猪多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

从黑龙江省某猪场发生的以呼吸道症状为特征的病死猪脏器中分离到3株细菌,通过触片镜检、细菌分离培养、常规生化试验和小鼠致病性试验等对该菌进行了初步鉴定,并进行了药敏试验检测。结果表明,分离菌为多杀性巴氏杆菌,对氟哌酸、丁胺卡那霉素、庆大霉素、红霉素、氯霉素敏感。     

猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒素检测

多杀性巴氏杆菌(pasteurella multocida，Pm)在世界各地分布非常广泛，在畜禽中带菌率较高，有资料指出，猪的鼻道深处和喉头内，带菌率为30．9％。多杀性巴氏杆菌按荚膜的不同可分为A、B、C、D和E5个血清型，其中A、B和D型已在猪中发现；多杀性巴氏杆菌还有16个体细胞血清型，在猪中检测到的有血清3型与5型，     

猪源荚膜血清F型多杀性巴氏杆菌分离鉴定

本研究对从病死猪肺脏分离出的1株菌株,经菌落形态观察、培养特性、生化反应、药敏试验、动物致病性试验,并采用PCR对该分离菌株进行菌种及荚膜血清型鉴定。结果显示,该分离菌株为较少见的荚膜血清F型多杀性巴氏杆菌,对小鼠有较强致病性,且对不同药物的敏感性不同,为指导临床科学用药提供依据。     

猪多杀性巴氏杆菌病病原的分离与鉴定

无菌采取病死猪的心、肝、脾、肺、肾等8份病料,进行细菌的常规分离培养与鉴定。结果:分离出多杀性巴氏杆菌,结合流行病学资料分析、临床症状、病理变化和实验室诊断,确诊为猪巴氏杆菌病。     

羔羊多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

应用实验室细菌学分离技术，从以咳嗽、呼吸等临床症状为主要特征的，死亡羔羊的肺、肝、脾、肾等组织中分离到一株病原菌。经细菌形态和培养特性观察，染色镜检，生化实验，结合临床症状及流行病学特点，确定该病原分离株为多杀性巴氏杆菌。     

猪多杀性巴氏杆菌的分离鉴定和药敏试验

为了对河南省猪高热综合征发生期间多杀性巴氏杆菌引起的感染有全面了解,从2006-2010年河南省发生猪高热综合征的245家规模化猪场568份病料中分离革兰氏阴性小球杆菌,通过培养特性试验、生化试验和PCR试验分离鉴定到35株。对分离菌进行毒力和药敏试验,结果显示所分离的猪多杀性巴氏杆菌对小鼠均有毒力,对头孢噻呋、头孢噻肟、环丙沙星、氟苯尼考敏感。     

猪源多杀性巴氏杆菌分离鉴定与药敏试验

2013年3月,迁安市某猪场2月龄仔猪发生一起以呼吸困难为主要临床表现的疾病,无菌采集病猪肺脏、心血等组织进行病原分离培养,经形态特征、培养特性、生化特性鉴定初步确定为多杀性巴氏杆菌,经对多杀性巴氏杆菌种特异性KMT基因的PCR检测,测序结果运用BLAST软件比对,与多杀性巴氏杆菌同源性为100%。动物致病性试验表明分离菌株有致病性。药敏试验显示分离菌株对复方新诺明、庆大霉素、卡那霉素耐药,对氟哌酸、土霉素中度敏感,对头孢噻呋、氟苯尼考、环丙沙星、恩诺沙星、阿莫西林抗菌药物敏感。     

猪多杀性巴氏杆菌病病原的分离与鉴定

猪巴氏杆菌病也称“猪肺疫”、“锁喉风”和“肿脖子病”等，是由多杀性巴氏杆菌引起的猪的一种急性、散发性的热性传染病。随着我国养猪业的不断发展，多杀性巴氏杆菌感染的危害性日益表现出来，本病一年四季均可发生，尤其是在冬春寒冷、夏秋季闷热潮湿、下雨时温差大、运输产仔等应激情况下，会使抵抗力下降，病菌侵入机体而发病，它是养猪业中常见疾病之一，     

猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其荚膜血清型鉴定

从病死母猪肺脏中分离到一株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验、致病性试验和PCR鉴定方法对分离菌株进行鉴定,并用多杀性巴氏杆菌荚膜分型引物对分离株的荚膜血清型进行鉴定。结果表明:本菌为猪多杀性巴氏杆菌,对多种抗生素高度敏感,对小白鼠有强致病性;PCR扩增16SrDNA基因获得1415bp片段,分离株的16SrDNA核苷酸序列与多杀性巴氏杆菌(AY078999)的同源性为99%,因此该分离菌株被鉴定为致病性巴氏杆菌,命名为YN20110122株;本菌分离株为荚膜A型血清型多杀性巴氏杆菌。     

天津地区禽多杀性巴氏杆菌分离株血清型鉴定

通过Ｃａｒｔｅｒ氏荚膜型鉴定方法和琼脂扩散试验,对天津地区禽多杀性巴氏杆菌血清型进行鉴定。结果１６株分离菌中１１株为Ａ：１（４）,４株为Ａ：１（３,４）,１株为－：１（４）表明引起天津地区禽霍乱的致病菌与国内报道的以Ａ：１型为主有一定的差异。     

乌苏里貉巴氏杆菌的分离鉴定

吉林省松原市某养貉场发生疫病,对病死貉进行剖检,见有典型的巴氏杆菌病的症状,然后对细菌进行分离培养和生化鉴定,证实引起貉死亡的是巴氏杆菌病。     

猪肺疫多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

为了研究四川乐山某猪场爆发的保育猪严重呼吸道疾病的主要病原,试验采用病理剖检、病毒检测、细菌分离鉴定、生化鉴定、动物回归试验以及多杀性巴氏杆菌种特异性KMT基因的PCR检测对病原进行鉴定。结果表明:发病猪有严重肺炎症状,支气管内部有少量泡沫,腹股沟淋巴结出血、水肿,其他实质器官未见明显病理变化;病毒检测结果显示为蓝耳病病毒阳性,猪瘟病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒2型阴性;从病猪肺脏中分离获得大肠杆菌和1株蓝耳病病毒继发的高致病性多杀性巴氏杆菌;该分离菌株对多种药物均高度敏感。     

禽霍乱多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

确定某鸭场疑似禽霍乱病的病原种类,为其临床用药提供参考。采用细菌分离技术对病原菌进行实验室分离培养,对分离到的病原菌进行了鉴定、动物攻毒试验、药敏试验和基因分型。结果显示,分离菌20170549具有多杀性巴氏杆菌典型培养特征,菌落形态和菌体染色特征、生理生化特性,基因测序结果均与多杀性巴氏杆菌相符;该菌株对小鼠有强致病性;分离株对头孢噻呋、甲砜霉素、硫酸黏菌素、阿米卡星、恩诺沙星、卡那霉素、庆大霉素、多西环素、氟苯尼考高敏;采用5对分型引物对分离菌进行基因分型,结果仅扩增到大小为1 050bp的目的基因片段,与A型结果相符。研究结果可为禽霍乱的防控提供参考。     

鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为鉴定临床疑似鸭多杀性巴氏杆菌感染肉鸭的病原菌,本试验通过细菌分离培养、菌体形态观察、细菌生化鉴定、16S rRNA基因测序分析、细菌种特异性鉴定、荚膜分型鉴定和动物回归试验进行鉴定,并通过药敏试验和耐药基因检测进行耐药性分析。结果显示,从患病鸭肝脏组织分离到的细菌在鲜血琼脂培养基中呈现表面光滑凸起、灰白色菌落,为革兰氏阴性短小杆菌,瑞氏染色呈两极浓染;生化鉴定结果显示,分离菌能发酵葡萄糖、蔗糖和甘露醇,硫化氢、氧化酶和吲哚等试验阳性;16S rRNA基因序列系统进化树分析显示,该分离菌与多杀性巴氏杆菌聚为一支,同源性 > 99%;细菌种特异性鉴定结果与多杀性巴氏杆菌相符;荚膜分型鉴定结果仅扩增到约为1 050 bp的目的基因片段,与荚膜血清A型相符;动物回归试验显示,该分离菌有较强的致病性;药敏试验结果显示,该分离菌对羧苄西林、氨苄西林、复方新诺明和四环素等12种药物耐药;经耐药基因PCR检测显示,该分离菌携带Sul1、Sul3、tet（X）和Intl1 4种耐药基因,与药敏表型相符。本试验成功分离到1株鸭源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌,为鸭多杀性巴氏杆菌病的防治提供参考依据。     

Isolation,Identification and Genotyping of Pasteurella multocida from Fowl Cholera

In order to determine the suspected avian cholera pathogen and geneotypes, bacteria isolation technology was used to isolate and culture pathogenic bacteria, the isolated bacteria were identified by traditional methods and molecular biological methods. Geneotyping of the isolated bacteria were determined using PCR technology and gene sequence analysis. The results demonstrated that the isolated bacteria had typical culture characteristics of Pasteurella multocida (Pm),and the morphology of the colony, the characteristics of cell staining, the physiological and biochemical characteristics were consist with Pm; 457 bp fragment was amplified by PCR. Geneotyping results showed that only A primer amplified the target gene fragment of 1 050 bp, sequence analysis also showed that the isolated bacteria shared 97.6% to 100.0% sequence homology with reference strains, and phylogenetic tree analysis showed that the isolated bacteria and A type Pm were in a branch.The experimental results indicated that the isolated bacteria was identified as capsular serotype A of Pm, the results provided reference for the prevention and control of fowl cholera.     

禽霍乱巴氏杆菌的分离鉴定及基因分型

为确定疑似禽霍乱病例病原种类及其病原基因型,本研究采用细菌分离技术对病原菌进行实验室分离培养,应用传统方法和分子生物学方法对分离细菌进行鉴定,并应用PCR扩增和基因序列分析对分离细菌进行基因分型。结果显示,分离菌具有多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）典型培养特征,菌落形态和菌体染色特征、生理生化特性均与多杀性巴氏杆菌相符;PCR扩增到457 bp的基因片段。采用5对分型引物对分离菌进行基因分型显示,仅有A型引物扩增到大小1 050 bp的目的基因片段,序列分析也显示分离菌荚膜基因与A型多杀性巴氏杆菌参考菌株荚膜特异性基因同源性高达97.6%~100.0%,系统进化与A型多杀性巴氏杆菌处于同一进化分支。结果表明,疑似禽霍乱病例病原为A型多杀性巴氏杆菌,本研究结果将为禽霍乱的防控提供参考资料。     

羊源D型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒力基因检测

为了确定石河子地区规模化羊场出现呼吸道症状死亡羊的细菌性病原,采用常规细菌分离鉴定方法、细菌16SrRNA序列分析以及多杀性巴氏杆菌特异性基因kmt,从病变肺组织分离鉴定细菌,利用5个荚膜血清型特异性基因确定其血清型,扩增分离株的16个毒力相关基因,分析分离菌致病性和对常用抗菌药物的耐药性。结果表明,从病羊的病变肺组织中分离鉴定到一株血清D型多杀性巴氏杆菌,具有较强的致病性;携带8个毒力相关基因,其片段序列与NCBI上己公布的多杀性巴氏杆菌参考株同源性在99%以上;分离株对青霉素、林可霉素、庆大霉素、复方新诺明耐药,对其他23种药物敏感。     

猪流感病毒广东株分离鉴定及遗传进化分析

本研究从广东省某猪场采集37份疑似猪流感症状的猪鼻拭子样品,接种于9日龄SPF鸡胚并收集尿囊液,通过血凝试验、血凝抑制试验和RT-PCR鉴定,分离得到一株猪流感病毒,经RT-PCR分别扩增8个基因片段,进行基因测序及序列分析,与GenBank收录的参考毒株比对并构建进化树。结果显示,分离毒株为H1N1亚型猪流感病毒,将其命名为A/swine/Guangdong/2/2018（H1N1）。遗传进化分析显示,分离株8个片段的核酸序列与A/swine/Guangdong/L3/2009（H1N1）对应序列的同源性均达99%以上,与经典型H1N1亚型猪流感病毒处于同一分支。分离毒株HA的裂解位点为PSIQSR↓GL,符合低致病性流感病毒分子特征。HA基因受体位点为190D、225G和226Q,表明本毒株既可以结合SAα-2,6-Gal型人类流感病毒SA受体,也有结合SAα-2,3-Gal型禽类流感病毒SA受体的可能,在28、40、104、304、498、557位氨基酸处有6个潜在糖基化位点;NA蛋白在50、58、63、68、98、146、235位氨基酸处有6个潜在糖基化位点,NA蛋白氨基酸序列活性中心位点为119E、199D、223I、275H、293R、295N,氨基酸分析位点未出现突变,表明本分离株对神经氨酸酶抑制剂类药物的敏感性较高,但在M2蛋白中,31位氨基酸由敏感型的（S）突变为抗药的（N）,提示可能对金刚烷胺类药物产生耐药性。开展猪流感病毒分离鉴定与遗传进化分析将为广东地区的猪流感流行和变异情况提供重要信息。     

2017年我国猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解2017年我国猪源多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida, Pm）的流行情况及其耐药情况,利用细菌分离培养和PCR方法分离鉴定Pm,对其荚膜血清型、地区分布和感染方式进行调查,并采用纸片法测定分离株对20种抗菌药物的敏感性。结果显示,从全国6288份临床病料中分离并鉴定出236株Pm,总分离率为3.75%。随机选取55株进行血清型分型,其中A型25株,D型27株,F型1株,未定型2株;分离率最高的省份为广东省（4.97%）,其次是河南省（3.69%）和湖北省（3.25%）;感染模式中,Pm单纯感染占比42.80%,混合感染占比57.2%,最常与链球菌和副猪嗜血杆菌共感染,比例分别为28.81%和12.29%。耐药性试验显示,Pm对强力霉素的耐药率高达83.64%,对卡那霉素、庆大霉素、链霉素和阿米卡星等氨基糖苷类药物的耐药率为43.64%～52.73%,对多粘菌素B和氧氟沙星最敏感（耐药率均为1.82%）。本研究表明我国猪群中Pm流行的主要血清型仍然是A型和D型,临床上Pm与其他细菌发生混合感染的情况普遍存在,并且对多种抗生素产生了耐药性。     

新疆和静县羊源多杀性巴氏杆菌分离鉴定及耐药性分析

为了解新疆地区羊群中多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)的致病性及耐药性,2019—2021年采集和静县规模场及散养户中患呼吸道疾病羊咽拭子、病死羊肺脏等病理组织样品304份进行病原菌分离鉴定,采用人工感染试验和K-B药敏纸片法分别检测其致病性及耐药性。结果显示:共分离到124株多杀性巴氏杆菌,分离率为40.8%(124/304),其中87株(70.2%)具有致病性,可以引起小鼠死亡,对小鼠的致死率为40.0%~100%;87株致病性多杀性巴氏杆菌对阿莫西林、多西环素、链霉素等9种药物的耐药率为44.8%~100%,对其他药物的耐药率为2.3%~36.9%,全部表现为多重耐药,以耐9~11种药物为主。结果表明,新疆和静县羊群中致病性多杀性巴氏杆菌流行较为普遍,耐药较为严重,应根据药敏试验结果,选择敏感药物合理使用,同时结合环境消毒对其进行控制。