呋喃西林代谢物酶联免疫检测方法的建立

[目的]建立动物性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测方法。[方法]通过制备特异性强的单克隆抗体,采用间接竞争ELISA法建立动物性食品中呋喃西林代谢物ELISA检测方法,并研制出对动物性食品中呋喃西林代谢物残留检测的试剂盒。[结果]该试剂盒标准曲线的IC50值为0.267 7μg/L,最低检测限为0.1μg/kg,样本加标回收率范围为79.5%～95.6%,变异系数为7.6%～9.7%。在交叉反应试验中,对呋喃西林的交叉反应率为25%,与其他药物的交叉反应率均小于1%,表明该方法具有很强的特异性。[结论]该方法灵敏度、准确度、精密度均较高,能满足兽药残留的检测要求,且检测时间短(45 min),样本前处理简单、检测成本低,适合于大量样本中呋喃西林代谢物残留检测的快速筛选。     

猪繁殖与呼吸道综合征病毒荧光定量PCR检测方法的研究

通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF7为标准品,进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了PRRSV的荧光定量RT-PCR检测方法。结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μl;利用该方法对3份不同的组织样品进行重复性检测,计算出平均循环阈值的标准差分别为0.14、0.14和0.44,变异系数分别为0.01%、0.01%和0.02%,说明该方法具有良好的重复性和重现性。对阳性组织病料的检测表明,该方法与常规RT-PCR的阳性符合率为100%,但其检测灵敏度较常规RT-PCR约高100倍。     

新鲜蔬菜中11种有机磷农药残留检测

气相色谱仪(FPD)检测新鲜蔬菜中11种有机磷农药残留,样品采用乙腈作萃取剂,无水硫酸钠作脱水剂,丙酮定容.检测结果表明该方法分离度好,灵敏度高.方法最小检出浓度为0.005～0.01 mg/kg,回收率为80.7%～111%,相对标准偏差为0.3%～9.7%.完全符合农药残留检测技术要求.该方法易于操作,值得推广应用.     

羊肉中貉源成分Real-time PCR检测方法的建立

[目的]检测羊肉中是否含有貉肉成分。[方法]通过实时荧光定量PCR方法,以cytB为靶基因设计特异性检测引物,选取8个不同物种的肌肉组织样本为研究对象,根据其ΔCt值函数关系进行线性拟合建立标准曲线。[结果]该检测方法所用引物能将貉与其他物种区分,特异性较强,且最低检测限可达到3.2 pg/μL,回收率在97.71%～104.36%,组内变异系数≤0.28%,组间变异系数≤1.08%。[结论]该研究建立的羊肉中貉肉源成分实时荧光定量检测方法具有良好的特异性和敏感性,可用该方法检测实际羊肉样品中是否有貉肉源成分,为羊肉制品掺假的检测提供简单快捷准确的技术手段和执法依据。     

气相色谱法测定有机磷农药残留方法研究

主要讨论了运用气相色谱法测定9种有机磷农药在黄瓜中的残留检测,气相色谱仪为Sh i-m adzu GC-2010型(FPD检测器,采用程序升温),建立了蔬菜中9种有机磷农药同时测定的气相色谱方法。该方法的添加回收率为71.2%~109.3%,变异系数<20%,检测结果证明该检测方法满足农药多残留的检测要求。该方法简单、准确、可靠,适用于蔬菜、水果等样品的测定。     

血清4型禽腺病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立快速检测血清4型禽腺病毒病(Fowl aviadenovirus serotype 4,FAdV-4)的基于TaqMan探针的Quantitative real-time PCR(qPCR)检测方法，本研究根据Hexon基因序列，设计相关的qPCR特异性引物和探针，经特异性、敏感性和重复性试验以及反应程序等系列优化后，最终建立荧光定量检测方法并应用于临床样品的病原检测。FAdV-4的qPCR结果表明，优化后标准曲线决定系数(R²)为0.998,扩增效率(E)为95.226%,该方法效果良好。利用该方法，除FAdV-4外其他禽类常见病原均未检测到，该方法具有良好的特异性。该qPCR方法检出阳性的最低拷贝数为100个拷贝，而普通PCR方法检出阳性的最低拷贝数为10 000个拷贝，说明其具有良好的灵敏度。组内和组间变异系数均≤0.22%,该方法的重复性较高。对180份从江苏、安徽、江西和广西等省份采集的临床疑似样品进行检测，结果显示，qPCR方法检出率为51.1%,而普通PCR方法检出率为32.8%;同时基于qPCR引物的检出符合率为100.00%,而基于普通PC...     

猪流行性腹泻病毒TaqMan荧光定量PCR方法的建立与应用

为定量检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV),建立了检测PEDV的TaqMan荧光定量PCR方法。根据PEDV基因组中保守的N基因序列设计引物和探针,以梯度稀释的含有N基因的重组质粒作为标准品,进行定量PCR反应。结果表明,该试验建立的荧光定量PCR方法在1μl 101~109拷贝之间具有良好的线性关系,相关系数达到0.99以上,扩增效率在90%与100%之间。该方法的检测灵敏度为10拷贝,与常规RT-PCR方法相比,该方法敏感性更高,而且该检测方法特异性较好,与猪的其他病毒核酸均无交叉反应,批内和批间的变异系数均低于3%,表明该方法的重复性较好。对华东地区采集的130份临床样品进行检测,结果显示,PEDV的阳性率为63.1%。     

饲料中T-2毒素直接竞争ELISA检测方法的建立

采用直接竞争ELISA方法建立了一种快速检测饲料样本中T-2毒素残留的方法,在0～81μg/L范围内,T-2毒素的Logit(B/B0)与T-2毒素质量浓度的对数呈显著的线性关系,并对该检测体系的检测限、准确度、精密度等性能进行了测定。结果显示,该方法的IC50(半数抑制质量浓度)为2.8μg/L,对饲料样本的检测限为10μg/kg,样本添加回收率为77.6%～98.2%,变异系数为5.1%～12.0%。该方法操作简便、准确,检测时间短(仅需15min),适用于饲料样本中T-2毒素的快速检测。     

毛细管气相色谱法测定蔬菜中16种有机磷农药残留量

建立了毛细管气相色谱法快速检测蔬菜中有机磷农药残留的分析方法。该方法以乙腈为提取剂,经C18和PSA串联柱净化后的提取液,用毛细管气相色谱法进行检测分析。该方法检出限(S/N=3)为0.003～0.006mg/kg,在加标水平为0.01mg/kg时,方法回收率为53.7%～115%,相对标准偏差(RSD)为3.2%～10.5%;在加标水平为0.02mg/kg时,方法回收率为52.5%～112%,相对标准偏差(RSD)为3.1%～10%。     

鹅星状病毒SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法的建立

为建立快速检测鹅星状病毒(GAstV)的方法,本研究根据GenBank中GAstV ORF2基因序列设计1对特异性引物,构建重组质粒pMD19-T-GAstV,以其作为标准品建立了GAstV的SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法。优化其反应条件及体系,进行特异性、敏感性和重复性试验以及临床样本检测。试验结果显示,除GAstV外,禽白血病病毒(ALV)、血清4型禽腺病毒(FAdV-4)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)等常见禽病病原利用该方法检测均呈阴性,表明其特异性良好;建立的荧光定量RT-PCR检出的最低模板含量为1μl 3.75×10~1拷贝,敏感性较高;组内和组间重复性试验变异系数均小于1%。利用该方法对来自安徽地区的32份临床样品进行检测,阳性检出率为43.75%,常规PCR方法阳性检出率为18.75%,阳性检出符合率100%,表明该方法可用于临床样品检测。该方法的建立为临床样品中GAstV的快速高效检测提供了技术支持。     

ICP-MS法同时测定钢渣中10种矿质元素

建立了钢渣中多种矿质元素的检测方法。钢渣样品经HNO3-HF-HClO4消化,采用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法检测钢渣中10种矿质元素。该方法的检出限为0.002～6.68μg.g-1,加标回收率为78.8%～105.7%,相对标准偏差(RSD)为0.68%～8.29%。该方法具有简便、快速、准确等特点,可用于钢渣中矿质元素的分析。     

气相色谱氮磷检测器法用于大米和面粉中22种有机磷和有机氮农药多残留检测

选择气相色谱氮磷检测器法检测大米、面粉中22种有机磷和有机氮农药多残留。大米、面粉样品用丙酮/二氯甲烷(1∶1,V/V)提取,二氯甲烷萃取,丙酮定容,GC-NPD检测。结果表明,该方法分离度较好,灵敏度高,方法的最小检出量在5.180×10-12～8.541×10-11g之间。当添加浓度在0.02～2.00mg·kg-1范围时,大米平均添加回收率为71.71%～109.16%,变异系数为1.16%～12.89%;面粉平均添加回收率为73.87%～113.48%,变异系数为1.75%～15.17%。该方法完全符合农药残留量检测的技术要求,是一种快速有效的分析检测方法,适合在实践中推广使用。     

石墨炉原子吸收法测定白酒中的铅

通过蒸发浓缩,建立了一种测定白酒中重金属铅的快速检测方法,该方法前处理简单,试剂消耗少,检出限低,准确度高,适合大批量白酒的检测。该方法的检出限为0.0002mg/L,加标回收率为98.9%~101.6%,RSD为2.76%~3.65%。     

高效液相色谱法检测牛奶中氯霉素残留

建立了高效液相色谱检测牛奶中氯霉素残留的方法。用乙腈提取氯霉素,提取液浓缩后用甲醇溶液溶解,在波长278 nm处用高效液相色谱仪测定氯霉素。该方法氯霉素浓度为1~30 mg/L时,样品平均回收率为85.33%~97.20%,相对标准偏差(RSD)为5.18%~10.63%。该方法适于牛奶中氯霉素残留的检测。     

瑟氏泰勒虫血液直接PCR检测方法的应用

为建立快速、灵敏、特异、低成本的瑟氏泰勒虫检测方法,根据GenBank上发表的瑟氏泰勒虫p33基因序列设计合成1对引物,通过PCR退火温度的筛选、特异性试验、敏感性试验和重复性试验,建立瑟氏泰勒虫血液直接PCR检测方法。该方法能扩增瑟氏泰勒虫p33基因的1段416 bp序列,而与弓形虫、新孢子虫、牛附红细胞体基因序列均无交叉反应。该方法检测出的1μL血液最大稀释倍数为40。应用血液直接PCR方法和常规PCR对吉林省8个地区某牛场采取的210份样本进行检测的结果表明:直接PCR阳性率为30.0%,而常规PCR阳性率为25.7%,差异不显著(P0.05);两者的总符合率为94%,阳性符合率为80%,阴性符合率为92%;2种方法之间的Kappa值为0.85,说明该法更具有推广和应用价值。该试验成功应用了血液直接PCR检测方法,为瑟氏泰勒虫病的快速诊断和流行病学调查提供了一种新的方法。     

毛细管气相色谱法测定柑桔及土壤中的哒螨酮残留量

采用GC测定方法,对哒螨酮在柑桔和土壤中残留量的检测方法进行了研究.该方法中样品经丙酮提取,氧化铝柱净化,采用ECD检测;研究结果表明:方法对标样的最小检出量为1.0×10-12g,对桔皮、桔肉和土壤的最低检出浓度为0.01、0.005、0.002 mg/kg;样品中哒螨酮的平均添加回收率为84.41 %～93.08 %,变异系数为1.6 %～11.69 %.该方法的建立为确定达螨酮在柑桔上的残留检测方法提供了科学的依据.     

RP-HPLC法测定甘草浸膏中甘草次酸含量

方法采用反相高效液相色谱法,以甲醇80%和水20%(用磷酸调PH为3.7)为流动相,以C8为分析柱,紫外检测波长为250nm,柱温室温,结果线性范围:0.01mg/m l~0.13mg/m l,线性方程A=50.535 31130.2C,相关系数0.99989;回收率101.85%,相对标准偏差1.47%。该方法目的在于测定甘草浸膏的甘草次酸含量,以期为检测评价甘草浸膏质量提供了指标,该方法方法简单、准确性高。     

猪瘟病毒实时定量PCR检测方法的建立及初步应用

为建立一种快速检测猪瘟病毒的基因检测方法,根据GenBank中猪瘟病毒(CSFV)基因组NS2基因序列设计并合成引物和Taq Man探针,通过各项条件优化并以10倍稀释度的质粒为标准品进行实时定量PCR扩增制作标准曲线,建立检测CSFV的实时定量PCR方法。该方法的检测灵敏度可达每微升10个拷贝,比常规PCR方法的灵敏度高出1个数量级;对标准品质粒检测的线性范围是1.0×109～1.0×101μL-1。对1.0×107、1.0×105、1.0×103μL-13种稀释度的标准品质粒进行重复试验,批内变异系数分别是0.30%、0.85%、0.43%,批间变异系数分别是0.81%、1.36%、0.63%,具有良好的重复性。应用该方法对45份临床样品进行检测,检出26份阳性样品,而常规PCR只检测出19份阳性样品,说明该实时定量PCR方法的敏感性高于常规PCR。可见,该方法具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,可用于检测病料中的猪瘟病毒。     

高效液相色谱法检测水产品中的孔雀石绿

采用高效液相色谱法检测水产品中的农药残留孔雀石绿。样品中的孔雀石绿经乙腈与乙酸铵提取,浓缩后固相萃取柱净化、硼氢化钾还原、反向色谱柱分离,再使用荧光检测器检测。应用该方法孔雀石绿的加标回收率在75.1%～95.1%之间,相对标准偏差3.7%～7.1%,检出限均为0.5μg/kg。结果表明:该方法检测孔雀石绿处理简单快捷,灵敏度高,可用于大量样品的快速分析。     

稻米中9种有机磷杀虫剂多残留测定方法研究

介绍了稻谷及糙米中9种有机磷杀虫剂残留量的快速测定方法.以乙腈提取样品中的农药,浓缩并用丙酮定容,GC-FPD检测结果表明,该方法分离度好,灵敏度满足检测要求,方法的最小检出浓度为0.012-0.023ug/mL,当添加浓度为0.1-1mg/kg范围时,稻谷中的添加回收率为71.9%-109.9%,相对标准偏差为3.68%-13.73%;糙米中的添加回收率为74.5%-105.2%,相对标准偏差为2.49%-14.53%.该方法简便快速,灵敏准确,符合农药残留检测的技术要求.