大鲵蛙病毒巢氏PCR检测方法的建立

参照GenBank已收录的大鲵蛙病毒MCP基因序列设计特异性引物,建立基于大鲵蛙病毒特异性引物的巢式PCR检测体系。本试验利用大鲵蛙病毒CGSV主要核衣壳蛋白MCP基因保守区,设计内引物和外引物并制备了重组质粒pMD19-T作为阳性对照标准品。灵敏度试验结果显示,巢氏PCR的敏感性较普通PCR的敏感性高1 000倍;而且与草鱼呼肠孤病毒(Grass carp reovirus,GCRV)、鲫鱼疱疹病毒2型(Goldfish herpes virus,CyHV-2)、云斑尖塘鳢虹彩病毒(Marbled sleepy goby iridovirus,MSGIV)、迟钝爱德华菌(Edwardsiella tarda)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)、维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)等无交叉反应。该体系具有简便、快捷、特异性高、低成本等特点,为大鲵蛙病毒检测提供了一项重要的技术手段。     

大鲵蛙病毒LAMP检测方法的建立

根据大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)主要核衣壳蛋白MCP编码基因的序列设计合成4条特异性引物,以重组pMD19-T-MCP质粒为模板,通过反应条件与反应体系优化,建立CGSRV的环介导等温扩增(LAMP)检测方法,测定LAMP对CGSRV的最低检测限,并与巢式PCR和普通PCR进行比较。结果表明,该LAMP方法最佳反应温度为62℃,反应时间为40min,对CGSRV最低检测限5copies/μL,而巢氏PCR和常规PCR的检测限为50和5×103copies/μL,表明该LAMP方法的灵敏度显著高于巢氏PCR和常规PCR;且与淋巴囊肿病毒、鲫鱼出血病疱疹病毒2型、云斑尖塘鳢虹彩病毒、鳜鱼传染性脾肾坏死病毒、迟钝爱德华菌、嗜水气单胞菌和维氏气单胞菌等均无交叉反应;反应结束后加入荧光染料EtBr可肉眼判定粉色为阳性,而棕色则为阴性。因此,该方法对CGSRV的检测较巢氏PCR和常规PCR更为简便、快速、灵敏、特异,且不需昂贵仪器设备,更适合养殖现场检测,为CGSRV早期感染的快速检测提供了新方法。     

东北林蛙种蛙蛙病毒LAMP快速检测

由于环境、气候的恶化以及疾病的侵害,全球两栖动物种群数量呈现出整体衰退的趋势,其中虹彩病毒属蛙病毒科的蛙病毒是不可忽略的原因之一.环介导等温扩增技术（loop-mediated-isothermal-amplification,LAMP）是一种新型的核酸扩增技术,具有特异性强、快速、简便等特点,本研究利用LAMP技术,开发了针对中国东北林蛙种蛙蛙病毒的快速检测方法,针对蛙病毒MCP基因设计出能特异识别靶序列上6个位点的4条特异性引物,在链置换聚合酶（Bst酶）的作用下,62℃扩增30 min.通过对实验参数的优化,扩增后病毒的最低检出数可达到102个拷贝.该方法可用于东北林蛙养殖厂种蛙蛙病毒的临床快速检测,保证种蛙的存活质量和数量.     

鸭病毒性肝炎的病理形态学观察

通过对鸭病毒性肝炎自然病例的病理学研究,表明病鸭死亡后多呈角弓反张姿势。剖检以肝肿大、土黄色并有出血斑点为主要特征,且胆囊扩张,脾脏多呈灰白色;主要组织学病变为肝呈变质性肝炎,表现为肝弥漫性空泡变性,局灶性坏死和出血。脑水肿,包括脑小血管周围水肿,神经细胞水肿。脾脏发生坏死性脾炎。胰腺、心肌、骨骼肌等组织间质水肿及实质细胞水泡变性。胸腺、胰腺、法氏囊均有坏死灶。结果表明,鸭病毒性肝炎是雏鸭的一种急性败血症。     

2株东北林蛙源蛙病毒MCP基因序列分析

虹彩病毒科蛙病毒属的蛙病毒是两栖动物最重要的病原之一,国内在北方地区少有研究。将前期在调查中获得的2个东北林蛙蛙病毒阳性样本进行特异性分子生物学鉴定、克隆和测序,并与已知的欧美、澳大利亚等国的序列进行比对,进行系统发育分析,结果发现这2株蛙病毒与欧洲和澳大利亚的序列亲缘性比较远,而与蛙病毒属代表株美国的FV3亲缘性比较...     

蛙病毒的传入风险分析

为评估蛙病毒跨境传播的风险,提出科学可行的控制手段,对导致蛙病毒进入我国的可能因素进行了风险分析。分析结果显示:传入蛙病毒的主要威胁是来自疫区的活的养殖用两栖类动物,其次是养殖用爬行类动物。对进口活的养殖用两栖类,要求出口渔场进行2年以上的监测。对用于动物园或实验室的敏感动物,建议不从疫区进口;对进口动物种蛋,要进行表面消毒;对其它敏感鱼类(活的和冰冻、冰鲜的),在不从疫区进口的前提下,需要进口后抽样检疫;对加工后的制品以及其它非敏感水生动物,可以自由贸易。对运输活鱼的水、包装等需要强制进行常规消毒。这些检疫措施,是按照SPS的原则和科学原则提出来的,不仅能保障进口两栖和爬行类动物对我国水产养殖的安全,也能降低对国际贸易的消极影响。     

鸡轮状病毒感染的病理形态学观察

为确定鸡轮状病毒感染的病理变化特点，对自然发病和人工发病轮状病毒感染鸡进行了病理学研究。结果表明，该病特征性的病理剖检变化为肠黏膜脱落出血，呈卡他性炎症表现。特征性组织学变化为小肠绒毛显著缩短，肠腺深度增加；除肠绒毛缩短外，肠上皮还变为扁平或立方形，并伴发坏死、脱落，黏膜充血、水肿与淋巴细胞浸润。电镜观察，肠黏膜上皮细胞的线粒体肿胀，嵴变粗，排列紊乱；粗面内质网及滑面内质网均扩张呈圆形，粗面内质网表面的核糖体部分脱落，胞浆内游离的核糖体减少。     

水牛自然感染巨盘腹袋吸虫病的病理形态学观察

１７例自然感染巨盘腹袋吸虫的水牛，剖杀前表现消瘦，贫血，下颌水肿；剖杀后可见肝脏肿大，膈面和脏面粗为造福和膜增厚，散在出血点。瘤胃粘膜脱落，有出血斑或出血点，并有大量成虫寄生。真胃有出血点，粘膜脱落。小肠粘膜表面有充血区和出血斑点。     

人工感染弓形虫兔主要脏器病理形态学观察

将人工感染弓形虫兔于濒死期(3～46d不等)扑杀,取其心、肝、脾、肺和肾五种脏器组织,作了病理形态学观察。主要结果如下:肝、心、脾组织中有周边无炎性反应的凝固性坏死;肝组织中还有网状细胞增生形成的结节;肺脏表现为肺泡隔炎等,这些特征性病变与其他动物弓形虫病变基本相同。同时观察到在肝窦状隙、小叶间动、静脉、肺泡壁毛细血管、肺支气管动脉、心肌纤维间毛细血管和脾静脉窦内均有血栓形成,同时伴?坏死性血栓性血管炎;各脏器的动脉管壁呈现不同程度的玻璃样变,以及由血栓形成所致其周围组织的病变。另外,应用PAS、PTAH、Weigert-Gram等染色方法显示组织切片中的弓形虫,比H.E染色更易于观察。     

中国大鲵养殖繁育技术的探讨

通过１９８７ ～１９９８ 年连续１２ 年对中国大鲵（ Ａｎｄｒｉａｓ ｄａｖｉｄｉａｎｕｓ） 进行养殖繁育技术的研究,取得一定的成果。养殖周年成活率达７５ ％ ～９０ ％ ,从１９８９ 年起至今已连续１０ 年产卵,从１９９１ 年起至今已连续８ 年人工孵化出大鲵幼苗。     

Genome architecture changes and major gene variations of Andrias davidianus ranavirus (ADRV)

Ranaviruses are emerging pathogens that have led to global impact and public concern. As a rarely endangered species and the largest amphibian in the world, the Chinese giant salamander, Andrias davidianus, has recently undergone outbreaks of epidemic diseases with high mortality. In this study, we isolated and identified a novel ranavirus from the Chinese giant salamanders that exhibited systemic hemorrhage and swelling syndrome with high death rate in China during May 2011 to August 2012. The isolate, designated Andrias davidianus ranavirus (ADRV), not only could induce cytopathic effects in different fish cell lines and yield high viral titers, but also caused severely hemorrhagic lesions and resulted in 100% mortality in experimental infections of salamanders. The complete genome of ADRV was sequenced and compared with other sequenced amphibian ranaviruses. Gene content and phylogenetic analyses revealed that ADRV should belong to an amphibian subgroup in genus Ranavirus, and is more closely related to frog ranaviruses than to other salamander ranaviruses. Homologous gene comparisons show that ADRV contains 99%, 97%, 94%, 93% and 85% homologues in RGV, FV3, CMTV, TFV and ATV genomes respectively. In addition, several variable major genes, such as duplicate US22 family-like genes, viral eukaryotic translation initiation factor 2 alpha gene and novel 75L gene with both motifs of nuclear localization signal (NLS) and nuclear export signal (NES), were predicted to contribute to pathogen virulence and host susceptibility. These findings confirm the etiologic role of ADRV in epidemic diseases of Chinese giant salamanders, and broaden our understanding of evolutionary emergence of ranaviruses.     

桑叶提取物和1-脱氧野尻霉素对大鲵生长性能、肝脏功能及免疫能力的影响

本试验旨在研究桑叶提取物(MLE)和1-脱氧野尻霉素(DNJ)对大鲵生长性能、肝脏功能及免疫能力的影响.选择初始均重为(47.81±0.23)g的大鲵72尾,随机分为3组,每组3个重复,每个重复8尾.对照组饲喂基础饲料,试验组在基础饲料中分别添加7.5 g/kg MLE(MLE组)和0.04 g/kg DNJ(DNJ组...     

Pathological changes in the small intestine of neonatal calves naturally infected with reo-like virus (rotavirus).

Nine calves, of which six had been challenged with an enteropathogenic strain of Escherichia coli, were found to be naturally infected with rotavirus. Rotavirus was recovered from the faeces of six calves and rotavirus antigen was detected in the intestinal mucosa of all calves. Stunting and fusion of villi were seen principally in the proximal and middle small intestine, where rotavirus antigen was detected by immunofluorescence. Typical lesions of enteric colibacillosis were found in the distal ileum of the challenged calves, associated with adhesion of the challenge strain of E coli to the mucosa. All samples were removed from the intestine under general anaesthesia and denudation of villi was not observed. However, following exsanguination and resampling at the same site in the small intestine of one calf, denudation was a constant feature.     

不同饵料对大鲵稚体生长性能、体组成和消化酶活性的影响

为确定大鲵稚体的最佳饵料,本试验研究了不同饵料对大鲵稚体生长性能、体组成和消化酶活性的影响。试验选取平均体重为(1.08±0.01)g的大鲵稚体300尾,随机分成5组,每组3个重复,每个重复20尾。5组大鲵稚体投喂5种不同的饵料,分别为鱼块、黄粉虫、水蚯蚓、卤虫和米虾,养殖时间为60 d。结果显示:不同饵料对大鲵稚体的存活率以及全鱼水分、粗灰分含量均无显著影响(P0.05);米虾组的末均重、增重率和特定生长率均为各组最高,显著高于水蚯蚓组和卤虫组(P0.05);黄粉虫组和水蚯蚓组的肥满度显著高于卤虫组(P0.05)。干物质效率表现为鱼块组和水蚯蚓组显著高于其他各组(P0.05),米虾组显著高于卤虫组和黄粉虫组(P0.05),卤虫组显著高于黄粉虫组(P0.05);各组间大鲵稚体蛋白质效率差异显著(P0.05),表现为水蚯蚓组米虾组鱼块组卤虫组黄粉虫组;鱼块组脂肪效率显著高于其他组(P0.05),卤虫组和米虾组显著高于水蚯蚓组和黄粉虫组(P0.05),水蚯蚓组显著高于黄粉虫组(P0.05)。米虾组全鱼粗蛋白质含量为各组最高,显著高于黄粉虫组和卤虫组(P0.05);而全鱼粗脂肪含量最高的是黄粉虫组,显著高于其他各组(P0.05)。各组大鲵稚体全鱼17种氨基酸含量、氨基酸总量、必需氨基酸总量和鲜味氨基酸总量差异不显著(P0.05),但水蚯蚓组、卤虫组和米虾组的必需氨基酸与非必需氨基酸的比值显著高于鱼块组和黄粉虫组(P0.05)。鱼块组和米虾组大鲵稚体胃肠道蛋白酶活性显著高于黄粉虫组和卤虫组(P0.05);黄粉虫组胃肠道脂肪酶活性显著高于其他各组(P0.05);胃肠道淀粉酶活性仅卤虫组显著低于其他各组(P0.05)。综上所述,米虾是大鲵稚体的最佳饵料,鱼块次之,水蚯蚓和黄粉虫最后选用。     

绵羊自然感染贝氏莫尼茨绦虫对小肠黏膜免疫相关细胞的数量变化

运用组织学和组织化学染色法,分别对自然感染贝氏莫尼茨绦虫的成年绵羊（感染组）与正常成年绵羊（对照组）的小肠各肠段的上皮内淋巴细胞、浆细胞、杯状细胞和嗜酸粒细胞的分布和数量变化进行了比较研究。结果显示：感染组小肠各段上皮内淋巴细胞、浆细胞、杯状细胞和嗜酸粒细胞数量均显著高于对照组,其中感染组十二指肠、空肠和回肠的上皮内淋巴细胞数量分别比对照组增加了169.11%、230.38%和233.42%（P〈0.01）;嗜酸粒细胞数量分别比对照组增加了116.78%、123.87%和164.51%（P〈0.01）;浆细胞数量分别比对照组增加了127.34%、72.97%和328.26%（P〈0.01）;杯状细胞数量分别比对照组增加了33.40%、41.42%和133.17%。对照组和感染组上皮内淋巴细胞和杯状细胞从十二指肠到回肠均逐渐减少,相反,对照组和感染组嗜酸粒细胞数量从十二指肠到回肠均逐渐增多,对照组小肠固有层浆细胞数量从十二指肠到空肠增加,空肠到回肠减少,感染组小肠固有层浆细胞数量从十二指肠到回肠均逐渐增多;对照组十二指肠、空肠、回肠的上皮内淋巴细胞、上皮内杯状细胞、浆细胞和嗜酸粒细胞均差异极显著（P〈0.01）;感染组十二指肠、空肠、回肠的上皮内杯状细胞、浆细胞和嗜酸粒细胞均差异极显著（P〈0.01）,感染组上皮内淋巴细胞空肠与回肠差异极显著（P〈0.01）,但十二指肠与空肠差异不显著（P〉0.05）。研究结果表明,贝氏莫尼茨绦虫感染成年绵羊后,成年绵羊通过特异性黏膜免疫细胞上皮内淋巴细胞增生加强细胞免疫水平,浆细胞增生加强体液免疫水平,同时还通过非特异性黏膜免疫细胞,嗜酸粒细胞和杯状细胞的增生进一步加强黏膜免疫水平以抵抗贝氏莫尼茨绦虫对绵羊的感染。可见绵羊可以通过黏膜免疫相关细胞增生加强局部免疫力以监视虫体免疫逃逸来抵抗寄生虫的感染。     

中药成分对传染性法氏囊病毒感染细胞的影响

将黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂甙、人参皂甙等 1 0种中药成分与鸡传染性法氏囊病毒 (IBDV)以 3种顺序加入到培养 2 4h的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。即先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药、中药和病毒同时加入 ,观察细胞病变的程度 ,以评价它们对IBDV感染细胞的影响。结果表明 ,先加中药后接种病毒和中药与病毒同时加入时 ,多数中药成分处理组在病毒接种后 72h的细胞病变程度明显减轻 ,表明多数中药能抑制病毒感染细胞 ,且有一定的量效和时效关系。     

大鲵脾脏结节症病原菌的分离鉴定及药敏试验

为探究重庆地区中国大鲵(Andrias davidianus)脾脏结节症的病因及防控措施,本研究对发病大鲵进行了临床剖检及病理组织学观察,并采用微生物学方法从其肝脏、脾脏中分离病原菌,通过人工感染试验确定分离菌株的致病性,并对菌株的基本形态、理化特性、分子特征及药物敏感性等进行了系统研究。结果显示,患病大鲵脾脏有大量白色结节,质脆,病理切片发现脾组织有出血及丝网状纤维素分布,淋巴细胞部分消失;肝细胞肿胀、变性。从肝脏中分离到1 株病原菌,命名为KNL-1。人工感染试验发现,该菌对试验鲫鱼和大鲵均有较强的致病力,试验动物死亡率高达100%,大鲵发病症状与临床自然发病症状一致,确认为该病的致病菌。综合分离菌的16SrDNA 序列测定、培养特性、生化试验及BIOFOSUN-GN 系统鉴定结果,确定KNL-1 为杀鲑气单胞菌杀日本鲑亚种(Aeromonas salmonicida ssp. masoucida)。药敏试验结果显示,该菌对头孢氨苄、卡那霉素、头孢他啶、头孢曲松、先锋霉素、新霉素、庆大霉素、左氧氟沙星、米诺环素、丁胺卡那霉素和氟苯尼考高度敏感;对氨苄西林、麦迪霉素和羧苄西林耐药。     

试论对黑嘴端凤头燕鸥的当前认知

The Chinese Crested Tern(Sterna bernsteini; hereafter regarded as CCT,Plate Ⅰ)is perhaps the most enigmatic tern bird in the world-though discovered as early as in 1863,but,compared with most other tern species,so few the records of this tern had far been reported in the last 50 years or even 150 years.