Cloning and characterization of conservative region sequences of Sox genes in Paramisgurnus dabryanus

为探讨大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)的性别决定与分化机制,采用Sox基因HMG盒保守区的2对简并引物,SoxN与Sox9,用以扩增大鳞副泥鳅的基因组DNA,并对其性腺组织进行RT-PCR分析.SoxN引物扩增基因组DNA共获得pdSox1、pdSox2、pdSox3、pdSox4、pd Sox11、pdSox14、pdSox19、dSox21等13个Sox基因,分属SoxB与SoxC类群;Sox9引物扩增基因组DNA共获得彬Sx8、pdSox9等5个S凹基因,属于SoxE类群,这5个Sox基因均含有一个内含子,且内含子的起始位置一致.基于Sox基因HMG盒蛋白质的遗传距离构建的NJ系统进化树表明,大鳞副泥鳅18个Sax基因在小鼠或斑马鱼中均能找到相应的Sax直系同源基因,其中,pdSox4、dSox8,pdSox9、pdSoxll、pd Sox14、pdSox19等6个基因存在基因加倍现象,具有2个或2个以上的拷贝.用Sox9引物对大鳞副泥鳅的性腺进行RT-PCR扩增和测序分析,结果表明,在精巢中表达的是pdSoxga,在卵巢中表达的是pdSoxSa.以上结果表明,pdSox8与pdSox9是大鳞副泥鳅的性别相关基因,它们可能在大鳞副泥鳅的性别分化中发挥作用.     

泥鳅与大鳞副泥鳅群体RAPD分析

用从１００种随机引物中筛选出的４种引物对自然群体中的泥鳅,大鳞副泥鳅进行了ＲＡＰＤ分析,结果表明：４种引物（Ｓ２９,Ｓ９６,Ｓ９７,Ｓ９９）分析得到泥鳅种教员人遗传的纯度分别为０．５４４９,０．４９４６,０５９２６,０．６４２０,大鳞副泥鳅遗传纯度分别为０．４４９,０．４３０４,０．５１５９,０．５２４;两者间遗传距离依闪为０．５３８５,０．５７１４,０．５０２４,０．５２６６;泥鳅特征带１．０ｋ     

泥鳅与大鳞副泥鳅的人工催产试验

用催产剂ＨＣＧ,ＨＣＧ＋ＤＯＭ,ＬＲＨ－Ａ＋ＲＥＳ分别对泥鳅和大鳞副泥鳅进行催产试验。结果表明：ＨＣＧ＋ＤＯＭ比单用ＨＣＧ效应时间和产卵持续时间短,催产率和产卵量高,ＨＣＧ＋ＤＯＭ与ＬＲＨ－Ａ＋ＲＥＳ的催产效果相似。使用上述几组催产剂时,泥鳅比副泥鳅的效应时间均短４￣５ｈ。     

基于判别分析的泥鳅和大鳞副泥鳅识别

[目的]为科学识别形态特征相似的泥鳅和大鳞副泥鳅。[方法]在对泥鳅和大鳞副泥鳅形态特征研究的基础上,经逐步判别分析,筛选颌须/头长、皮褶长/体长、体高/体长3项形态指标建立识别泥鳅和大鳞副泥鳅的判别函数。[结果]结果表明:该函数的判别正确率达94%。[结论]在实际工作中,只需测量颌须、皮褶长、体高、体长4项形态指标,利用判别函数就能快速、简便地确定类别的归属;利用形态指标建立鱼体的判别函数实现对鱼类别的科学、快速判别是可行的,对于指导生产实践以及科学研究都具有重要价值。     

大鳞副泥鳅池塘暂养技术

本文论述了大鳞副泥鳅池塘暂养技术.     

锯缘青蟹Sox基因的PCR扩增

SRY基因(sex-determining region of the Y chromosome)是人类及哺乳动物睾丸决定因子TDF(testisdetermining factor)的最佳候选基因。SRY蛋白含有204个氨基酸,其中1个约79个氨基酸区域即HMG盒(high mobility group box)是SRY基因编码蛋白质的唯一功能区。由于SRY的发现,人们进而发现了1个庞大的与性别决定有关的SRY盒-Sox(SRY-related HMG box gene)基因家族。锯缘青蟹是我国重要的海洋经济蟹类之一,其性染色体和性别决定机制仍处于进化的早期阶段,在分子水平上探讨其性别决定机制尚不多见。通过采用PCR技术,以特异扩增人SRY基因HMG盒保守区的1对兼并引物,扩增了锯缘青蟹基因组的Sox基因。结果表明锯缘青蟹雌雄个体与人一样,均能扩增出1条大小约为216bp左右的基因片段,显示出该基因在进化上的高度保守性,为探索锯缘青蟹的性别决定机制及Sox基因的进化提供了分子资料。     

泥鳅和大鳞副泥鳅个体发育早期同工酶谱的变化

泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)和大鳞副泥鳅(Paramisgumus dabryanus)同属鲤形目鳅科花鳅亚科,是中国常见的经济鱼类,它们养殖简单,一年四季均可进行人工催产繁殖,是进行鱼类发育生物学研究的好材料.     

大鳞副泥鳅的繁殖力测定及人工繁殖

对70尾大鳞副泥鳅进行了体长、体重测定,并解剖观察,测量其性腺重,计算成熟系数和怀卵量。测定体长范围9.7～20.7cm,体重9～68g,成熟系数为2.56%～25.12%,怀卵量2 115～41 127粒,;绝对怀卵量最大个体体长为20.7cm,体重为68 g;4月22～27日,人工催产大鳞副泥鳅90组,雌雄比为2∶1,注射激素为HCG 300～500IU+DOM 0.1mg/尾,LRH—A2 2～3μg/尾+DOM 0.5～1mg/尾;水温17～17.5℃时,效应时间为19～23h;水温在17.5～19℃时,约50～54h孵化出苗。     

大鳞副泥鳅生长激素基因cDNA克隆及其真核表达载体的构建

从脑垂体中提取总RNA,用RT-PCR方法克隆大鳞副泥鳅生长激素基因(pGH)cDNA。结果表明,克隆到的pGH的开放阅读框包括633 bp,编码210个氨基酸,其中包括22个氨基酸的信号肽和188个氨基酸的成熟肽,GenBank注册号为DQ350432。把pGH成熟肽的cDNA插入真核表达载体pPIC3.5K,PCR技术、酶切和测序证明重组子中确实定向插入了pGH成熟肽片段;将重组的pPIC3.5K-pGH用SalⅠ酶切后,转化巴斯德毕赤酵母GS115,PCR技术筛选证明pGH已经整合到酵母染色体上。从而成功克隆大鳞副泥鳅生长激素基因cDNA,并构建了胞内真核表达载体pPIC3.5K-pGH。     

温度对大鳞副泥鳅和真泥鳅胚胎发育的影响

该文研究了不同温度条件对大鳞副泥鳅和真泥鳅胚胎发育的影响.实验表明,大鳞副泥鳅的胚胎在18～30℃都能孵化发育,在32℃时致死率达93％,适宜发育温度为24～26℃;真泥鳅的胚胎可耐受水温为1 8～30℃,在32℃时致死率达72％.适宜发育温度为26～28℃.     

中国4大湖泊大鳞副泥鳅群体遗传多样性分析

为保护大鳞副泥鳅种质资源,制定合理的野生资源保护策略,并为大鳞副泥鳅良种选育确定合适的育种基础群体,通过第二代测序技术自主开发并合成微卫星引物400对,经验证后随机采用其中的17个多态性微卫星标记对太湖、洪泽湖、洞庭湖和巢湖等4大湖泊的野生大鳞副泥鳅群体进行遗传多样性分析。检测到各基因座的平均观测等位基因和有效等位基因数分别为9.5和5.5个。平均期望杂合度为0.566 5,平均Fst值为0.219 4(0.2),Nm为0.889 4(1),表明4个大鳞副泥鳅群体间遗传交流较少,存在着较高程度的遗传分化。4个大鳞副泥鳅群体的等位基因数为5.4~6.2(平均5.8),观测杂合度0.273 2~0.386 4,期望杂合度0.562 9~0.589 3,多态信息含量(PIC)为0.550 3~0.575 4,表明4个群体具有丰富的遗传多样性。4个大鳞副泥鳅群体间的遗传距离为0.528 3~0.967 7,洪泽湖和太湖群体间的遗传距离最小(0.528 3),而太湖和巢湖群体间遗传距离最大,亲缘关系相对较远。基于遗传距离的聚类结果显示4个群体先聚为2个分支,其中太湖和洪泽湖群体聚为一支,洞庭湖和巢湖群体聚为另一支,这与4个大鳞副泥鳅野生群体的地理分布一致。中国4大湖泊大鳞副泥鳅自然群体具有丰富的遗传多样性,每个群体宜作为独立的保护单元进行保护。4个大鳞副泥鳅群体中太湖群体和洪泽湖群体的遗传多样性最高,可作为进一步遗传选育的基础群体。     

真泥鳅和大鳞副泥鳅怀卵量的比较分析

研究了真泥鳅(Misgurnus anguillicaudatus)和大鳞副泥鳅(Paramisgurnus dabryanus)体长与怀卵量的关系.结果表明,两种泥鳅的平均绝对怀卵量都随体长的增加有明显的增加趋势,体长在10 cm以下时,两种泥鳅的平均绝对怀卵量没有显著差异;体长在10-25 cm时两种泥鳅的平均绝对怀卵量均存在显著差异;同一体长段真泥鳅的怀卵量高于大鳞副泥鳅.     

安庆地区大鳞副泥鳅的骨骼系统研究

采用2种方法制备大鳞副泥鳅整体和分离的骨骼标本,记录观测结果并详细叙述骨骼系统的结构。结果表明：大鳞副泥鳅具发达的鼻区骨骼,眼区骨骼退化,具腹肋。腰带仅有一对无名骨组成。     

大鳞副泥鳅角蛋白18基因cDNA的全长克隆与序列分析

角蛋白18(K18)是角蛋白的一种,为中间纤维蛋白,是细胞骨架的必要组成部分。采用RACE法克隆了大鳞副泥鳅K18基因cD NA的全长序列,并运用实时荧光定量PCR技术探讨其在不同组织中的表达。结果表明,克隆得到的大鳞副泥鳅K18基因cD NA序列全长为1 718 bp,其中包含1个长1 296 bp开放阅读框,编码431个氨基酸,蛋白质相对分子量48.66 ku。同源性分析显示,大鳞副泥鳅K18与泥鳅的相似性最高为98%,与斑马鱼、金鱼、虹鳟、白斑狗鱼等物种K18也存在不同程度的相似性。系统进化分析表明,大鳞副泥鳅与其他物种的K18系统发育同源,并与泥鳅的关系最为密切。通过实时荧光定量PCR分析,K18基因在大鳞副泥鳅的肠、肌肉、胃、心脏、肝脏、精巢、卵巢、脾脏等8种组织中都有表达,其中,肠表达最高,心脏最低。研究旨在为大鳞副泥鳅的分子生物学研究提供参考资料,并为更好地了解大鳞副泥鳅细胞骨架结构系统提供依据。     

甲醛对大鳞副泥鳅的毒性研究

以大鳞副泥鳅为试验动物,设置甲醛对其急性毒性、遗传毒性和生理毒性试验,研究甲醛对大鳞副泥鳅的半致死浓度、红细胞DNA损伤大小及对其肝脏GPT和GOT活性的影响。结果表明,甲醛对大鳞副泥鳅具有明显的毒性,其96 h的LD50为368.71 mg/L;试验各组的微核率均高于对照组,且与处理浓度和染毒时间呈正相关;同时酶活力与处理浓度和染毒时间则呈负相关。结论:甲醛具有较强的环境毒性,并表现出明显的时间、剂量效应。     

大鳞副泥鳅人工繁殖技术研究

用专塘培育大鳞副泥鳅亲鳅,采用人工催情注射、产卵、授精,水泥池网箱孵化、培育等方法,催产大鳞副泥鳅5 200组,人工繁殖受精率和孵化率均在70%以上,繁育大鳞副泥鳅鳅苗2 600万尾。     

饥饿胁迫下大鳞副泥鳅外周红细胞的形态变化

[目的]为研究饥饿胁迫下鱼类的生理生化变化提供参考。[方法]采用传统瑞氏染色法研究饥饿胁迫下大鳞副泥鳅外周红细胞的形态变化。[结果]大鳞副泥鳅的成熟红细胞逐渐发生变化,先出现核膜溶解,然后出现细胞形变,接着出现核质扩散和细胞膜溶解,最后整个成熟红细胞膜完全溶解,核染色反应由紫黑色变为紫红色最后变为粉红色。大鳞副泥鳅的幼稚红细胞则明显增多。[结论]在饥饿胁迫下大鳞副泥鳅外周红细胞出现核异常,主要表现为核膜溶解和核质扩散,因此红细胞核异常可以作为饥饿胁迫的指标。     

两种泥鳅杂交及人工诱导大鳞副泥鳅雄核发育的染色体变化

当泥鳅自交时，其后代染色体数为2n＝100；如果泥鳅卵子与大鳞副泥鳅精子授精，其染色体来源于两种泥鳅，染色体数为2n＝74，未发现有染色体丢失现象。当泥鳅卵子经紫外线辐射后与大鳞副泥鳅精子授精，如果不进行二倍化处理，86％的胚胎染色体完全来源于父本大鳞副泥鳅，为雄核发育单倍体n＝24，经过二倍化处理后所获得的二倍体为大鳞副泥鳅雄核发育纯合二倍体，染色体数为2n＝48。