猪囊等孢球虫孢子化与未孢子化卵囊的差异表达蛋白质组学分析

通过比较猪囊等孢球虫孢子化卵囊与未孢子化卵囊的差异表达蛋白质,以期从蛋白质组学角度研究其发育机制,并为此类球虫的发育机制及该病的免疫预防或化学防治找到新的“关键”分子奠定基础。首先建立哺乳仔猪的猪囊等孢球虫感染模型,然后运用iTRAQ技术,结合LC-MS/MS分析差异表达蛋白质,并采用荧光定量PCR验证iTRAQ数据。结果共鉴定出174个蛋白,差异表达蛋白40个,其中38个蛋白上调表达,2个蛋白下调表达,差异蛋白主要涉及代谢、抗生素的生物合成、次生代谢产物的生物合成和糖酵解/糖异生过程等通路。研究结果为阐明猪囊等孢球虫孢子化发育机制以及发现新的生物标志物提供参考。     

温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响

为探讨温度对球虫消杀剂抑制鸡球虫卵囊孢子化的影响,试验以7%氨水作为对照组,设置1:50、1:100、1:150的球虫消杀剂溶液组,同时设置生理盐水对照组.各处理液分别在4℃和20℃下与柔嫩艾美耳球虫未孢子化卵囊在体外相互作用6、12和24h,然后用2.5%重铬酸钾溶液培养处理后的球虫卵囊,观察其孢子化率.结果表明:1:50、1:100、1:150球虫消杀剂在4℃分别处理6、12和24h的卵囊孢子化率均极显著(P<0.01)高于20℃下的对应处理组.球虫消杀剂在20℃下有更好的抑制球虫卵囊孢子化的作用.     

影响鸡球虫未孢子化卵囊及孢子化卵囊活性因素的探讨

影响鸡球虫未孢子化卵囊及孢子化卵囊活性因素的探讨李玉兰①张龙现②宁长申②陈洪科①杨建功鉴于鸡球虫卵囊的孢子化过程在外界完成,那么外界条件如温度、湿度、光照等不可避免地影响卵囊的成熟过程,但是有关这方面的研究在国内尚缺乏系统性,因此作者进行了下列试验,...     

球虫消毒剂的筛选及氨水对艾美耳球虫卵囊抑杀条件的优化

为了筛选有效的球虫消毒剂,本研究将柔嫩艾美耳球虫卵囊分别与16种常用消毒剂和1种高效抗球虫药物溶液（250 mg/L妥曲珠利溶液）混合作用2 h然后在2.5%重铬酸钾溶液中孢子化培养,或混合作用4 h后接种14日龄雏鸡,根据卵囊孢子化率、孢子化抑制率、每克粪便卵囊数量（oocysts per gram of feces,OPG）、病变计分和血便情况评价消毒剂和抗球虫药物抑杀球虫卵囊效果。结果显示,8%氨水对未孢子化卵囊和孢子化卵囊均表现为100%的抑杀效果;250 mg/L妥曲珠利、3%甲醛、4%苯酚、0.5%过氧乙酸、5% NaOH+10% NaCl和5% NaOH对球虫卵囊活性具有一定的抑制作用,孢子化抑制率超过10%,但是对孢子化卵囊抑杀作用不明显;而剩余10种常用消毒剂对球虫卵囊没有明显的抑杀作用。氨水抑杀球虫卵囊条件优化的试验结果显示,1%~8%氨水与未孢子化卵囊作用1 h以上,均可100%抑杀球虫卵囊活性。粪便干扰试验结果显示,粪便不影响2%和4%氨水对球虫卵囊的抑杀效果。本研究结果说明常用消毒剂和抗球虫药物不能有效杀灭球虫卵囊的活性,而氨水是一种高效球虫消毒剂。本研究结果可为开发新型高效球虫消毒剂和球虫病控制提供参考。     

鸦胆子对鸡球虫卵囊孢子化率及子孢子的直接杀伤作用

自苦木科植物鸦胆子中提取了鸦胆子油(BJ-PE)、鸦胆子乙醇萃取物(BJ-EE)和鸦胆子水提物(BJ-WE),通过气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)检测了鸦胆子油的化学成分,并探讨了鸦胆子提取物对鸡球虫卵囊孢子化的影响及对子孢子的直接杀伤作用。结果显示,通过GC-MS法鉴定出鸦胆子油中含有32种化合物,主要为脂肪酸、脂肪醇类化合物及少量芳香族化合物。鸡球虫卵囊经BJ-EE、BJ-WE和Bruceine-D处理后,未孢子化率升高,其中8g/L BJ-WE处理组中未孢子化卵囊的数量显著高于对照组(P0.05)。子孢子经BJ-EE和Bruceine-D处理后,数量显著减少,形态发生明显变化,表现出变短、变圆的趋势。透射电镜观察发现,子孢子或萎缩成小球,外膜轮廓模糊,淀粉粒减少;或细胞膜破裂,胞内细胞器排列混乱;或呈现哑铃型,结构扭曲。综上所述,鸦胆子提取物对鸡球虫卵囊的孢子化具有一定的抑制作用,对子孢子具有较强的直接杀伤作用,为抗球虫药物的研发提供了新选择。     

8301多糖配合脆弱艾美耳球虫活卵囊预防鸡球虫病的研究

以适量８３０１多糖配合脆弱艾美耳（Ｅ．Ｔｅｎｅｌｌｏ）球虫活卵囊免疫雏鸡,对大剂量强毒攻击有完全的保护作用,多项指标（存活率,病变记发,平均增重,饲料报酬,卵囊排出量）优于１２５ｍｇ／ｋｇ克球粉,与对照组比较,有统计学意义。现场推广应用于３０００只雏鸡,免疫效果甚佳,免疫保护率为９０％。     

鸡胚接种柔嫩艾美耳球虫和堆形艾美耳球虫活卵囊的免疫保护试验

给18日龄鸡胚接种一定剂量的柔嫩艾美耳球虫(Eim eria tenella)和/或堆形艾美耳球虫(E.acervulina)孢子化卵囊,出雏后在无球虫环境中笼养,1~10日龄每天收集各组粪便样本,计数克粪便卵囊数(OPG),并于14日龄时以大剂量同源孢子化卵囊攻虫,以相对增重率(RWG)、饲料转化率(FCR)、相对卵囊产量(ROP)评价免疫保护效果。结果显示,以E.tenella或E.acervulina卵囊免疫18日龄鸡胚,其卵囊排出的潜隐期及达到峰值的时间与1日龄雏鸡接种组相一致,有相似的排卵囊曲线,提示其诱导免疫的建立是在出雏后开始建立的。攻虫后各免疫组的RWG由攻虫对照组的31.9%~51.7%提高到了76.5%~83.6%,RCR由攻虫对照组的4.11~4.89改善为2.72~2.96,ROP降至4.7%~23.5%。结果表明以一定剂量E.tenella和E.acervulina卵囊单独或混合经羊膜腔免疫18日龄鸡胚都可以建立起针对出雏后14日龄同源攻虫的良好免疫保护力。比较混合免疫E.tenella和E.acervulina卵囊组与单一接种E.tenella或E.acervulina卵囊组的免疫效果发现,混合免疫组的各项指标均稍优于后者。     

基于Gateway技术的E.stiedai孢子化卵囊cDNA表达文库构建

为深入研究斯氏艾美耳球虫(E.stiedai)的分子生物学特征,揭示其与宿主细胞的互作及免疫机理,以E.stiedai阿拉尔分离株的新鲜孢子化卵囊为材料,采用Gateway技术分别构建了E.stiedai孢子化卵囊cDNA原核和慢病毒表达文库,并测定了文库质量。分析表明,表达文库平均插入片段大小为1.5kb,重组率为100%,慢病毒表达文库和原核表达文库容量分别为3.5×106,3.9×106 CFU/mL,符合高质量文库的标准,可用于进一步开展相关基因的克隆及功能研究,为研究E.stiedai的入侵及免疫机制奠定基础。     

毒害艾美耳球虫卵囊先孢子化后贮存和先贮存后孢子化对其致病力的影响

新鲜收集的毒害艾美耳(Eimeria necatrix)球虫卵囊，一部分未孢子化即贮存在4℃冰箱，另一部分在28℃恒温水浴根荡孢子化48小时后再贮存在4DC冰箱。2个月后将先贮存的未孢子化卵囊在上述同等条件下进行孢子化48小时，然后两部分卵囊作致病力比较试验。结果表明，先贮存后孢子化卵囊的孢子化率和致病力都明显下降，先孢子化再贮存的卵囊存放2个月后其致病力各项指标也略有下降。     

不同培养方式对鸡球虫卵囊孢子化率的影响

兑水离心洗净早熟艾美耳球虫(Eimeria praecox)保存虫株,经口感染雏鸡增殖卵囊,收集、分离刚排出粪便中的卵囊,以不同培养液、培养液深度、卵囊密度和3种状态的4种方式(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)进行卵囊培养试验。其结果方式Ⅰ:卵囊平均孢子化率以2.5%重铬酸钾组(91.98%)为最高,以鸡粪汁组(5.18%)为最低并与其他2组存在极显著差异(P<0.01);方式Ⅱ:最浅组至最深组卵囊平均孢子化率依次降低,分别为90.15%、89.25%和86.70%,组间差异不显著(P>0.05);方式Ⅲ:卵囊平均孢子化率以密度最小组(90.68%)为最高,以密度最大组(47.28%)为最低,密度最小组与其他2组存在极显著差异(P<0.01);方式Ⅳ:吹吸、静置、隔氧状态下,卵囊平均孢子化率依次降低,分别为90.65%、88.89%、86.94%,组间差异不显著(P>0.05);以2.5%重铬酸钾液、1×106/3 mL的卵囊密度、0.5 mm的液深且经常吹吸培养卵囊,卵囊孢子化效果最好。     

使用球虫消杀剂预防鸡球虫病的效果试验

本试验旨在得到球虫消杀剂在临床使用时的合适浓度.选择球虫发病较严重的鸡舍进行试验,分别用1∶ 25、1∶ 50和1∶ 100的球虫消杀剂消毒,密闭作用24 h,以不用球虫消杀剂处理的鸡舍作为对照,每种处理设两个重复.结果表明:1∶ 25和1∶ 50处理组料肉比与对照组相比差异显著(P＜0.05),1∶ 100处理组与对照组相比差异不显著(P≥0.05);球虫消杀剂各浓度处理组死亡率均小于对照组;1∶ 25和1∶ 50处理组在出栏时垫料中检出少量卵囊,但远低于对照组.各浓度球虫消杀剂处理组病变记分均小于平均值,而对照组处于平均值和高于平均值.结果提示,1∶ 50球虫消杀剂对球虫卵囊有着良好的杀灭作用.     

球虫消杀剂预防鸡球虫病的使用效果试验

本试验旨在得到球虫消杀剂在临床使用时的合适浓度。选择球虫发病较严重的鸡舍进行试验,分别用1∶25、1∶50和1∶100的球虫消杀剂消毒,密闭作用24 h,以不用球虫消杀剂处理的鸡舍作为对照,每种处理设两个重复。结果表明：1∶25和1∶50处理组料肉比与对照组相比差异显著（P〈0.05）,1∶100处理组与对照组相比差异不显著（P≥0.05）;球虫消杀剂各浓度处理组死亡率均小于对照组;1∶25和1∶50处理组在出栏时垫料中检出少量卵囊,但远低于对照组。各浓度球虫消杀剂处理组病变记分均小于平均值,而对照组处于平均值和高于平均值。结果提示,1∶50球虫消杀剂对球虫卵囊有着良好的杀灭作用。     

控制鸡食入孢子化卵囊,可有效预防球虫病

在养鸡行业,鸡球虫病是危害性较大的一种疾病,其造成的经济损失难以估计。到目前为止,虽然人们不断研制出对防治球虫有较好效果的药物,近几年,又出现了球虫弱毒疫苗,但是离彻底控制或较好地控制球虫病发生的目标仍相距甚远。那些建场时间长、采用地面饲养的鸡场,球虫病防治依然令人头痛。     

巨型艾美耳球虫感染鸡免疫反应与卵囊排出量的关系

鸡球虫病，由几种艾美耳球虫引起，是一种经济上非常重要的家禽寄生虫病，每年可导致全球养鸡业约两亿美元的损失。兔疫预防是防止球虫感染的一种手段，它依赖于对自然感染期间保护性免疫力发展机制。巨型艾美耳球虫是鸡体内致病性球虫中免疫原性最强的球虫之一，该种球虫无性生殖阶段的抗原比有性阶段抗原具有更强的免疫原性。虽然含种特异性兔疫诱导物的巨型艾美耳球虫抗原已得到鉴定，但球虫种内仍存在抗原差异，因此由巨型艾美耳球虫一个株诱发产生的免疫力对于同种球虫另一不同株系的攻击不能提供完全的保护。抗球虫免疫包括体液兔疫和…     

环境因素对球虫卯囊孢子化的影响

探讨环境因素对球虫卵囊孢子化的影响,为切断鸡球虫病的感染途径提供依据。本实验将未孢子化球虫卵囊分别置于高温干燥、高温潮湿、室温三个不同环境中处理后,再按常规方法培养,并测其孢子化率。结果表明:80℃高温干燥环境中放置15 min以上,80℃高温潮湿环境中放置30 min以上,室温环境中放置1 d以上,卵囊均已完全丧失孢子化能力。     

三种艾美耳球虫感染鸡卵囊排泄期的观察

三种艾美耳球虫感染鸡卵囊排泄期的观察黄兵，赵其平，何林华，吴薛忠，陈兆国，史天卫（中国农科院上海家畜寄生虫病研究所）鸡球虫是危害养鸡业发展的重要寄生虫，几乎所有养鸡的地方都有球虫，共有９个种，不同虫种对鸡的致病性、免疫性以及感染后的＿卵囊最早排出时间...