中美小麦矮腥黑穗病菌鉴定合作研究 Ⅰ.自发荧光显微学特性研究

中美双方为探讨适用于进口粮检疫的小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa Kuehn,以下简称TCK)准确简便的鉴定方法,于1989～1992年进行联合试验。本文以美国不同时期和不同地域所收集的小麦矮腥黑穗病菌(TCK)和小麦网腥黑穗病菌(T.caries Tul.,以下简称TCT)共135个菌株为材料,对这两种病菌的自发荧光显微学特性,作了比较研究,建立了数学模型,并在人工污染样品中进行了应用研究,结果表明,自发荧光显微学法和LI-F方程,可以有效地鉴别TCK或TCT菌株,但如应用于鉴别进口粮中混合的或少量的TCK、TCT冬孢子,则其准确率随孢子含量的下降而降低。     

中美小麦矮腥黑穗病菌鉴定合作研究:I.自发荧光显微学特性研究

 中美双方为探讨适用于进口粮检疫的小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa Kuehn,以下简称TCK)准确简便的鉴定方法,于1989~1992年进行联合试验。本文以美国不同时期和不同地域所收集的小麦矮腥黑穗病菌(TCK)和小麦网腥黑穗病菌(T.caries Tul.,以下简称TCT)共135个菌株为材料,对这两种病菌的自发荧光显微学特性,作了比较研究,建立了数学模型,并在人工污染样品中进行了应用研究,结果表明,自发荧光显微学法和LI-F方程,可以有效地鉴别TCK或TCT菌株,但如应用于鉴别进口粮中混合的或少量的TCK、TCT冬孢子,则其准确率随孢子含量的下降而降低。     

中美小麦矮腥黑穗病菌鉴定合作研究 Ⅱ.比较形态学研究

对美国135个小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa Kuehn,以下简称TCK)及小麦网腥黑穗病菌(T.caries Tul.以下简称TCT)进行的比较形态学研究表明,网脊高度最具有鉴别意义。在中美双方所测的近万个数据中,TCK与TCT菌株的平均网脊高度值很少交叉,两个种在网脊高度上的区别具有种间的规律性和鉴别性。经人工污染样品及市场样品对各种模型的检测证明,根据逻辑方程推导出的临界网脊值可用于市场样品检验中对TCK的判别和鉴定,从而为准确、快速地鉴定进口粮中少量的或混合的TCK、TCT冬孢子提供了新途径。     

中美小麦矮腥黑穗病菌鉴定合作研究:II.比较形态学研究

 对美国135个小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa Kuehn,以下简称TCK)及小麦网腥黑穗病菌(T.caries Tul.以下简称TCT)进行的比较形态学研究表明,网脊高度最具有鉴别意义。在中美双方所测的近万个数据中,TCK与TCT菌株的平均网脊高度值很少交叉,两个种在网脊高度上的区别具有种间的规律性和鉴别性。经人工污染样品及市场样品对各种模型的检测证明,根据逻辑方程推导出的临界网脊值可用于市场样品检验中对TCK的判别和鉴定,从而为准确、快速地鉴定进口粮中少量的或混合的TCK、TCT冬孢子提供了新途径。     

用荧光显微技术区分小麦网腥和矮腥黑穗病菌的冬孢子

自1974年中华人民共和国不允许进口船运小麦中带有小麦矮腥黑穗病菌Tilletia controversa Kuhu冬孢子,因而需要找出它与小麦网腥黑穗病菌T.caries(D C)Tul.之间可见的形态差别。这两种真菌冬孢子都有很易区分的三层壁,最外层是半透明的鞘,可用负染技术观察;网状壁层象一张由脊形成的网覆盖着冬孢子;最内层邻近细胞质的称为内孢层。     

应用聚合酶链反应技术鉴定印度腥黑穗病菌

用一对专化于印度腥黑穗病菌的引物Ｔ１１７Ｍ１（５＇－ＴＣＣＣＣＴＴＧ－ＧＡＴＣＡＧＡＡＣＧＴＡ－３＇）和Ｔ１１７Ｍ２（５＇－ＡＧＡＡＧＴＣＴＡＡＣＴＣＣＣＣＣＣＴＣＴ－３＇）可特异地扩增印度腥黑穗病菌产生一段８２５ｂｐ的产物，而稻粒黑粉病菌则不能被扩增。实验还表明，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测灵敏度可达到１００个未萌发的冬孢子，这为进口粮印度腥黑穗病菌的检疫提供了有力工具。     

应用激光共聚焦显微扫描术研究小麦矮腥黑穗病菌和小麦网腥黑穗病菌冬孢子的自发荧光特性

本文应用共聚焦激光扫描显微术(CLSM)对小麦矮腥黑穗病(TCK)和小麦网腥黑穗病菌(TCT)冬孢子的自发荧光特性进行了研究。研究表明:在这两种冬孢子中,它们各自都含有自发荧光物质,而且都能在488nm、543nm这2种波长激发光激发下,分别在相应的510～530nm、580～600nm范围中得到相应发射光,只是在488nm波长激发光激发下,两种冬孢子发射出的光荧光强度最高,荧光光分布均匀,大体形态清楚;但层切扫描发现自发荧光在这两种冬孢子的空间分布存在明显差异:TCK冬孢子的自发荧光物质主要分布在外孢壁和网脊上,而在原生质中分布少;TCT冬孢子的自发荧光物质主要分布在原生质中,孢壁分布少,而网脊上不分布。应用CLSM在实际TCK检测工作中,能克服荧光显微镜存在的检测重复性较差、可靠性小的缺点,提升了TCK检验检疫的技术水平。     

从进口草籽中截获绒毛草腥黑穗菌

本文介绍了小麦矮腥黑穗病菌（ＴＣＫ）的近似种－绒毛草腥黑穗菌（ＴＨＳ）的检验鉴定情况,并详细比较了两种黑粉菌,发现两种冬孢子萌发对温度条件要求不同。     

小麦矮腥黑穗病孢子不同药剂处理发芽试验

小麦矮腥黑穗病孢子不同药剂处理发芽试验魏哲轩（连云港动植物检疫局２２２０４２）小麦矮腥黑穗病ＴｉｌｅｔｉａｃｏｎｔｒａｖｅｒｓａＫüｈｎ（ＴＣＫ）孢子萌发，是学术界在探讨的一个课题，很多学者都在进行研究。试图在温度、湿度、光度及ｐＨ值等方面索求促其萌...     

应用计算机视觉技术自动识别TCK冬孢子的研究进展

应用计算机视觉技术自动识别ＴＣＫ冬孢子的研究进展陈克，王圆，吴品珊（农业部植物检疫实验所北京１０００２９）在进口粮检疫中，小麦矮腥黑穗病菌（ＴＣＫ）占有相当重要的地位，但ＴＣＫ与网腥（ＴＣＴ）的鉴别一直是个难题。在１９８９～１９９２年“中美ＴＣＫ鉴定...     

进境剪股颖草种中腥黑粉菌的检验鉴定

侵染剪股颖的腥黑粉菌是我国尚未发生的一种真菌病害，也是小麦矮腥黑穗病菌(TCK)的近似种。本文介绍了该病菌的检验鉴定情况，并从冬孢子形态、自发荧光现象及萌发生理特性几方面比较了两种病菌的差异。     

应用TaqMan MGB探针检测小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌

 以小麦印度腥黑穗病菌9个菌株和黑麦草腥黑穗病菌5个菌株及其近似种或相关种:稻粒黑粉菌、狼尾草腥黑粉菌、狗尾草腥黑粉菌、苏玛特腥黑粉菌、狐尾草腥黑粉菌、小麦网腥黑穗病菌和小麦矮化腥黑穗病菌共9种22个菌株为研究对象,通过序列比对分析,设计了检测小麦印度腥黑穗病菌及黑麦草腥黑穗病菌的TaqMan MGB实时荧光PCR引物和探针,优化了反应条件,筛选出特异性探针,分别建立了小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌实时荧光单重PCR和实时荧光双重PCR检测方法,其中实时荧光双重PCR检测方法实现了在同一PCR管中仅用5μL的反应体系,进行1次PCR反应就能特异性检测出小麦印度腥黑穗病菌或黑麦草腥黑穗病菌。本研究所建立的检测方法特异性强、结果可靠、检测速度快、成本明显降低,在文际应用中具有推广价值。     

应用激光共聚焦显微扫描技术鉴别小麦矮腥黑穗病病菌和小麦光腥黑穗病病菌冬孢子

应用激光共聚焦扫描显微术(CLSM)对小麦矮腥黑穗病病菌(TCK)和小麦光腥黑穗病病菌(TFL)冬孢子的自发荧光特性进行了研究。结果表明,两种冬孢子各自都含有自发荧光物质,均能在488 nm激发光下,分别在510~550 nm、530~600 nm中得到相应的发射光,且呈现的荧光分布均匀,大体形态清晰;而层切扫描发现自发荧光在这两种冬孢子的空间分布存在明显差异:TCK冬孢子的自发荧光物质主要分布在外孢壁和网脊上,而在原生质中分布少;TFL冬孢子的自发荧光物质主要分布在孢壁,原生质中分布少。     

小麦矮腥黑穗病菌的单孢接种侵染

采用进口美麦中截获的单个、经萌发的Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓａ Ｋｕｈｎ（ＴＣＫ）冬孢子人工接种创伤和未创伤的美国硬红冬小麦的胚芽鞘,每个胚芽鞘接种一个萌发ＴＣＫ冬孢子,接种后麦苗在５℃、１２ｈ光照和黑暗交替条件下接头２１或２９天,然后移植到离网室中的塑料周转箱中作常栽培管理,结果均得了ＴＣＫ病穗。这是单个萌发ＴＣ冬孢子引起小麦发病的首次报道。本试验结果表明,在自然条件下,当寄主和环境     

小麦矮腥黑穗病菌鉴定研究进展

小麦矮腥黑穗病菌鉴定研究进展李启新杜琦邓善英（青岛动植物检疫局２６６００２）麦类粮船的检疫检验无疑是对我们把关的一个重要考验,而其中小麦矮腥黑穗病菌ＴｉｌｅｔｉａｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓａＫｕｈｎ,以下简称ＴＣＫ的检验又是必不可少的一环。在我们日常的粮船...     

黑麦草粒腥黑粉病菌与黑麦草的检疫问题

黑麦草既是某些外来危险性病害如小麦矮化腥黑穗病菌的重要寄主;本身也受到很多病菌包括其他腥黑粉病菌的侵害;美国农业部在1996年至1997年继续对小麦印腥病菌疫区分布的调查中,在俄勒冈州及美国东南部等州发现了一种在形态学上非常近似于小麦印腥,但其寄主是黑麦草的病菌,进一步研究证明,此病原菌是与小麦印腥病菌非常近似的种-黑麦草腥黑穗病菌(Tilletia walkeri Castlebury and Carris 1999).本文综合了国内外对黑麦草粒腥黑粉病菌的最新研究成果,并探讨了黑麦草的检疫性保护问题.     

面粉中小麦印度腥黑穗病菌的检疫鉴定

面粉中小麦印度腥黑穗病菌检疫的关键要点是分离孢子.为此,本文就如何从面粉样品中简便、快捷地分离与获得干净冬孢子进行了研究,并根据获得孢子多少与难易情况,采用30个孢子直径统计法和套式PCR检测法.与常规方法相比,这2种方法可以使检测时间缩短4～10倍.在样品中孢子极少的情况下,采用套式PCR检测方法,仅2个孢子就能作出定性判断,可以有效地避免小麦印度腥黑穗病菌漏检,进而提高口岸疫情检出率.     

小麦矮腥黑穗病检验方法的改进

对小麦矮腥黑穗病Ｔｉｌｌｅｔｉａ ｃｏｎｔｒｏｖｅｒｓａＫｕｈｍ、以下简称（ＴＣＫ）实施麦粒带菌检验时，利用α－淀粉酶处理小麦筛下物的洗涤沉淀，可消除淀粉粒的干扰，提高孢子截获数量。在设定条件（７０℃，２０分钟内）下经淀粉酶处理后的ＴＣＫ冬孢子，其形态、大小、网脊高度和胶鞘厚度与对照均无明显变化。７０℃下，分别以５００、３００、２００、１００和０个酶单位／ｇ沉淀物的剂量处理２０分钟，以３００单位／     

腥黑粉菌属3种检疫性真菌rDNA-IGS区的扩增及其序列分析

 为了发掘腥黑粉菌属检疫性真菌的特异性分子标记,本研究对来自不同地区的3种检疫性腥黑粉菌:小麦矮腥黑穗病菌(Tilletia controversa)、小麦网腥黑穗病菌(T. caries)和小麦光腥黑穗病菌(T. foetida)的IGS区进行了PCR扩增和序列测定,其IGS1和IGS2区的长度分别为1 511~1 513bp和1 196~1 199bp,G+C含量分别为52.6%和49.0%。用DNA-MAN软件进行比对分析发现,这3种真菌在IGS1区存在不同程度的多态性,而IGS2区的保守性很强,没有特异性的碱基位点存在。依据它们在IGS1区序列的差异,设计了一对特异性引物,可用于T. foetida的分子检测,这是首次利用分子生物学技术对该菌进行鉴定。     

小麦矮化腥黑穗病菌冬孢子的定量检测及几种计数方法的比较

用人工污染有小麦矮化腥黑穗病菌Tilletia controversa Kuehn冬孢子的小麦样品，按国家标准GB／T18085－2000规定的洗涤程序，对TCK的定量检测以及3种冬孢子计数方法进行了比较研究，并建立了定量评估样品中孢子量的方法。研究表明，使用国际种子检验协会（ISTA）的标准种子洗涤方法仅能发现30．72％－46．58％的TCK孢子，检验洗涤后的小麦表面，仍可分析有大量孢子沾附于小麦种子表面。应用回归分析，建立了定量评估样品中孢子的方程Y＝2．0131（X＋2）^1.0325-2。通过比较3种孢子计数方法，认为依据国标建立的计数方法得到的结果变异最小。