用ELISA和PCB对猪、牛血清中HBV抗原、抗体及DNA的检测

用三个厂家生产的乙型肝炎（ＨＢ）ＥＬＩＳＡ试剂盒及聚合酶链反应（ＰＣＲ）对牛、猪和羊血清分别进行了乙型肝炎病毒抗原（ＨＢＶ－Ａｇ）、抗体（Ａｎｔｉ－ＨＢＶ－Ａｂ）及ＤＮＡ的检测。ＥＬＩＳＡ共检出阳性牛血清１３份（１３／１３６），其中ＨＢ＿ｓＡｇ阳性８份，ＨＢ＿ｅＡｇ阳性５份；阳性猪血清４份（４／３６），其中有ＨＢ＿ｓＡｇ阳性３份，ＨＢｅＡｇ阳性１份。全部阳性血清和部分阴性血清共１２０份经用ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ均为阴性，未扩增出特异性ＤＮＡ片段。此结果初步表明，无论家畜血清中有无ＨＢＶ－Ａｇ，均无感染性ＨＢＶ粒子存在，因此没有足够的证据担心家畜会在ＨＢＶ的传播上对人类构成威胁。     

用ELISA和PCR对猪,牛血清中HBV抗原,抗体及DNA的检测

用三个家生产的乙型肝炎（ＨＢ）ＥＬＩＳＡ试剂盒及聚合酶反应（ＰＣＲ）对牛、猪和羊血清分别进行了乙型肝炎病毒抗原（ＨＢＶ－Ａｇ）、抗体（Ａｎｔｉ－ＨＢＶ－Ａｂ）及ＤＮＡ的检测。ＥＬＩＳＡ共检出阳性牛血清１３份（１３／１３６），其中ＨＢ４Ａｇ阳性８份，ＨＢｅＡｇ阳性５份；阳性猪血清４份（４／３６），其中有ＨＢｅＡｇ阳性３份，ＨＢｅＡｇ阳性１份。全部阳性血清和部分阴性血清共１２０份经用ＰＣＲ检测ＨＢＶＤ     

夹心ELISA和斑点杂交试验检测鸭血清中鸭乙型肝炎病毒的比较

用单克隆抗体夹心ＥＬＩＳＡ和斑点杂交试验分别对４６例鸭血清样品中的鸭乙型肝炎病毒表面抗原（ＤＨＢｓＡｇ）和鸭乙型肝炎病毒（ＤＨＢＶ）ＤＮＡ进行平行检测，并根据夹心ＥＬＩＳＡ测定的Ｐ／Ｎ值和斑点杂交试验的反应斑点进行薄层扫描所测定的峰面积值，比较了１９例带毒鸭血清中ＤＨＢｓＡｇ和ＤＨＢＶＤＮＡ的相对含量。结果表明，两种试验的结果判定具有高度一致性。ＤＨＢｓＡｇ与ＤＨＢＶＤＮＡ在带毒鸭血清中呈并存关系，但其含量相关不显著（Ｐ＞０．０５）。     

用RPHA与ELISA检测牛血清中的类HBsAg物质

用ＲＰＨＡ和ＥＬＩＳＡ检测２４６头份牛血清中的ＨＢｓＡｇ。结果，ＲＰＨＡ检出阳性率为３６．６０％，ＥＬＩＳＡ检出阳性率为７．３％，将ＲＰＨＡ检出阳性牛血清与人的ＨＢｓＡｇ阳性血清比较，其阳性滴度远比人的低。牛血清经５７℃１小时热处理后，阳性率明显下降。牛血清中ＨＢｓＡｇ不能被ＨＢｓＡｂ完全抑制，表明，用ＲＰＨＡ检测血清中ＨＢｓＡｇ时，存在较高的非特异性。     

禽流感RT-PCR诊断法的建立

根据禽流感病毒（ＡＩＶ）Ａ／Ｃｈｉｃｋｅｎ／Ｂｒｅｓｌｉｎ／１９０２（Ｈ７Ｎ７）株的血凝素（ＨＡ）基因参考序列设计合成一对Ｈ７ＨＡ特异引物,并应用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ法提取病毒ＲＮＡ,建立了逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测ＡＩＶＲＮＡ的方法。应用此法对鸡胚培养的ＡＩＶ尿囊液、ＳＰＦ感染鸡粪便进行了检测,并与琼脂扩散试验和电镜技术作了对比。特异性试验以新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合征病毒（ＥＤＳ－７６Ｖ）等的感染鸡胚尿囊液作为对照。结果表明,ＡＩＶ尿囊液ＲＴ－ＰＣＲ全部阳性,ＳＰＦ感染鸡粪便８７份,ＲＴ－ＰＣＲ检出６９份阳性,样品处理浓缩后琼脂扩散检出１１份,电镜检测了２３份样品,仅检出２份阳性。非特异性对照样品经ＲＴ－ＰＣＲ检测全部阴性。将ＡＩＶ感染鸡胚尿囊液作１０倍系列连续稀释,可检出稀释度为１０－２的病毒尿囊液。ＲＴ－ＰＣＲ最早检出时间为感染后第３天,而琼扩和电镜均是７天。该法具有高度的特异性和灵敏性,且节约时间（只需８小时左右）,可从分子水平上对ＡＩＶ进行早期快速诊断和流行病学调查     

流感病毒血凝素基因在昆虫细胞中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了禽流感病毒Ａ／Ｇｏｏｓｅ／Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ／１／９６（Ｈ５Ｎ１）１．７ｋｂ的ＨＡ基因,将其克隆到ｐＵＣ１９的ＢａｍＨＩ位点,筛选到阳性重组子 ｐＵＣＨ５。然后将 ＨＡ基因亚克隆到杆状病毒转移载体 ｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓＢ,筛选到重组转移载体ｐＢａｃＨ５。经过序列分析证明阅读框架正确后,在脂质体转染试剂介导下,ｐＢａｃＨ５与线性化的杆状病毒 ＤＮＡ（Ｂａｃ－Ｎ－Ｂｌｕｅ ＤＮＡ）共转染Ｓｆ９昆虫细胞。重组杆状病毒经三轮蚀斑纯化,获得纯化的重组杆状病毒ｒＢａｃＨ５。提取重组杆状病毒ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增证明目的基因片段插入到杆状病毒基因组中。间接免疫荧光染色试验、血凝试验和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ试验结果表明 ＨＡ基因在重组杆状病毒感染的Ｓｆ９细胞表面获得表达。重组杆状病毒表达的ＨＡ蛋白能够凝集公鸡红细胞,血凝价１２８０－２５６０ＨＡＵ／ｍｌ。ＨＡ蛋白在杆状病毒表达系统的成功表达,为禽流感亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

应用生物素标记的NDV—cDNA探针检测感染尿囊液中DNV—RNA的初…

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术从构建的新城疫病毒（ＤＮＶ）ｃＤＮＡ文库中扩增含编码Ｆ糖蛋白前体－Ｆｏ酶切位点序列的３５９ｂｐ的Ｆ蛋白基因ｃＤＮＡ片段。将此３５９ｂｐ ｃＤＮＡ片段经光敏生物素标记后，即成ＤＮＶ－ｃＤＮＡ探针。该探针能特异性地从感染的尿囊液中检测出ＤＮＶ强毒株和疫苗毒株的基因组ＲＮＡ，而不与ＩＢＤＶ－ｄｓＲＮＡ，ＡＩＢＶ－ｓｓＲＮＡ，ＥＤＳ７６－ｄｓＤＮＡ、ＭＤＶ０ｄｓＤＮＡ、Ｆ     

棘球蚴囊液抗原A和B在酶联免疫吸附试验中的应用比较

用醋酸缓冲液和４０％饱和硫酸铵边续沉淀法从绵羊棘球囊液（ＳＨＣＦ）中得到部分纯化抗原（ＳＰＰＣＦ），并从中分离了抗原Ａ和抗原Ｂ，分别用单克隆抗体反向间接血凝试验（Ｍ－ＲＰＨＡ）、单克隆抗体双扩散试验（Ｍ－ＤＤ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）进行了鉴别，表明自制的三株单克隆抗体（ＭｃＡｂ）均识别ＳＨＣＦ、ＳＨＣＦ、ＳＰＰＣＦ及抗原Ｂ，而不识别抗原Ａ；用ＥＬＩＳＡ对阳、阴性血清检测，ＳＰＰＣＦ、抗原     

东北地区黄牛不同组织中HBsAg.HBeAg分布情况调查

用ＥＬＩＳＡ方法检测４３头东北黄牛血清，肝脏和肌肉中乙型肝炎的ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ结果表明，同一动物不同组织中两种抗原分布不同，ＨＢｓＡｇ阳性：肝脏２７．９％，肌肉９．３％，血清２．３％；ＨＢｅＡｇ阳性：肝脏１１．６％而肌肉和血清均为阴性。实验结果说明：在检测动物乙型肝炎时，应测试两种指标，在动物与人类乙型肝炎相关性研究中，动物肝脏应当引起人们的高度警觉。     

伊氏锥虫抗独特型抗体疫苗的研究

用纯化的伊氏锥 虫变异表面糖蛋白（ＶＳＧ）免疫大白鼠制备出抗血清，经饱和硫酸铵盐析，ＤＥ－５２纤维素离子交换层析和Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ新和层析提取ＶＳＧ特异性多克隆ＬｇＧ抗体。用Ａｂ１免疫大白鼠和家兔制备出抗独特型血清。ＥＬＩＳＡ抑制试验检测结果表明，８份大白鼠抗独特型血清的抑制率高于２５％。用正常大白鼠ＩｇＧ致敏的醛化绵羊红细胞吸收兔抗独特型血清除去异种抗体，采用Ａｂ１－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ     

猪源乙型肝炎病毒样病毒的提纯与鉴定

用检测人血清乙肝标志物的试剂和方法,检测2823份猪血清,检出HBsAg阳性血清56份。对37份HBsAg阳性猪血清检测抗—HBs、HBeAg、抗—HBe、抗—HBc,有23份呈阳性结果。取双阳性血清经氯化铯梯度离心,获得了形态与HBV相似的病毒粒子,其比重为1.30,分子量为2.2×10~5道尔顿。将其与抗HB_(?)做免疫电泳,可见有沉淀线形成。以常规方法提纯其基因片段,以HBV引物为以基因引物做PCR扩增,结果可见有基因片段形成。其位置与HBV扩增物相近,证实两株病毒有基因同源性。试验结果认定,此毒为猪源HBV样病毒。     

民族医药治疗慢性乙肝的研究进展

乙型肝炎病毒(HBV)是感染人类最常见的病毒性疾病之一,在慢性患者中每年发生肝硬化和肝细胞癌率分别占2%和1%.因此,乙型肝炎病毒严重威胁着人类的生命健康.我国各个民族对乙肝的治疗均有独特的方法,且效果明显,具有很大的开发潜力.笔者就近年来有关乙肝治疗的民族医药的研究及其应用情况作一概述.     

HBV转基因小鼠T细胞免疫状态

以正常非转基因 ICR小鼠为对照 ,用 3H-Td R掺入法和 ELISA分别测定了 HBV转基因 ICR小鼠脾淋巴细胞针对 HBe Ag的特异性增殖功能及其培养液上清中 Th1、Th2相关细胞因子 m IFN-γ、m IL-2、m IL-6、m IL-1 0含量。结果 ,HBV转基因小鼠脾淋巴细胞对 HBe Ag刺激引起的增殖反应、HBe Ag与 Con A共同刺激引起的增殖反应及其培养液上清中 4种细胞因子含量均明显低于对照组。以上结果表明 ,HBV转基因小鼠 Th1、Th2淋巴细胞所介导的特异性免疫功能均受到抑制     

近交系高表达HBV转基因小鼠的建立及表达传代稳定性

将纯化的高表达 1.3copy HBV全基因 ,通过原核显微注射方法 ,建立了近交系 ( Balb/ c)高表达 HBV转基因小鼠模型 ,以血清 HBs Ag为检测指标 ,对该转基因鼠 HBV基因持续表达水平和数代遗传稳定性进行了研究。结果 ,获高表达 HBV( 1.3copy)转基因 Balb/ c小鼠 Founder 2只 ,用回交传代方法 ,本 HBV转基因小鼠已稳定传至第 8代 ,每代转基因鼠阳性率平均保持在 4 4 .6 7% ,性别对 HBV转基因小鼠总体阳性率有影响 ,雄性小鼠的阳性率 ( 4 4.15 % )明显高于雌性小鼠 ( 4 2 .2 6 % ) ( P<0 .0 5 ) ;血清表达 HBs Ag水平较稳定 ,平均为 ( 85 3.2 8± 2 35 .4 3)μg/ L ,雌雄小鼠之间表达水平没有明显差异。     

不同杂交方式获得高效表达乙肝病毒基因转基因小鼠

转基因动物普遍存在转基因效率低、表达水平不高并且外源基因遗传不稳定等问题。根据传统育种原理，笔者在已经得到的转基因动物基础上，寻找比原代外源基因表达水平更高的后代，不仅可解决上述问题，而且可以节约成本，缩短获得高效表达转基因动物的时间。本研究是以繁殖周期短，易操作，较经济的小鼠作为试验模型，对已整合有人的乙肝病毒(Hepatitis B Virus，HBV)基因的小鼠进行近交和远交的方法进行选育，并对选育的后代进行外源基因的整合检测以及对小鼠血清中表达的外源基因进行定量检测，表明获得了高效表达的转基因小鼠，从而为以后的转基因动物研制提供了实践和科学依据。     

鸡源类人乙肝病毒与人乙肝病毒S基因序列分析

为揭示动物乙肝病毒与人乙肝病毒之间的相关性研究打下基础,以人乙肝病毒Ｓ基因两侧的保守区域作为模板,采用套式ＰＣＲ方法,成功地扩增出鸡源类人乙肝病毒部分基因（１．２ｋｂ）。序列分析结果表明,鸡源类人乙肝病毒与人乙肝病毒Ｓ基因似有一定的同源性,但在保守区域（Ｓ区）内存在较大的核苷酸序列差异。     

猪、鸡、鸭血清中乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg水平调查

应用ELISA对638份猪、鸡、鸭血清标本进行了HBV—HBsAg水平检测,结果平均阳性率为13.79%,表明猪、鸡、鸭体内含有与HHBV—HBsAg相似的类属抗原及相关抗体,提示在肉用畜禽体内检出HHBV—HBsAg是一个值得注意的问题.     

应用精原干细胞转染法建立HBV(adr型)转基因鼠

通过精原干细胞转染建立转基因动物的研究,国内外均有报道[1～4]。为了进一步研究这一转基因方法的有效性,特别是建立能有外源基因表达的转基因动物,本试验以上海生化所提供的乙肝病毒HBV(adr型)基因组为目的基因,把HBV全基因克隆到pBR322质粒中,与脂质体按一定比例混合,并加入     

免疫组化法检测大鼠肝脏组织中的乙型肝炎病毒和戊型肝炎病毒

为探讨SD大鼠乙型肝炎病毒(HBV)和戊型肝炎病毒(HEV)的感染情况,本试验采集了53例SD大鼠肝脏,采用免疫组织化学染色、HE染色和Mallory三染色法对上述肝脏样品中的HBsAg、HBcAg和HEV进行了检测,同时对其病理形态学变化进行了观察。结果如下:在53例肝脏样品中有47例呈HBsAg阳性反应,阳性率为88.68%;有38例呈HBcAg阳性反应,阳性率为71.70%;HBV的双阳性率为66.15%,总阳性率为96.23%;而HEV的阳性率为100%。镜下HBsAg阳性反应物在肝细胞胞核、胞浆和胞膜上均有分布,而HBcAg阳性反应物主要分布于肝细胞胞核和胞浆内;HEV阳性反应物分布在肝细胞胞核、胞浆和小叶间胆管上皮中。组织病理学观察结果显示,在上述免疫组化阳性反应肝脏样品的HE染色切片中,均有不同程度的病理变化,主要表现为肝细胞固缩、变性、坏死、中央静脉淤血、淋巴细胞浸润、小叶间胆管增生。Mallory三色染色结果证明有22%的肝脏样品有纤维结缔组织增生。     

乙肝疫苗研究进展

乙肝病毒(HBV)可通过多种途径感染人体,引起肝病的传播,对乙型肝炎预防和治疗的研究具有重大的经济效益和社会效益。目前使用的乙肝疫苗存在诸多问题,作者就乙肝疫苗存在的问题及解决方法进行综述。