从树木体细胞分离所得不同原生质体的杂交融合试验

<正> 引言对高等植物分离出的原生质体,用人工诱导其融合的重要意义已有不少论说。为了成功地完成体细胞杂交,必须提供适合于诱导原生质体融合的各种条件。自从卡逊等(1972)对两种烟草即Nicotiana glauca和N.longsdorffii的体细胞间的杂交作出成功的范例以后,人们一直在研究,通过什么条件可以诱导高等植物体细胞的融合。     

油桐叶肉细胞原生质体分离及瞬时转化体系的建立

【目的】探索油桐叶肉细胞原生质体分离的最适条件,建立油桐原生质体的遗传转化体系,使在油桐体内研究自身基因的功能成为可能。【方法】以油桐成熟叶片和组培苗幼叶为材料,通过酶解法成功分离得到油桐叶肉细胞的原生质体并确定最适分离条件。在此基础上,以获得的原生质体为受体系统,建立PEG介导的油桐原生质体基因转化方法。【结果】原生质体分离结果表明,酶解时间对原生质体产量和活性的影响最大,其次是纤维素酶浓度,而离析酶浓度和甘露醇浓度对原生质体产量和活性的影响较小。以成熟叶片为材料分离原生质体的最适条件为纤维素酶浓度1.5%、离析酶浓度1%、甘露醇浓度0.6 mol·L-1、酶解时间12 h,以组培苗幼叶为材料分离原生质体的最适条件为纤维素酶浓度2%、离析酶浓度1%、甘露醇浓度0.7 mol·L-1、酶解时间6 h。为了建立油桐原生质体的瞬时转化体系,通过PEG介导法将拟南芥MGT6基因导入到油桐原生质体中,结果发现MGT6蛋白定位于原生质体质膜,与之前报道的研究结果一致,这表明本研究建立的油桐原生质体转化方法可成功将外源基因导入油桐原生质体并使其表达。【结论】建立油桐成熟叶片和组培苗幼叶叶肉细胞原生质体的高效分离方法,综合考虑取材的便利性和对后续原生质体培养的影响,建议以组培苗幼叶为材料分离原生质体,分离条件为纤维素酶浓度2%、离析酶浓度1%、甘露醇浓度0.7 mol·L-1、酶解时间6 h。在分离得到油桐叶肉细胞原生质体的基础上,本研究建立的PEG介导的原生质体遗传转化方法能以油桐叶肉细胞原生质体为受体,高效地将外源基因导入其中并使外源基因表达。本研究结果不仅可促进油桐基础研究的发展,在通过细胞融合和基因工程手段进行油桐种质创新方面也具有重要意义。     

原生质体融合构建高效降解工程菌的研究

研究了球形红假单胞菌与酿酒酵母菌的原生质体融合条件，并对融合子性能进行了测定.结果表明两种菌株分别在溶菌酶——EDTA和蜗牛酶——巯基乙醇处理后形成原生质体，两种原生质体在聚乙二醇（PEG）和Ca     

地锦与五叶地锦原生质体分离及培养研究

用纤维素酶、果胶酶、甘露醇的混合酶液提取地锦和五叶地锦无菌苗幼叶、五叶地锦胚乳愈伤组织及地锦幼胚愈伤组织的原生质体,对影响原生质体提取得率及活力因素进行分析,对不同材料原生质体得率进行比较,对提取的原生质体进行液体浅层、固液结合及固体等方式培养,对原生质体形成的愈伤组织以MS和改良B5培养基附加不同浓度NAA、6-BA、2,4-D、PEG、KT、ZT等进行分化培养.试验结果表明纤维素酶对原生质体提取得率有极显著影响,适宜地锦幼叶原生质体提取的酶液组合为纤维素酶O.5%、果胶酶0.3%、甘露醇0.6 mol·L-1、酶解8 h;不同材料原生质体提取得率有显著差异;仅五叶地锦胚乳愈伤组织来源的原生质体在固体培养基中形成新的愈伤组织,其它方式培养的不同材料原生质体均无分裂或仅形成数十个细胞的细胞团后便解体;用30余组配方进行了五叶地锦胚乳愈伤组织原生质体形成的新愈伤组织的分化培养,继代6～10次后仍无分化迹象.     

生香酵母的应用与展望

通过对生香酵母在低醇饮品、果汁与葡萄酒酿造、调味剂、烟草改良、原生质体融合技能等应用方面的剖析,分析了生香酵母在一些行业的主要运用。探讨了生香酵母在食品中味道多样性、养生食品等层面的开发,对生香酵母在发酵酿造与食品开发中的应用进行了展望。     

配方施肥对五味子高生长的影响

通过对疏林灌丛中栽植的五味子进行配方施肥试验,结果表明,N、P、K及其组合施肥对五味子高生长产生影响,影响效应依次为N>P>K,二元肥料组合中,N、K组合>P、K组合>N、P组合,最佳三元肥料组合N、P、K分别为4.83、.47和6.59 g.株-1。     

银杏原生质体制备及其融合研究

以银杏品种湖南梅核成熟胚进行组织培养得到的无菌苗和愈伤组织为材料,用不同酶液处理进行原生质体制备,并用PEG法进行原生质体融合实验。结果显示,以2.0%纤维素酶+1.0%果胶酶+5.0mmol/LMES+6mmol/LCacl2+0.6mol/L甘露醇( 号酶液)酶解银杏组织、方法1提取原生质体效果最好,其最高原生质体产率为9.4×107个/g;以17%蔗糖溶液处理得到原生质体质量最好。用40%PEG6000+0.3mol/L钙离子+pH9.5液体处理原生质混合液,银杏原生质体融合率最高,为67%。     

杨树原生质体解离和融合的初步试验

<正> 自从1960年Cocking E.C.用酶法解离原生质体成功以来,至今已经可以从许多植物不同部分解离出原生质体,并已有十多种草本植物经过培养长成了完整植株,同时也有了异源原生质体融合后再生成杂种植株的报道。我国在这方面研究日趋增多,已获得了菸草、胡萝卜,曼陀罗原生质体再生植株。但在木本植物方面至今国际上最好的结果仅是原生质体解离     

N、P、K配比施肥对高阿丁枫苗期生长的影响

采用正交设计设置N、P、K 3因素3水平的施肥试验,分析N、P、K配比施肥对高阿丁枫苗期生长的影响。结果表明,P素对高阿丁枫苗期生长影响最大,其次为N素,而K素的影响相对较小。不同水平的N、P、K配比施肥对试验苗有不同的影响,最适合高阿丁枫苗期生长的施肥处理是N1P1K1,即氮肥1.25g·株-1、磷肥5g·株-1、钾肥1.25g·株-1。     

马褂木N素吸收和利用效率家系遗传及N素影响

选用来自贵州黎平马褂木优良种源的23个优树自由授粉家系,设置低N和高N 2种N素水平的盆栽试验,以研究马褂木N素吸收和利用效率的家系遗传变异及N素水平的影响.结果表明:不同家系对N素水平的生长反应差异显著,家系N效率变化在17.5%～98.8%间.根据N效率大小可将参试家系划分为稳定型高N效率和敏感型低N效率两大类.除低N下根系N素利用效率的家系效应较小外,不同N水平下马褂木各器官及全株N素吸收和利用效率的家系差异都达到极显著水平,受较强的家系遗传控制,且N素环境对之影响较小,其家系遗传力在0.511 5～0.963 0之间.低N下稳定型高N效率的马褂木家系具有较高的N,P素吸收效率,进而导致其生长量大,叶片宽大而数量多,须侧根发达,然而试验却发现,高N效率的马褂木家系其叶片N素利用效率却较低.     

Transmission of mitochondrial plasmids in protoplast cell fusion between compatible monokaryons of <Emphasis Type="Italic">Lentinula edodes</Emphasis>

Electrophoretic analysis of the transmission pattern of mitochondrial plasmids in protoplast cell fusion between compatible monokaryons of Lentinula edodes indicates that three of the four plasmids carried in parental monokaryons are effectively transferred and replicated in the protoplast fusants. The two monokaryons, 1158a and 1569a, carried different plasmids that could be distinguished by a single restriction digest. Electrophoresis of intact plasmids and restriction analyses indicate that all but one of the fusants carry three of the four possible plasmids, indicating that transmission of plasmids in protoplast fusions is principally biparental in L. edodes. Thus, heterocytoplasmic cells of L. edodes can be effectively constructed by protoplast cell fusion. In addition, plasmids of the same homology group cannot coexist in the heteroplasmic cells after protoplast cell fusion. Contribution No. 382 of the Tottori Mycological Institute     

Introduction of mitochondrial DNA from <Emphasis Type="Italic">Pleurotus ostreatus</Emphasis> into <Emphasis Type="Italic">Pleurotus pulmonarius</Emphasis> by interspecific protoplast fusion

Interspecific protoplast fusion between two monokaryotic strains (a methionine auxotrophic and chloramphenicol-resistant Pleurotus ostreatus strain and a wild-type strain of Pleurotus pulmonarius) was carried out to introduce mitochondrial DNA (mtDNA) from P. ostreatus into P. pulmonarius. Because mycelial colonies regenerated on minimum medium containing chloramphenicol only after the treatment of protoplast electrofusion, the regenerants were regarded as protoplast fusants. The fusants isolated from regenerated colonies were uninucleate, and their resistance of chloramphenicol seemed to be a stable trait. The fusants mated with P. pulmonarius but not with P. ostreatus, and showed almost identical random amplified polymorphic DNA (RAPD) patterns to that of the parental P. pulmonarius monokaryon. The sizes of mitochondrial genomes were estimated to be 81.5 kb for P. ostreatus monokaryon, 54.9 kb for P. pulmonarius monokaryon, and 84.5 or 86.0 kb for the fusants. BamHI and EcoRI digest patterns of the fusant mtDNAs were almost the same as the parental P. ostreatus monokaryon. From the above results, the fusants seemed to carry nuclei derived from the monokaryon of P. pulmonarius and mtDNA including the chloramphenicol-resistance gene from the P. ostreatus monokaryon, suggesting that the P. ostreatus mtDNA had been introduced into P. pulmonarius cells by interspecific protoplast fusion. Contribution No. 383 of the Tottori Mycological Institute     

基因工程和细胞工程在林木遗传改良中的进展

本文对基因工程中外源基因种类、转基因技术、检测手段以及木本植物转基因植株成功的实例做了论述。同时介绍了细胞工程中体细胞胚状体发生及人工种子、原生质培育和体细胞融合,以及体细胞突变体的筛选等项研究在林木遗传改良中的进展和技术特点。     

双灭活原生质体融合构建纤维燃料乙醇全糖发酵高产菌株研究

以嗜鞣管囊酵母P - 01(Pachusolen tannophilus)和南阳酒精酵母1308(Saccharomyces cerevi-siae)的单倍体D - 12为亲本,通过双灭活原生质体融合技术,获得一株能够进行全糖发酵的稳定的酵母融合株F10,发酵醪液乙醇体积分数达到1.3%,比亲株P - 01的0.95%提高了36.8%.对玉米秸秆水解液进行发酵表明,融合株F10发酵玉米秸秆时乙醇体积分数最高可达1.1%,远高于亲株.     

压榨对烟草薄片纸基性能的影响

采用造纸法对烟梗和烟末制烟草薄片纸基进行了实验研究,探讨了压榨对烟草薄片纸基性能的影响。结果表明,压榨压力从0 MPa上升至0.4 MPa,薄片纸基的抗张指数由17.27 N.m/g逐渐增加到23.69 N.m/g,撕裂指数由2.00 mN.m2/g下降至1.69 mN.m2/g,松厚度从2.43 cm3/g下降到1.80 cm3/g,紧度由0.41 g/cm3上升0.56 g/cm3,薄片纸基的透气度由1.20μm/(Pa.s)下降到0.04μm/(Pa.s),薄片纸基的填充值由7.23 cm3/g逐渐下降到6.08 cm3/g。随着压榨压力的增加,润湿性Max值(tW,max)和特征值(t95)呈相近变化规律,压榨压力为0 MPa时,tW,max值最小(0.097 s),t95值最小(0.442 s),烟草薄片纸基具有较好的渗透性能和较开放的表面结构。扫描电镜分析结果表明,在低压榨压力(<0.2 MPa)条件下,能够显著提高薄片纸基内部的孔隙率,有利于改善薄片纸基的填充值和透气度,并且可以提高薄片纸基的渗透性能。     

植物原生质体游离、培养及应用

介绍了原生质体培养研究历史，并对植物原生质体游离、培养、植株再生及应用进行了综述。     

烤烟烟叶与造纸法再造烟叶热裂解产物的对比分析

为了更好的评价天然烤烟烟叶与造纸法再造烟叶在卷烟中的作用,对比研究了烤烟烟叶和造纸法再造烟叶的化学组成以及它们在不同温度下的热裂解产物.利用改进后的热裂解装置模拟了卷烟的燃烧行为,研究了烤烟烟叶和造纸法再造烟叶在大气环境中于300、600和900℃下的热裂解行为,并采用气相色谱 - 质谱联用仪对热裂解产物进行分析.结果表明,烤烟烟叶和造纸法再造烟叶的热裂解产物种类随着热裂解温度的增加而增多;在相同热裂解温度条件下,造纸法再造烟叶与烤烟烟叶的热裂解产物种类也存在差异.     

枣树离体培养研究进展

对枣树离体培养的研究现状进行了综述，包括器官培养；愈伤组织培养；花药培养；胚、胚乳培养；细胞培养；原生质体培养等。到目前为止，已有20多个枣品种以不同类型的外植体建立了无菌离体繁殖体系。然而枣树离体培养方面也存在着一定的问题，本文针对这些问题提出了自己的意见和建议。     

废次烟草中有效成分研究进展

湖南是烟草大省,每年有大量废次烟叶得不到合理利用。废弃烟草中两种主要成分是烟碱和茄尼醇,它们均是重要的化工和医药原料。本文重点介绍了它们的性质、用途、提取方法等国内外研究进展情况,便于更好的利用废次烟叶得到更有价值的产品。     

桉树组织培养研究进展

桉树组织培养在理论和实践中都具有非常重要的意义。迄今为止,全世界约有60种桉树进行过组织培养技术研究,包括胚培养、芽培养及嫩茎培养、花药培养、悬浮培养、原生质体培养、体细胞胚培养等技术,绝大部分成功获得完整植株。