不同温度下无乳链球菌感染罗非鱼死亡率及各组织HSP70基因表达研究

以体质量为(100.0±10.0) g的尼罗罗非鱼为研究对象,设置生长最适宜组(28℃)和高温应激组(35℃)2个处理水平,暂养7 d后分别进行人工感染试验统计累计死亡率,并于细菌感染后24、48、72、96、120 h,采集组织检测HSP70基因表达水平,探讨高水温下无乳链球菌感染罗非鱼过程中HSP70的作用机制,为制定控制无乳链球菌病的合理策略提供数据支撑。试验结果表明,LD₅₀攻毒试验中,28℃组试验尼罗罗非鱼在感染后48 h内没有死亡,感染120 h的累计死亡率为20%;而35℃组试验罗非鱼在感染24 h后累计死亡率就达到13.3%,在感染120 h后累计死亡率达到53.3%。各组织中,HSP70基因的表达随时间的延长呈先升高后降低的趋势,鳃中24 h的表达量为最高,鱼脾、肠和肝中48 h的表达量为最高。说明水温35℃组无乳链球菌感染的罗非鱼累计死亡率显著高于28℃组,水温28℃组和35℃组的HSP70基因的表达变化趋势一致。     

1株牦牛源A型产气荚膜梭菌的生长特性及致病性研究

为了了解青海牦牛源产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens,Cp)的生长特性及致病性,并计算其对感染小鼠的半数致死量(LD₅₀),以及观察感染小鼠各器官组织的损伤情况,试验复苏牦牛源产气荚膜梭菌ZD-01(CpA ZD-01)并配制种子液,采用振荡比浊法绘制CpA ZD-01菌株的生长曲线,并研究对数期菌液的OD₆₀₀值与稀释倍数和细菌数量的关系;测定其外毒素粗提取液OD₂₈₀值和OD₂₆₀值,计算出不同培养时间毒素蛋白含量;给小鼠腹腔注射菌液,根据小鼠死亡情况确定LD₀和LD₁₀₀,并计算LD₅₀,解剖小鼠观察牦牛源CpA ZD-01菌株对各组织器官的影响。结果表明：按照5%接种量接种菌株后,>2～10 h为对数期;菌液OD₆₀₀值(y)与稀释倍数(x)的关系式为y=-0.607lnx+1.551,R²=0.990,P<0.05;菌液OD₆₀₀     

烟酰胺对牛骨骼肌卫星细胞增殖与分化的影响

为了探究烟酰胺(NAM)对牛骨骼肌卫星细胞(BSMSCs)增殖与分化的影响,试验以体外培养的BSMSCs成肌分化模型为研究对象,用0,1,2,4,8 mmol/L烟酰胺处理BSMSCs(对照组及1,2,4,8 mmol/L烟酰胺组),采用CCK-8法筛选烟酰胺对BSMSCs作用的最适浓度,后续试验均以不添加烟酰胺作为对照组,最适浓度作为试验组,采用EdU试剂盒检测最适浓度烟酰胺对BSMSCs增殖的影响;光学显微镜下观察最适浓度烟酰胺处理的BSMSCs分化24,48,72小时时的肌管形态,采用Western-blot检测BSMSCs中肌球重链蛋白(MyHC)和肌原蛋白(MyOG)的表达水平,分析烟酰胺对BSMSCs分化的影响。结果表明：与对照组比较,BSMSCs的OD₄₅₀值随着烟酰胺浓度的上升而下降,4 mmol/L烟酰胺组OD₄₅₀值显著降低(P<0.05),8 mmol/L烟酰胺组OD₄₅₀值极显著降低(P<0.01),但8 mmol/L烟酰胺组的细胞存活率低于50%,超过药物对细胞的半数致死浓度,最终以...     

姜黄素与根皮素联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌作用研究

试验旨在研究姜黄素与根皮素联合使用对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抑菌作用。采用微量肉汤法测定亚抑菌浓度；菌落分析仪测定抑菌圈大小；酶标仪微量法测定OD₂₆₀和OD₂₈₀数值、碱性磷酸酶活力(AKP)、乳酸脱氢酶活性(LDH);SDS-PAGE凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌菌体总蛋白。结果表明：与对照组相比，15.625μg/m L姜黄素、根皮素分别作用于金黄色葡萄球菌16 h时，均显著抑制其生长；与姜黄素、根皮素单独处理组相比，15.625μg/m L姜黄素和根皮素联合作用显著抑制金黄色葡萄球菌生长；与对照组相比，姜黄素、根皮素单独与联合处理均显著增加OD₂₆₀、OD₂₈₀数值和AKP活力、降低LDH活性以及减少菌体胞内总蛋白含量。综上，姜黄素与根皮素联合使用对金黄色葡萄球菌的抑菌作用优于单独使用。     

无乳链球菌对体外培养的奶牛乳腺成纤维细胞瘦素及其受体表达的影响

为研究无乳链球菌对奶牛乳腺成纤维细胞(BMFB)瘦素(Leptin)及其长型受体(OB-Rb)表达的影响,本研究将不同浓度热灭活的无乳链球菌(0、10~5 cfu/mL、10~6 cfu/mL和10~8 cfu/mL)作用于BMFB,分别于不同作用时间采用荧光定量PCR(qPCR)方法检测Leptin及OB-Rb mRNA转录水平,western blot方法检测Leptin及OB-Rb蛋白的表达。各组总体变化规律结果显示,无乳链球菌作用BMFB后,除6 h、12 h 10~6 cfu/m L和10~8 cfu/mL作用浓度外,其余作用时间实验组Leptin mRNA的转录水平及蛋白表达量与对照组相比显著升高(p0.05);各作用时间实验组OB-Rb mRNA的转录水平及蛋白表达量与对照组相比极显著升高(p0.01)。上述研究结果表明,热灭活的无乳链球菌能够促进BMFB的Leptin及OB-Rb mRNA的转录水平和蛋白的表达,为奶牛乳腺纤维化的防治提供依据。     

饲料中添加几丁聚糖对吉富罗非鱼幼鱼生长性能、免疫调控与抗海豚链球菌感染的影响

本试验旨在探讨饲料中添加几丁聚糖对吉富罗非鱼幼鱼生长性能、免疫调控与抗海豚链球菌感染的影响。选择健康、均重为(2.97±0.02)g的吉富罗非鱼375尾,随机分为5组,每组3个重复,每个重复25尾鱼。5组试验鱼分别饲喂在基础饲料中添加0(对照)、10、20、30和40 m L/kg几丁聚糖溶液(几丁聚糖的有效浓度为0.6%)的试验饲料。饲喂63 d后,测定各组试验鱼的生长性能指标、血常规指标、血清生化指标、头肾免疫相关基因的表达量以及海豚链球菌感染192 h后的累计死亡率。结果表明:与对照组相比,饲料中添加几丁聚糖对吉富罗非鱼幼鱼的特定生长率、存活率及血清总蛋白与甘油三酯含量无显著影响(P0.05),但是添加量为10和20 m L/kg时可显著降低肝体比和血清皮质醇含量,提高血液红细胞数目、白细胞数目和血红蛋白浓度、红细胞压积以及血清溶菌酶和超氧化物歧化酶活力,促进头肾白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α和干扰素基因的表达(P0.05);同时,添加量为20 m L/kg时还可显著增加饲料效率,降低血清葡萄糖、胆固醇与低密度脂蛋白胆固醇含量,提高高密度脂蛋白胆固醇含量(P0.05)。海豚链球菌感染192 h后,10和20 m L/kg添加组的累计死亡率分别为30.06%和32.38%,显著低于对照组的51.19%与40 m L/kg添加组的77.55%(P0.05)。由此得出,饲料中添加10和20 m L/kg几丁聚糖溶液有助于降低吉富罗非鱼幼鱼的肝体比与肝脏应激,提高非特异性免疫功能。同时,20 m L/kg添加量可以有效地促进饲料利用,降低血清脂肪沉积。在实际生产中,建议在吉富罗非鱼饲料中添加10~20 m L/kg的几丁聚糖溶液(几丁聚糖的有效浓度为0.6%),以促进吉富罗非鱼健康养殖。     

三黄连合剂对罗非鱼人工感染无乳链球菌的预防作用

为了研究三黄连合剂对罗非鱼无乳链球菌病的预防作用,通过给罗非鱼投喂添加含中药复方提取物"三黄连合剂"的饲料,观察中药复方提取物对人工感染无乳链球菌罗非鱼保护作用,并以氟苯尼考作为抗生素药物对照。结果表明,给药组罗非鱼攻毒后死亡率明显小于感染不给药对照组。30 m L/kg、60 m L/kg、120 m L/kg"三黄连合剂"添加组、0.05 g/kg氟苯尼考添加组的罗非鱼死亡率分别为低于对照组的25(p0.05)、25(p0.05)、33.33(p0.01)和45.83(p0.01)个百分点;保护率分别为26.08%、34.78%、47.82%和26.08%。其中以120m L/kg添加剂量保护效果较好,30 m L/kg"三黄连合剂"保护效果与0.05 g/kg氟苯尼考相当。本试验结果说明,三黄连合剂对罗非鱼无乳链球菌病具有较好的预防效果。     

罗非鱼源无乳链球菌ScpB蛋白的表达及IgM抗体间接ELISA方法的建立

为了建立一种具有良好特异性、敏感性、重复性和准确性的,能够检测罗非鱼源无乳链球菌的ELISA方法,试验首先进行了罗非鱼源无乳链球菌ScpB基因的克隆及其蛋白的表达和纯化,然后以重组蛋白作为包被抗原、罗非鱼待测血清作为一抗、抗罗非鱼IgM单克隆抗体2C10作为二抗、羊抗鼠IgG-HRP作为三抗建立间接ELISA方法并对该方法进行条件(抗原包被质量浓度、一抗稀释度、抗原包被条件、封闭液、一抗作用时间、二抗作用时间)优化,最后确定该方法的临界值并进行特异性、敏感性、重复性和符合性试验。结果表明：纯化后的罗非鱼源无乳链球菌ScpB蛋白大小为104.6 ku,与预期大小一致,可被罗非鱼IgM抗体特异性识别;建立的IgM抗体间接ELISA方法的最佳抗原包被质量浓度为0.1μg/mL,最佳一抗稀释度为1∶5,最佳抗原包被条件为4℃、12 h,最佳封闭液为5%脱脂乳,最佳一抗作用时间为2 h,最佳二抗作用时间为0.5 h;临界值上限为0.456,临界值下限为0.377;批内变异系数为3.349%～5.272%,批间变异系数为2.793%～5.902%,均低于10.000%;仅可检测出罗非鱼无乳链球菌阳...     

水温对吉富罗非鱼人工注射无乳链球菌部分生物学指标的影响

为揭示高温条件与吉富罗非鱼对无乳链球菌的抵抗力的关系,观察了不同温度对吉富罗非鱼部分生物学指标(超氧化物歧化酶,溶菌酶,碱性磷酸酶和补体C3)的影响。结果显示,在高温(34℃)条件下,吉富罗非鱼超氧化物歧化酶活性呈现先诱导后抑制的趋势;碱性磷酸酶活性在12h达到最高,显著高于31℃感染组B2(P0.05),在感染链球菌后24、36h,34℃条件下的B3组罗非鱼血清溶菌酶活力分别显著低于对照组B2(P0.05)25.88%和28.75%;感染后12、36h,补体C3活性分别显著低于对照组A3(P0.05)53.22%和36.19%。结果表明,高温降低了吉富罗非鱼的抵抗力,使鱼体对病原菌易感性增强。     

透射电镜观察口服无乳链球菌弱毒苗对罗非鱼肠道免疫相关细胞的影响

为了对比观察链球菌弱毒苗使用前后罗非鱼肠道免疫相关细胞超微结构的变化,探讨无乳链球菌弱毒苗对罗非鱼黏膜免疫的影响,试验采用体重为(100±10)g,体长为(15±2)cm的健康罗非鱼共30尾,随机分为对照组和试验组,每组15尾,试验组投喂浓度为1.0×109cfu/m L的口服型无乳链球菌GX035弱毒苗,对照组投喂等量未添加疫苗的饲料,免疫后15 d,对前肠、中肠、后肠的超微结构进行常规透射电镜观察。结果表明:与对照组相比,试验组各肠段杯状细胞内黏液分泌泡明显增多,呈分泌旺盛状态;巨噬细胞、浆细胞、肥大细胞等增多,超微结构有变化,呈现功能活跃状态。说明口服无乳链球菌弱毒疫苗可以提高罗非鱼肠道黏膜免疫。     

As2O3对大鼠BRL-3A和RH-35细胞TRβ1和Cyclin D1因子的影响

为了探明As₂O₃对大鼠肝脏细胞系BRL-3A和肝癌细胞系RH-35中TH信号通路的关键调控因子TRβ1和TRβ1的下游因子Cyclin D1的影响，采用qRT-PCR、Western blot技术检测2种细胞中TRβ1和Cyclin D1的基因和蛋白表达变化。结果显示：(1)与对照组相比，As₂O₃作用BRL-3A细胞12 h, 1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达显著降低(P<0.01)、Cyclin D1表达显著升高(P<0.01);6.250μmol/L组TRβ1表达明显降低(P<0.05)、Cyclin D1表达显著降低(P<0.01)。As₂O₃作用24 h, 1.563μmol/L组TRβ1蛋白表达明显升高(P<0.05);6.250μmol/L组TRβ1显著升高(P<0.01),Cyclin D1的表达显著降低(P<0.01)。As₂O₃作用48 h,...     

添加植物乳杆菌、布氏乳杆菌对杂交狼尾草青贮发酵品质及有氧稳定性的影响

为探究植物乳杆菌、布氏乳杆菌对杂交狼尾草(Pennisetum glaucum×purpureum)青贮发酵品质及有氧稳定性的影响，本试验以杂交狼尾草为试验材料，设置对照组(CK组，无添加)、植物乳杆菌(Lactiplantibacillus plantarum)组(LP组，1×10⁶ cfu·g^-1 FW)、布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)组(LB组，1×10⁶ cfu·g^-1FW)、植物乳杆菌和布氏乳杆菌组(LPLB组，5×10⁵ cfu·g^-1 FW LP+5×10⁵ cfu·g^-1 FW LB),厌氧发酵60天(d)后，测定其营养成分、发酵品质和有氧稳定性。结果表明：与CK组相比，各处理组粗蛋白(CP)、乳酸(LA)和乙酸(AA)含量显著增加(P<0.05),pH值和丁酸(BA)含量显著下降(P<0.05);在有氧暴露阶段，各处理组乳酸(LA)含量显著增加(P<...     

三黄连散对罗非鱼人工感染无乳链球菌的保护作用

试验选用高剂量(26.40 g/kg)、中剂量(13.20 g/kg)和低剂量(6.60 g/kg)的三黄连散饲喂人工感染无乳链球菌的罗非鱼,观察并记录其临床症状和死亡率,旨在明确三黄连散对罗非鱼人工感染无乳链球菌的预防作用。结果显示,高剂量和中剂量的三黄连散保护率分别为77.77%和55.55%,且与市售三黄散相比,效果较稳定。研究表明,三黄连散对罗非鱼无乳链球菌的预防作用较好。     

不同剂量三黄连散对罗非鱼感染无乳链球菌防治效果的试验研究

试验旨在从临床症状、疗效评价、死亡率和保护率等方面探索三黄连散对罗非鱼感染无乳链球菌预防效果的量效关系并据此进行剂量筛选。将210尾罗非鱼随机分为7组（即1.67 g/kg剂量组、3.30 g/kg剂量组、6.60 g/kg剂量组、13.20 g/kg剂量组、26.40 g/kg剂量组、无乳链球菌感染对照组和空白对照组）,每组30尾鱼。各剂量试验组饲喂含不同剂量三黄连散的饲料,无乳链球菌感染对照组和空白对照组投喂基础饲料,并于第8天,各剂量试验组和感染组腹腔注射浓度为5.40×107CFU/mL的无乳链球菌菌液,空白对照组腹腔注射灭菌生理盐水。结果表明：攻毒后12 h,感染对照组和剂量组都出现了明显的临床症状并伴随急性死亡。感染对照组的临床症状始终保持较高分值,不同剂量药物组评分均低于感染对照组,13.20 g/kg剂量组和26.40 g/kg剂量组评分呈现出平稳且下降的趋势。无乳链球菌感染对照组的罗非鱼死亡率为73.33%,1.67 g/kg剂量组、3.30 g/kg剂量组和6.60 g/kg剂量组死亡率与感染对照组比较差异不显著（P>0.05）;而13.20 g/kg和26....     

藏绵羊低氧适应的血液生理指标特征研究

藏绵羊对青藏高原的自然环境具有良好的适应能力，是高原家畜低氧适应研究的最佳动物。本研究选择欧拉型藏绵羊(海拔约4 000 m)和湖羊(海拔约100 m)的12项血液生理指标进行比较分析，结果显示：藏绵羊HGB(117.59±0.557 g/L)、HCT(62.26±0.583%)值极显著高于湖羊(P<0.01),而PO₂(34.56±0.499 Pa)、SO₂(64.14±0.571%)值极显著低于湖羊(P<0.01);在血液酸碱和电解质指标中，藏绵羊的PCO₂、HCO₃^-、TCO₂、BE值极显著低于湖羊(P<0.01),Ca²⁺高于湖羊(P<0.05),pH、Na⁺和K⁺3项指标在两品种间无差异(P>0.05)。结果表明，与氧气运输相关指标的HGB和HCT值均为高海拔环境的藏绵羊高于低海拔生活环境的湖羊，藏绵羊低氧适应的主要生理表征是较高的血红蛋白浓度，而红细...     

体外产气法研究不同饲粮中性洗涤纤维水平对瘤胃发酵参数的影响

试验采用体外产气法研究不同日粮30 h中性洗涤纤维(d NDF30)水平对反刍动物瘤胃发酵的影响。在等能等氮(蛋白含量为16.5%)与中性洗涤纤维(NDF)水平为32%下分别配制d NDF30水平为16.4%、17.9%、19.4%、20.9%、22.4%、23.9%、25.4%和26.9%的日粮为发酵底物，分别为T₁组～T₈组，每组8个重复。结果显示，体外发酵24 h,T₁组的产气量(GP)显著低于其他各组(P<0.05)。体外发酵48 h,T₅组、T₆组、T₇组、T₈组GP显著高于其他处理组(P<0.05)。T₈组的体外干物质消失率(IVDMD)最高，显著高于T₁组、T₂组、T₃组、T₄组(P<0.05)。T₈组p H值显著低于其他各组(P<0.05)。T₁     

裸花紫珠颗粒对罗非鱼源无乳链球菌体外抑菌活性研究

无乳链球菌是导致罗非鱼链球菌病的主要病原菌。为探讨裸花紫珠颗粒对无乳链球菌体外抑菌活性，采用肉汤二倍稀释法测定裸花紫珠颗粒对无乳链球菌的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),同时进行标准无乳链球菌和临床分离无乳链球菌对常用抗菌药的敏感性试验。结果表明，裸花紫珠颗粒对罗非鱼源无乳链球菌的最低抑菌浓度(MIC)为10.000 mg/mL,最小杀菌浓度(MBC)为20.000 mg/mL;药敏试验结果显示临床分离株无乳链球菌对四环素、环丙沙星、氟苯尼考的敏感性降低。该结果为下一步开展裸花紫珠对罗非鱼临床保护试验研究奠定了基础。     

高产γ-氨基丁酸益生菌的筛选

为了筛选得到高产γ-氨基丁酸(Gamma-aminobutyric acid, GABA)菌株，本试验以从云南不同地区食品中分离出的27株菌为材料，通过菌株复壮、革兰氏染色形态学观察、过氧化氢酶实验、单菌株发酵及高效液相色谱法检测GABA，筛选其中高产菌株进行种属鉴定并测定其发酵性能。结果表明，27株菌中筛选得到的LSR-L-L4为高产GABA菌株，其发酵液中GABA检测值为490.59 mg/L；经16S rDNA基因序列分析鉴定其为德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus)，最适发酵温度为42℃；3～12代菌株凝乳时间4.5～5h，酸度52～56°T,120h极限酸度118～122°T；生长曲线稳定期OD₆₀₀=1.01～1.11,24h未见衰退；活菌数1.20×10⁹～1.50×10⁹cfu/mL；双乙酰含量10.32～11.50 mg/L;γ-氨基丁酸产值467.58～490.59 mg/L。LSRL-L4高产γ-氨基丁酸，兼具优质发酵特性，为...     

肝螺杆菌感染促进四氯化碳导致的BALB/c小鼠肝纤维化研究

为探讨肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,H.h)感染对四氯化碳(CCl₄)致BALB/c小鼠肝纤维化病程的影响,选取5～6周龄雄性BALB/c小鼠40只,随机分为4组(对照组、H.h组、CCl₄组、H.h+CCl₄组)。H.h和CCl₄组分别采用灌胃法和腹腔注射法处理,分别于H.h感染后4和12周进行采样,检测各组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,分别采用HE染色、天狼猩红染色、免疫组化法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测小鼠肝脏纤维化情况。结果显示：处理4周时,CCl₄组和H.h+CCl₄组小鼠出现轻度肝纤维化,其他组未见明显病变;处理12周时,与H.h组相比,H.h+CCl₄组小鼠肝脏中H.h活菌量显著升高(P>0.01),血清中ALT和AST均显著升高(P>0.01),肝脏中大量胶原纤维沉积,炎症和纤维化相关因子转录水平显著升高(P>0.01...     

泰妙菌素对人CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6酶活性的影响

本研究通过建立人肝微粒体体外孵育试验，考察泰妙菌素对4种CYP450亚酶的探针底物睾酮、非那西丁、氯唑沙宗、氢溴酸右美沙芬代谢的影响，以反映泰妙菌素对人CYP3A4、CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6酶活性的作用。试验分为3组：药物试验组、阳性对照组（不含NADPH）、阴性对照组（不含CYP450抑制剂），孵育体系为100 μL，孵育试验在96孔板中进行。终止反应后使用高效液相色谱串联质谱仪（LC-MS/MS），以内标法检测96孔板中孵育液的剩余探针底物浓度。根据药物试验组与阴性对照组的探针药物代谢浓度之比，计算药物试验组的探针药物代谢率。使用Graphpad Prism 6.0软件，以药物试验组相对代谢率为纵坐标，药物浓度对数值为横坐标作图，计算试验组药物IC₅₀值。针对泰妙菌素与CYP3A4的孵育试验设置多个孵育时间点观察孵育时间对IC₅₀值的影响。试验结果显示，酮康唑对CYP3A4的IC₅₀值为0.044 μmol/L，α-萘黄酮对CYP1A2的IC₅₀值为0.030 μmol/L、4-甲基吡唑对CYP2E1的IC₅₀值为0.022 μmol/L、奎尼丁对CYP2D6的IC₅₀值为0.096 μmol/L。泰妙菌素对CYP1A2及CYP2D6的IC₅₀值均大于50 μmol/L，对CYP2E1的IC₅₀值为0.045 μmol/L，对CYP3A4的IC₅₀值为1.609 μmol/L。延长泰妙菌素与CYP3A4的孵育时间（10~50 min）后，泰妙菌素对CYP3A4的IC₅₀值由1.609 μmol/L增加至 8.657 μmol/L。本研究中4种亚酶常用抑制剂的IC₅₀值与参照值相近，表明所建立人肝微粒体体外孵育试验方法可靠。以IC₅₀值为指标显示泰妙菌素对CYP1A2和CYP2D6无抑制作用，对CYP2E1和CYP3A4存在强抑制作用，泰妙菌素可能是CYP3A4的可逆性抑制剂。