生研究,并将再生菌株与原始菌株的致病性进行比较分析,为建立小麦纹枯病菌高效遗传转化体系提供依据.选用溶壁酶、崩溃酶、蜗牛酶、纤维素酶4种常见酶分别对小麦纹枯病菌进行酶解,并通过单因素试验分析酶解温度、酶解时间以及溶液pH值对原生质体得率的影响.结果表明,4种酶均能够裂解小麦纹枯病菌细胞壁得到一定数量的原生质体,其中崩溃酶的裂解效果最好,每克菌丝得到的原生质体数可达到2.6×108个.该酶的最佳反应温度是24℃,最适的酶解时间是3h,最适的pH值是6.0.获得的原生质体可以完成再生,并且再生菌株与原始菌株的致病力没有显著差异.     

小麦纹枯病菌菌核形成条件研究

研究了小麦纹枯病菌在不同光照、温度、培养基条件下菌核数量形成的差异.结果表明,小麦纹枯病菌在不同的光照条件下都可以形成菌核,但是形成菌核数量有差异.小麦纹枯病菌在24 h光照(即G24)条件下产生的菌核数量最多,其次是光照12h,而在全黑暗(即G0)的条件下产生的菌核数量较少.小麦纹枯病菌在15～35℃条件下都可以形成菌核,且在15～30℃的条件下,随着温度的升高,菌核数量也在增加,而在高于30C的条件下形成的菌核数量在减少;小麦纹枯病菌在25～30℃条件下最有利于形成菌核且数量较多.最适合小麦纹枯病菌形成菌核的培养基是PDA培养基.     

河南省小麦纹枯病菌原及其致病性研究

1 998～ 2 0 0 0年 ,从河南省各地采集有明显症状的小麦纹枯病标样 ,从中分离出 2 5 1个丝核菌 (Rhizoctonia)菌株 ,其中 1 98株为禾谷丝核菌 (Rhizoctoniaceralis) ,占 78.9% ;5 3株为立枯丝核菌 (R .solani) ,占 2 1 .1 %。对 62个菌株的致病性测定结果表明 ,禾谷丝核菌和立枯丝核菌的致病力无显著差异 ,不同地区菌株的致病力亦没有明显差异 ,不同小麦品种对纹枯病菌的抗性显著不同。     

3种作物纹枯病菌生物学特性差异的比较

较系统地比较了水稻、玉米和小麦3种作物纹枯病菌的培养性状及其在不同培养基、温度、碳源、氮源、pH值和光照条件下生物学特性的差异。结果表明:供试的3种纹枯病菌菌株在菌落生长速率、菌落和菌核颜色、菌核数量和菌核在培养皿的分布等方面均有明显差异;水稻、玉米和小麦纹枯病菌在Czapek培养基上菌丝生长最快、产生的菌核最多,在Richard培养基上菌丝生长最慢,在WA培养基上产生菌核极少或无;水稻和玉米纹枯病菌菌株生长温度范围为10～35℃,最适温度为25～30℃,而小麦纹病菌枯菌株生长温度范围为5～30℃,生长最适温度为20～25℃;3种纹枯病菌菌株对供试碳源中的可溶性淀粉、蔗糖和葡萄糖能很好地利用,但水稻和玉米纹枯病菌菌株对甘露醇的利用能力最差,而小麦纹枯病菌菌株对乳糖的利用能力最差;硝酸钾、亚硝酸钠、硫酸铵、脲和L-亮氨酸5种氮源对3种纹枯病菌菌丝的生长影响不显著,但对菌核的形成有显著影响;3种纹枯病菌菌株在pH 4～10时均可生长和形成菌核,pH 6时生长最快、形成菌核较多。试验结果还表明,光照对3种纹枯病菌菌丝的生长影响无明显差异,但对菌核数量和颜色有显著影响。     

根癌农杆菌介导gfp基因转化水稻纹枯病菌及其对病原菌稳定性和致病力的影响

本文对根癌农杆菌介导gfp基因转化水稻纹枯病菌及其对病原菌稳定性和致病力的影响进行了系统研究。结果表明,30μg/m L潮霉素B可作为转化子的筛选浓度,水稻纹枯病菌遗传转化的最佳条件为:共培养AS浓度为250μmol/m L,预诱导时间为9 h,共培养温度为26℃,共培养时p H为5.8~6.0,共培养时间为22 h。分别对随机选取的5个转化子进行荧光显微镜观察、PCR扩增及测序。结果表明,绿色荧光蛋白基因gfp已成功转化到水稻纹枯病菌中。转化子稳定性及致病力鉴定结果表明,转化子连续转接5代后仍对潮霉素B具有抗性,表明gpf成功转化到水稻纹枯病菌中且稳定遗传。转化子与野生型水稻病菌导致的水稻发病程度基本一致,表明gfp遗传转化后对水稻纹枯病菌的致病力无显著影响。本研究结果为开展水稻纹枯病菌与水稻品种互作机制奠定了基础。     

福建省水稻纹枯病菌的致病力及遗传多样性分析

为了解水稻纹枯病菌群体遗传结构,对福建省三明、龙岩、福州三地区以及广东、黑龙江和辽宁等省的35个水稻纹枯病菌菌株生长速率、致病力进行了比较并进行了RAPD分析。结果表明,供试水稻纹枯病菌群体存在丰富的遗传多样性;RAPD分析将不同地理来源的菌株聚为遗传相近的一类;分析还发现,在群体水平菌丝生长速率与致病力存在一定的相关性,生长速率快,其群体致病力强;对福建省内稻区间的分析发现,来自三明的纹枯病菌群体生长速率和致病力最高,龙岩次之,福州最低。     

粘质沙雷氏菌S-JS1对甜菜夜蛾和斜纹夜蛾致病力的温度效应

为明确粘质沙雷氏菌S-JS1对甜菜夜蛾和斜纹夜蛾致病力的温度效应,采用饲毒法测定了该菌在不同使用温度和培养温度下的杀虫活性。结果表明,在22~31℃的使用温度范围内,粘质沙雷氏菌S-JS1对甜菜夜蛾和斜纹夜蛾3龄幼虫的致病力呈正温度系数,但在31~34℃,对甜菜夜蛾的致病力下降,呈负温度系数。对于22~34℃的培养温度,28℃培养的粘质沙雷氏菌SJS1对甜菜夜蛾和斜纹夜蛾致病力最高。因此,在一定的培养温度范围内,随着温度的升高,该菌对甜菜夜蛾和斜纹夜蛾致病力与温度先呈正相关,到达最佳致病力温度后再呈负相关。     

水稻纹枯病菌原生质体制备与再生条件的优化

为获得进行水稻纹枯病菌遗传转化所需的高质量原生质体,选用该病菌强致病力菌株GD-118,分别从酶种类、菌龄、酶解时间、酶解温度、酶液pH值和渗透压稳定剂及其浓度6个方面优化了原生质体的制备条件,从酶解时间和渗透压稳定剂及其浓度2个方面优化了原生质体的再生条件。结果表明:优化后的水稻纹枯病菌原生质体制备的最佳条件组合是"纤维素酶+溶菌酶+崩溃酶"组合酶、总酶终质量浓度10mg/mL、菌丝菌龄15h、酶解时间3h、酶解温度35℃、酶液pH5.6、以0.6mol/LMgSO4.7H2O为渗透压稳定剂,此最佳条件组合所制备的原生质体产率高达4.00×107/g;原生质体最佳的再生条件是酶解3h的原生质体在含1.0mol/L甘露醇的再生培养基上26℃时进行培养,在此条件下可获得最佳的再生效果,再生率为39%。     

黄瓜黑星病菌致病性研究 Ⅰ.病原物接种体浓度、菌龄与致病性的关系

小麦粒、高粱粒培养基是人工培养大量繁殖黄瓜黑星病菌较为理想的培养基。用喷雾法接种随着孢子浓度的增加，黄瓜子叶、真叶、下胚轴的发病率及病情指数增大。孢子浓度为２×１０６个／ｍｌ是适宜的接种浓度。病原菌菌龄增加，致病性明显减弱，菌龄在３３天以上无致病力。幼苗的不同部位以真叶最敏感，子叶、下胚轴次之。     

宁夏小麦赤霉病禾谷镰刀菌致病性分化的研究

将宁夏小麦赤霉病禾谷镰刀菌单饱分离的纯培养菌系10个有效菌株,分别接种在12个小麦品种和宁夏主栽小麦品种永良4号上,结果表明,禾谷镰刀菌系间存在较明显的致病性分化现象,对于不同品种其致病力不同,菌系和小麦品种间均表现出不同的反应。将宁夏小麦赤霉病禾谷镰刀菌的70个单孢纯培养菌株接种在宁夏主栽品种永良4号上,结果显示中致病力菌株占41.4%,弱致病力菌株占40%,强致病力菌株占18.6%。     

四川地区水稻纹枯病菌及其致病力研究

[目的]研究四川地区水稻纹枯病菌的培养性状及其致病力。[方法]对从四川地区6个水稻主栽点采集的水稻纹枯病样进行分离,将分离所得病菌用PDA培养基培养,记录其培养性状,并对分离得到的23个菌株进行致病力测定。[结果]不同菌株间的生长速率存在显著差异,23个菌株中只有1个菌株生长速率属于中等菌株（40 mm≤Φ≤60 mm）,其余都为慢型菌株（Φ〈40 mm）,无生长速率快的菌株（Φ〉60 mm）。致病力测定结果表明,菌株间致病力存在明显的差异,23个菌株中只有1个为强致病力菌株,其余为中等致病力菌株、无弱致病力菌株。[结论]该研究明确了四川地区水稻纹枯病病菌基本生物学特征,为该地区有效控制水稻纹枯病的危害提供了理论依据。     

安徽省水稻纹枯病菌致病力分化与遗传多样性

对分离自安徽省7个县(市)的32株水稻纹枯病立枯丝核菌在5个鉴别寄主上进行了致病力测定,分析了其遗传多样性。结果表明,水稻纹枯病菌各菌株间的致病力存在显著差异,安徽省水稻纹枯病菌中大多数为中等致病力。对这些菌株进行RAPD分析,结果显示,DNA多态率达98.2%,遗传相似性系数在0.62～0.84之间,表明水稻纹枯病菌遗传分化较大,群体结构多样性较丰富。在相似系数为0.653时,所有菌株可聚合为4类,聚合类型与菌株的地理来源相一致,菌株的致病力与RAPD聚类分析结果无相关性。     

水稻、玉米和小麦纹枯病菌对3种作物的交互致病性

【目的】明确水稻、玉米和小麦纹枯病菌菌株对水稻、玉米和小麦的致病力差异.【方法】本研究选用水稻、玉米和小麦的纹枯病菌菌株各20株,通过人工接种对这些菌株在水稻、玉米和小麦3种作物上的交互致病性进行了测定.【结果和结论】各供试纹枯病菌菌株都能单独侵染3种作物,但它们对不同作物的致病力存在较大差异:对原寄主的致病力较强,而对其他2种供试寄主的致病力较弱.本研究结果为预防作物轮作和间作过程中的交互感染提供了重要的理论依据.     

云南省烟草赤星病(Tobacco brown spot)病原研究及其防治药剂的筛选

对云南省烟草赤星病１２个代表菌株进行培养性状、形态特征和致病力测定以及防治药剂筛选。结果表明：它们属于长柄链格孢菌和链格孢菌,以后者居多。两者的菌落形态相似,温度反应一致;最低,最适,最高生长温度分别为５℃,２４℃－２８℃和３６℃,大多数链格孢菌的致病力比长柄链格孢菌致病力强。保鲜剂西爱是一种高效无毒无残留的理想防治药剂。     

四川水稻纹枯病菌分离、纯化及致病力鉴定

在四川特殊的生态条件下,通过对四川省东、南、西、北、中5个区域的55个具有代表性的县(市)水稻纹枯病样本进行分离、纯化与致病力鉴定.田间致病力鉴定研究发现,各菌株间致病力差异显著.通过对这些来自不同县(市)的病原菌与不同抗性水平水稻品种之间致病力差异比较,了解纹枯病菌的分布特点和致病力差异,为有效控制其流行、减少水稻纹枯病对水稻、玉米等农作物的危害打下基础,也为筛选到高抗纹枯病的育种材料和基因资源提供条件.     

7个松色二孢菌菌株生物学特性的研究

根据松公二孢菌７个菌株的菌落特征，子实体形态，致病力，营养生长及产孢条件，将其分为ＨＺ型和ＨＮ型２类进行观察。结果表明，来自湖南和湖北的ＨＺ型菌株致病力强，来自广东的ＨＮ型菌株致病力弱，且差异显著（α＝０．０５）。在供试培养基，ｐＨ和１５－３２℃条件下，ＨＮ型菌株菌落生长速度大于ＨＺ型菌株，气生菌丝更发达。ＨＺ型菌株与ＨＮ型菌株对高温（３６℃）和低温（１０℃）的适应性存在明显差异。光照，营养和温度     

不同培养基对小麦纹枯病菌生长繁殖及致病力的影响

采用不同的培养基培养小麦纹枯病病菌,结果表明:在改良的PDA培养基、PDA培养基 小麦叶汁培养基、V8培养基和番茄培养基上培养的病原菌比在其他的培养基上培养的病菌菌丝生长速度快,且其对3种小麦品种的致病力较其他培养基上的病菌强,因此可用这四种培养基复壮、保存小麦纹枯病病菌。     

杀菌化合物对小麦纹枯菌生物测定标准初步研究

筛选小麦纹枯菌强致病力菌株R46(Rhizoctonia cerealis R46),制成不同的接种体接种中感纹枯病的小麦品种扬麦158,结果表明:用于生物测定的纹枯菌优势接种体为玉米砂与菌碟混合体;玉米砂菌丝混合体接菌量与小麦发芽率呈高度负相关。接种时期试验表明,在小麦第1叶长出前接菌,其病情指数较高;在蛭石基质营养液中总氮为15g·L~(-1)、总钾为1g·L~(-1)时小麦苗病情指数较高。离体测定多菌灵、丙环唑对小麦纹枯菌的活性表明,菌丝线性生长抑制法比菌丝干重抑制法更为敏感;活体生物测定表明,小麦纹枯菌对井冈霉素、多菌灵、丙环唑敏感。     

不同品种水稻纹枯病菌遗传多样性及致病力分化

运用RAPD分子标记技术分析了从6个水稻品种上采集的40个水稻纹枯病菌菌株的遗传多样性，筛选出的10条引物共扩增出98条RAPD谱带，其中81条具有多态性，多态率为82.65%，菌株间的遗传相似性系数（以Nei‘s基因一致度表示）变幅为0.5644-0.9307，用UPGMA法可以将供试菌株分成4个RAPD聚类组群（Ⅰ、Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ），相同寄主来源的菌株基本上聚集在同一组群内，表明同一寄主来源的菌株间具有较近的亲缘关系，在温室条件下，致病力测定结果表明所有菌株对Tetep都有致病性，病电表 指数变幅在0.40-1183之间，分析结果表明，纹枯病菌群体存在丰富的遗传多样性，不同寄主上的水稻纹枯病性，病情指数变幅在0.40-11.83之间，分析结果表明，纹枯病菌群体存在丰富的遗传多样性，不同寄主上的水稻纹枯病菌群体间发生了很大的遗传分化（FST=0.632)。这种遗传差异与寄主的选择作用有一定的关系，RAPD聚类组群的划分和菌株的寄主来源有一定的相关性，但致病力差异与菌株的寄主来源及RAPD组群没有直接相关性。     

25%敌力脱乳油对小麦纹枯病菌的室内毒力测定

通过室内离体测定２５％敌力脱乳油对小麦纹枯病菌直接作用的毒力（ＥＣ５０、ＥＣ９９），并与井冈霉素的毒力相比较，以确定该药剂防治小麦纹枯病的使用浓度范围，为田间大面积推广应用提供依据。１材料与方法１．１供试菌种小麦纹枯病菌（Ｒｈｉｚｏｃｌｉｎａｃｅｒｅ...