面粉中小麦印度腥黑穗病菌的检疫鉴定

面粉中小麦印度腥黑穗病菌检疫的关键要点是分离孢子.为此,本文就如何从面粉样品中简便、快捷地分离与获得干净冬孢子进行了研究,并根据获得孢子多少与难易情况,采用30个孢子直径统计法和套式PCR检测法.与常规方法相比,这2种方法可以使检测时间缩短4～10倍.在样品中孢子极少的情况下,采用套式PCR检测方法,仅2个孢子就能作出定性判断,可以有效地避免小麦印度腥黑穗病菌漏检,进而提高口岸疫情检出率.     

套式PCR直接检测印度腥黑穗病菌冬孢子

用印度腥黑穗病菌冬孢子制备模板DNA ,利用印腥特异性引物T3 /T6,T3 /T4和套式PCR(nestPCR)扩增技术直接检测印腥冬孢子 ,检测的灵敏度可达 1个冬孢子。检测时间缩短为 1天。这种简单、快速、灵敏、实用和准确的PCR检测技术适用于口岸印腥检疫的需要 ,解决了常规PCR检测中DNA制备需要萌发冬孢子和检测时间长的难题。     

温度对小麦矮腥黑穗病菌冬孢子萌发的影响

温度对小麦矮腥黑穗病菌冬孢子萌发影响的试验结果表明,TCK冬孢子在-2～12℃范围内都可以萌发,5℃为最佳萌发温度。同一分离菌冬孢子在不同温度处理的萌发特性和萌发率有差异;不同分离菌冬孢子在相同温度下的萌发特性和萌发率有很大差异。在5℃下5个分离菌中,冬孢子萌发起始时间最短的为15 d,最长为35 d,培养60 d时分离菌T_t1、T_t2、T_y、T_m和T_u冬孢子的萌发率分别为86.4%、23.9%、23.3%、44.3%和81.0%。根据分离菌T_t2不同温度下培养50 d时的萌发率,建立了萌发率(Y)与温度(X)的模型为Y=0.150 8 exp[-0.02949(X-4.957 6)]2,此结果为TCK的风险评估提供了基础数据。     

小麦矮腥黑穗病菌冬孢子的显微电泳初步研究

引言目前,各口岸所鉴定小麦矮腥病菌Tilletia controversa Kuhn(以下简称TCK)主要是测量其孢子大小、网目大小、网脊高及胶鞘厚度来加以判断,只有找到非常典型的矮腥孢子才能出证。事实上,在进口的小麦中常混有大量的禾本科杂草种子,其上的腥黑穗孢子与 TCK 孢     

土壤湿度对小麦矮腥黑穗病菌(TCK)冬孢子萌发的影响

通过土壤湿度对小麦矮腥黑穗病菌(Tilletiacontronversa Kühn,TCK)萌发率的影响试验研究表明,其冬孢子在土壤质量含水量为1%～28%(相对含水量3.57%～100%)范围内均可萌发,其适宜萌发的土壤质量含水量范围为10%～25%(相对含水量17.85%～89.3%),最佳土壤相对含水量范围在65%～75%之间;不同分离物在相同土壤湿度培养下,多数分离物冬孢子的萌发率之间差异不显著。根据分离菌T_t1和T_t2在不同土壤湿度下培养50d和60d的冬孢子萌发率,建立了TCK冬孢子萌发率与土壤相对含水量的关系模型,此结果为TCK的风险评估提供了基础数据。     

应用聚合酶链反应技术鉴定印度腥黑穗病菌

用一对专化于印度腥黑穗病菌的引物Ｔ１１７Ｍ１（５＇－ＴＣＣＣＣＴＴＧ－ＧＡＴＣＡＧＡＡＣＧＴＡ－３＇）和Ｔ１１７Ｍ２（５＇－ＡＧＡＡＧＴＣＴＡＡＣＴＣＣＣＣＣＣＴＣＴ－３＇）可特异地扩增印度腥黑穗病菌产生一段８２５ｂｐ的产物,而稻粒黑粉病菌则不能被扩增。实验还表明,用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测灵敏度可达到１００个未萌发的冬孢子,这为进口粮印度腥黑穗病菌的检疫提供了有力工具。     

进境船舶食品舱小麦印度腥黑穗病菌

小麦印度腥黑穗病菌是一种世界性的检疫性的有害生物,我国迄今未有报道.     

苜蓿锈病菌冬孢子萌发研究

 苜蓿锈病(Uromyces striatus Schroet)是世界性分布的苜蓿病害。我国北方许多苜蓿产区,如甘肃东部,宁夏中、南部和内蒙古的中部和东南部等地区,常造成严重危害,但国内对此病研究不多。     

进境船舶食品库面粉中携带小麦印度腥墨穗病菌的检验方法

天津口岸首次从进境船舶的食品库面粉中检出小麦印度腥黑穗病菌。本文结合进境船舶现场检疫，通过实验室内一系列的摸索试验，找到了进境船舶的食品库面粉中携带小麦印度腥黑穗病菌快速有效的检验方法，即直接镜检法。     

小麦矮腥黑穗病菌对温度的敏感性

通过研究小麦矮腥黑穗病菌不同菌株冬孢子萌发对温度的敏感性,进一步明确不同TCK菌株冬孢子萌发对温度的反应,以便深入了解此病害发生和流行的成因.选取采自不同年份的45个TCK菌株,室内控制不同温度条件下对这些菌株的萌发过程及萌发特性进行观察记录,分析所得数据.5℃和10℃不同培养温度下,参试菌株的萌发率和萌发过程存在显著或极显著差异.同一采集年份不同菌株在相同培养温度下,萌发过程和萌发率有明显的差异,随着保存年限的增长,菌株冬孢子的萌发率会逐渐下降,但在常温下放置8年左右的部分菌株仍然具有萌发能力.不同的菌株萌发对温度确实具有不同的敏感性,此结果为防止该病害的传入、定殖、传播以及预测和防治决策提供了重要依据.     

小麦矮化腥黑穗病菌冬孢子的定量检测及几种计数方法的比较

用人工污染有小麦矮化腥黑穗病菌Tilletia controversa Kuehn冬孢子的小麦样品，按国家标准GB／T18085－2000规定的洗涤程序，对TCK的定量检测以及3种冬孢子计数方法进行了比较研究，并建立了定量评估样品中孢子量的方法。研究表明，使用国际种子检验协会（ISTA）的标准种子洗涤方法仅能发现30．72％－46．58％的TCK孢子，检验洗涤后的小麦表面，仍可分析有大量孢子沾附于小麦种子表面。应用回归分析，建立了定量评估样品中孢子的方程Y＝2．0131（X＋2）^1.0325-2。通过比较3种孢子计数方法，认为依据国标建立的计数方法得到的结果变异最小。     

制约稻粒黑粉病菌冬孢子萌发的关键因素

在相同条件下，从稻田直接收集的病粒中的稻粒黑粉病菌厚垣孢子不能萌发，而取之于仓库中的孢子能萌发。为探明其制约因素，对该病菌进行了光照和浸水时间试验。研究结果表明：稻粒黑粉病菌冬孢子形成后，必须经光照射后，方可进入休眠期；度过5～6个月休眠期的冬孢子，必须浸水48h以上才开始复苏；复苏后的冬孢子必须在光照条件下才能萌发。未完成后熟作用的冬孢子和完成后熟但尚未复苏的冬孢子即使在光照条件下也不能萌发。即稻粒黑粉病菌冬孢子必须经历后熟、休眠、复苏三个阶段后，在适宜的光照与温湿条件下，方可萌发。光照对其冬孢子具有双重作用，促使后熟进入休眠和刺激萌发。     

TaqMan-MGB探针在小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌鉴定上的应用

根据小麦印度腥黑穗病菌Tilletia indica和黑麦草腥黑穗病菌T.walkeri核糖体ITS序列设计了两对通用引物和两条特异性探针,建立了小麦印腥印度腥黑穗病菌Tilletia indica和黑麦草腥黑穗病菌T.walkeri的实时荧光PCR检测方法,检测的灵敏度为1个冬孢子.这种检测方法可以直接用于样品小麦印腥和黑麦草腥黑穗病菌冬孢子的快速检测,整个检测过程缩短至1天.     

小麦印度腥黑穗病菌鉴定方法的新进展

自1930年印度西北部Haryana邦的Kamal地区首次发现小麦印度腥黑穗病(Tilletia indicaMitra,以下简称印腥)以来,由于感病寄主的广泛种植和适宜环境条件的存在,该病已在世界范围内的不同生态区迅速传播蔓延,在70年左右的时间内从一个危害轻微的地方性病害发展为威胁世界小麦生产和贸易的危险性真菌病害.     

麦麸中小麦矮腥黑穗病菌孢子的提取方法

 对麦麸中小麦矮腥黑穗病菌孢子的提取方法进行了研究。通过建立的"过筛-α-淀粉酶降解"、"过筛-密度梯度离心"和"过筛-α-淀粉酶降解-密度梯度离心"等方法能从麦麸中提取TCK孢子。提取的TCK孢子数量与网筛、α-淀粉酶和密度梯度离心的应用情况有关,而提取的TCK孢子纯度则主要与密度梯度离心有关。选用双层纱布和5种不同规格的网筛或网筛组合进行过筛能弃除83.88%~94.09%的麦麸,应用"过筛-α-淀粉酶降解"方法能弃除95.01%~99.00%的麦麸,并能提取19.2%~51.7%的TCK孢子。在"过筛-密度梯度离心"实验中,只有60目+200目+300目+30μm+11μm该网筛组合处理能获取7.2%的纯孢子,密度梯度离心对孢子的网嵴高度、自发荧光和萌发没有影响;在"过筛-α-淀粉酶降解-密度梯度离心"实验中,60目+200目+300目和60目+200目+300目+30μm+11μm这2组网筛处理可分别得到18.8%和12.2%的纯孢子,该处理对孢子网嵴高度没有影响。     

小麦印度腥黑穗病菌PCR检测

应用PCR方法对小麦印度腥黑穗病菌及其近似种或相关种包括黑麦草腥黑粉菌、狼尾草腥黑粉菌、水稻腥黑粉菌等10种腥黑粉菌共14个菌株进行了检测研究。根据线粒体DNA的序列分别设计了扩增小麦印度腥黑穗病菌的特异性引物和扩增黑麦草腥黑粉菌的特异性引物，根据核糖体内转录区（ITS）DNA片段设计了扩增腥黑粉菌属真菌的引物，应用PCR方法能将小麦印度腥黑穗病菌与黑麦草腥黑粉菌及其它近似种或相关种加以区分。本方法稳定、可靠、重复性强，已分别在不同实验室的不同型号PCR仪上得到验证。     

5种药剂对小麦光腥黑穗病菌的毒力和孢子萌发形态结构的影响

采用琼脂平板孢子萌芽法测定了卫福 200、多菌灵、烯唑醇、戊唑醇和三唑酮5种药剂对小麦光腥黑穗病菌的抑制作用和毒力,同时检测了药剂对病菌冬孢子萌发形态结构的影响。结果表明,5种药剂在一定浓度范围内对病菌孢子萌发抑制作用随着药剂浓度提高而增强,对病菌的EC50分别为 1.6102、0.3038、4.4892、1.6103和 0.3896mg·L-1,多菌灵对光腥黑穗病菌的毒力高于其它4种供试药剂。通过光学显微镜和扫描电子显微镜观察表明,药剂作用下光腥黑穗病菌孢子萌发出现3种类型畸形,导致正常发育受到抑制。