拟松材线虫对黑松致病性研究

松材线虫病（Ｂｕｒａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｍｕｃｒｏｎａｔｕｓ）是发生在松树上的一种毁灭性病害 ,目前已在日本、中国、美国、加拿大和韩国等分布 ,并在日本和中国造成巨大的损失。在北美洲 ,松材线虫分布也很广。针叶树中还有一些形态与松材线虫非常相近的伞滑刃线虫 ,统称松材线虫复合种（ＰＷＮＣ） ,其中最常见的是拟松材线虫。拟松材线虫在东亚、美洲、欧洲都有 ,分布极广泛。杂交试验和ＤＮＡ分析证实松材线虫和拟松材线虫有密切的关系 ,能用ＲＡＰＤ和ＲＦＬＰ技术进行区分 ,拟松材线虫的ＤＮＡ有东亚和欧洲两种类型 ,前者主要分…     

松材线虫雌虫尾尖突变化综述

通过对14种松材线虫组线虫种内变异、松材线虫雌虫尾尖突随环境变化的比较分析,总结出松材线虫的形态鉴定特征,即对于大多数松材线虫群体,形态学方法可准确判定松材线虫,在判断其为伞滑刃属后,掌握以下3点:(1)雄虫典型的较大弓状交合刺(直线长20~30μm);(2)雌虫较长的阴门盖(长7~11μm);(3)雌虫尾亚圆柱形,末端宽圆,无尾尖突(偶尔群体内个别有微小的尾尖突,但不超过2μm)。最后对松材线虫持久型和繁殖型幼虫尾尖突变化进行了描述。     

拟松材线虫对黑松苗的致病性

测定来源于中国、日本、韩国、加拿大、挪威和法国的20个拟松材线虫种群对2年生黑松苗的致病力。根据其致病力大小分为3类：第1类致病力很强，致死率大于85％，RHS(相关寄主适生性)系数大于100，包括法国的1个种群和中国的3个种群；第Ⅱ类有较强的致病潜能，在环境适宜的情况下可能造成严重危害，这一类数量最多，包括中国的11个种群和加拿大的1个种群；第Ⅲ类几乎没有致病力，其致死率和RHS系数都是0，包括韩国的2个种群及日本和挪威各1个种群。试验证明法国BmFr种群致死速度最快，致病力最强。黑松苗在感染拟松材线虫后，用自然界水分胁迫和PEG胁迫处理，结果表明，干旱胁迫能明显加快黑松苗死亡速度，且大大提高死亡率。提示在高温干旱的年份拟松材线虫可造成松树的大面积死亡。     

拟松材线虫(Bursaphelenchus mucronatus)的形态诊断和致病性研究

辨认病松木材内拟松材线虫(Bursaphelenchus mucronatus)和松材线虫(B.xylophilus)的主要依据是:雌虫尾端指状,尾尖突长达3.5微米以上的为拟松材线虫;雌虫尾端宽圆、无尾尖突的或尾端指状、尾尖突长1微米左右(不超过2微米)的为松材线虫。 人工接种3—6年生盆栽和林内自生马尾松(Pinus massoniana),无论是一般接种量(5000条/株)或加大接种量(13000条/株),拟松材线虫对接种株不表现致病能力或者致病微弱。检查200多株病松样本以及对一些病株作系统观察,绝大多数拟松材线虫只出现于受害虫为害或由其它因素引起的枯死株(枝)或濒死株中。因此初步认为,拟松材线虫属于弱性寄生物类群,在国内马尾松等树种枯死株中由它所起的为害作用,目前不宜估计过高。     

拟松材线虫对马尾松致病性的研究初报

用拟松材线虫(Bursaphelenchus mucronatus)接种重庆南山马尾松(Pinus massoniana)。结果表明,对健康树无致病性,而对衰弱树的平均致死率为5.88％。     

松材线虫和拟松材线虫的PCR快速检测

利用PCR技术对松材线虫Bursaphelenchus xylophilus与拟松材线虫B．mucronatus的rDNA的ITS1区和5．8S区核甘酸序列扩增．根据松材线虫与拟松材线虫的ITS1序列区别,分别设计出松材线虫和拟松材线虫的特异性引物,实现了单条活的或FG(φ为4％的甲醛)固定的松材线虫和拟松材线虫的快速检测．     

四川松材线虫与拟松材线虫的PCR-RFLP鉴别

应用PCR-RFLP技术对来自四川省8个地方的枯死松树样品中的伞滑刃属线虫(Bursaphelenchus)群体进行了分子鉴定。结果显示来自邻水、雅安的枯死松树样本中含有松材线虫(B.xylophilus),而来自大竹和遂宁的枯死松树样本中含有拟松材线虫(B.mucronatus)。其他伞滑刃属线虫包括莱鲁尔夫伞滑刃线虫(B.rainulf)、霍夫曼伞滑刃线虫(B.hofumanni)、泰国伞滑刃线虫(B.thailandae)、变异伞滑刃线虫(B.aberrans)。本研究中选用的4种限制性内切酶(DraⅠ、SalⅠ、HhaⅠ、AluⅠ)除SalⅠ外均可对所鉴定的这6种伞滑刃属线虫产生特异性的酶切位点,从而可均有效地鉴别出松材线虫、拟松材线虫和其他4种伞滑刃属线虫,其结果可为今后这几种伞滑刃属线虫的分子鉴定提供一定的参照。     

松材线虫和拟松材线虫食道腺及其分泌物超微结构观察

该文用透射电镜观察比较松材线虫南黑株系、拟松材线虫杭九株系幼虫期和成虫期食道腺和分泌物颗粒的形态以及在生活史中的变化. 结果表明二者的食道腺的结构以及在不同时期活性的变化是一致的:幼虫期亚腹食道腺发达,内有大量的分泌颗粒;成虫期背食道腺发达,内有大量的分泌颗粒. 松材线虫和拟松材线虫食道腺分泌颗粒可分为两种类型,这两种类型的分泌颗粒在体积和电子密度上都存在差异. 松材线虫和拟松材线虫株系间的分泌颗粒在体积上存在差异.      

宁波松木中松材线虫与拟松材线虫混生现象的报道

在对宁波地区松木中携带的伞滑刃属线虫种类进行调查时,多次发现了松材线虫与拟松材线虫混生的现象,并进行了分子生物学方法的确认。     

拟松材线虫媒介昆虫报道

对拟松材线虫发生区内46株萎蔫云南松上的主要蛀干害虫松墨天牛、纵坑切梢小蠹和马尾松角胫象甲进行采样、分离和镜检,结果表明:松墨天牛携带拟松材线虫,是拟松材线虫的主要媒介昆虫,纵坑切梢小蠹和马尾松角胫象甲未检出拟松材线虫.通过分析云南拟松材线虫的危害性提出防控对策.     

拟松材线虫侵染对云南松几种生理生化物质的影响

为研究拟松材线虫侵染对寄主内部生理生化物质代谢的影响,测定并比较了健康的云南松以及感染拟松材线虫后发病未死亡和死亡的云南松树干样品中水分、可溶性糖、脂类、酚类,粗蛋白5种生理生化物质的含量。结果表明：拟松材线虫侵染可导致寄主水分、脂类物质含量下降,可溶性糖、酚类物质含量先升后降,对粗蛋白含量无明显影响。     

松材线虫和拟松材线虫种间及种下群体的RAPD指纹分析

利用ＲＡＰＤ技术对松材线虫（Ｂｕｒｓａｐｈｅｌｅｎｃｈｕｓｘｙｌｏｐｈｉｌｕｓ）和拟松材线虫（Ｂ．ｍｕｃｒｏｎａ－ｔｕｓ）的分离物基因组ＤＮＡ进行了ＤＮＡ片段的随机扩增,以确定种间及种内群体的亲缘关系和筛选具有种鉴定特征的分子标记．通过对４０个１０聚体随机引物的筛选,应用８个引物对两种线虫种间及种内分离物扩增片段的遗传分析显示：两种间群体ＲＡＰＤ扩增片段的共享度为４０％～５６％,而在松材线虫的不同分离物之间的共享度为６０％～８４％;其中有一个引物（Ｐ２５３）可在松材线虫和拟松材线虫种间产生具有种鉴定特征的特异性ＲＡＰＤ片段,在松材线虫的不同分离物中均可产生一约７００ｂｐ的特异性片段,而在拟松材线虫中产生了两个分别约为１３００ｂｐ和１９００ｂｐ的特异性片段．     

松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白基因全长cDNA克隆与分析

[目的]对松材线虫和拟松材线虫的14-3-3蛋白基因进行全长cDNA克隆,并进行序列分析。[方法]根据GenBank数据库中14-3-3蛋白EST序列BXC56（登录号为FG589472）、BMCl20（登录号为FG589351）,采用RACE技术获取松材线虫和拟松材线虫14-3-3蛋白的全长cDNA克隆Bxl4-3-3a和Bml4-3-3a,并对克隆片段序列进行分析。[结果]Bx14-3-3a全长1039bp,包含一个756bp的开放阅读框,编码蛋白含有251个氨基酸残基,包含2个14-3-3蛋白标签,编码蛋白分子量为61．43kD,等电点为4．88。Bx14-3-3a基因组结构中包含4个外显子和3个内舍子序列。Bm14-3-3a全长992bp。有与Bx14-3-3a编码完全相同的氨基酸序列。序列比对结果表明,14-3-3在真核生物间高度保守,Bx14-3-3A和Bm14-3-3A蛋白在系统进化上与线形动物门（Nematomorpha）的物种近缘关系较近,与植物线虫南方根结线虫（Meloidogyneincognita）系统发育关系上最为亲近。[结论]Bx14-3-3a和Bm14-3-3a的成功克隆,为进一步研究其功能及其调控因子对形态、致病力、繁殖力和环境适应性等方面的分子调控机制奠定了重要基础。