下河蜜柚RAPD反应体系的建立

利用改良的CTAB方法从柚叶片中提取高质量的DNA。在参考一般RAPD反应程序的基础上,经过反复试验,确定适合柚PCR扩增程序为:模板DNA15ng,随机引物3.3ng/ul,10*PCR buffer 1ul,dNTP 0.5ul,TaqDNA聚合酶0.25ul(1U),总体积10ul。95℃预热2min,94℃变性30s,35.1℃退火45s,72℃延伸45s,30个循环后72℃延伸8min。     

人参基因组RAPD条件的优化

目的确定药用人参最佳随机扩增多态DNA(RAPD)分析方法。方法以药用人参新鲜叶为材料,研究对影响RAPD反应的各因素进行优化。结果药用人参RAPD反应体系及程序为:在25μL反应体系中,含40ng模板DNA,0.3μmol/L随机引物,0.2mmol/LdNTPs,2.5μL10×PCRBuffer,2.0UTaq酶;扩增程序为:第一步94℃预变性2min,第二步94℃变性1min,第三步36℃退火45s,第四步72℃延伸90s,返回至第二步重复40个循环,第六步72℃延伸10min,最后4℃保存以备电泳。结论建立了人参RAPD的优化反应体系及程序。     

剑麻DNA高效提取及RAPD反应体系优化

针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点．对其基因组DNA提取方法进行研究。比较了SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果分析表明：CTAB法提取效果较佳,A260/A280为1．8左右,A260/A230大于2．0,电泳检测基因组DNA纯度和完整性较好。后基于基因组DNA水平,对RAPD反应体系中镁离子浓度、dNTP浓度和退火温度三个重要的影响因子进行优化,得出在25μl反应液中,Mg^2＋浓度为2．0mmol·L^-1,酶为1．0U,引物为0．1μmol·L^-1,dNTP为0．2mmol·L^-1．37℃退火温度扩增40个循环效果较佳。     

花生RAPD反应条件的研究

在ＲＡＰＤ反应中,有许多因素影响结果的稳定性和准确性,本文以花生为材料,对ＲＡＰＤ各种反应条件的优化组合进行了探索。结果表明,花生ＲＡＰＤ的较为理想的反应体系如下,１０μｌ反应体积中含;５０ｍｍｏｌ／Ｌ ＫＣｌ,１０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ９．０）,０．１％Ｔｒｉｔｏｎ－１００,２０￣４０ｎｇ引物,０．２ｎｍｏｌ／μｌ的ｄＮＴＰｓ,１￣２μｇ／μｌ的ＢＳＡ,１５ｎｍｏｌ／μｌＭｇＣｌ２０     

叉唇虾脊兰 RAPD 反应体系的优化

以叉唇虾脊兰的幼嫩叶片为试验材料,通过正交试验及单因素逐项优化法对RAPD反应体系进行优化.结果得出较理想的RAPD-PCR扩增条件为:20μl体系, DNA1.5μl(约30 ng)、Taq酶0.30μl(1.0 U)、E× Buffer 2μl、dNTP 0.8μl(0.20μmol/L)、引物1.0μl(0.25μmol/L),ddH2O补至20μl,退火温度38℃.从而为进一步研究虾脊兰属植物的遗传多样性奠定了基础     

假臭草DNA提取及RAPD反应体系的优化

以假臭草叶片为材料,对影响其随机扩增多态DNA(RAPD)反应的各因素进行优化,建立了假臭草RAPD的优化反应体系和程序,即在10 μL反应体系中,5 ng(/10 μL)模板DNA,1.0 μmol/L随机引物F15,150 μmol/L dNTPs,2.0 mmol/L Mg2+,1.0 U Taq DNA聚合酶;扩增程序为95℃预变性4 min,95℃变性40 s,36℃退火40 s,72℃延伸1 min,10个循环,后94℃变性30 s,35℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环,72℃     

棉花基因组DNA的提取及RAPD反应组成优化探讨

针对棉花富含棉酚、多糖、单宁、蛋白质等干扰物质的特点 ,主要通过快速研磨、加入 PVP、挑DNA、不加 RNA酶等方法 ,摸索出一条方便、快捷、产率高、适合棉花基因组 DNA提取的方法。另外 ,本文还探讨了模板浓度、Mg2 、d NTPs、Taq酶等因素对 PCR的影响 ,得到棉花 RAPD分析最佳PCR反应组成为 :60 ng模板 DNA、1 .2 mmo1·L-1Mg2 、0 .2 mmo1· L-1d NTPs、1单位 Taq酶 ,反应体积为 2 0μl。     

小麦RAPD分析中温度循环参数的优化

为了解决小麦材料RAPD分析中的重复性差，多态性低等问题，对反应中的温度循环参数进行了优化研究。通过比较不同变性时间，复性温度和升温速度等的扩增效果，设计出了适于小麦RAPD分析的PCR程序：94℃预变性5min；开始的5个循环为94℃1min,38℃1min,0.3℃/s升温，72℃2min;后40个循环为94℃10s，38℃1min,0.3℃／s升温，72℃2min,最后72℃5min。在后40个循环中用1－2s的变性时间，则能够有目的地扩增600bp左右及以下片段。利用该程序，每条引物检测的位点数平均达17．6个左右，高于一般报道的1－10个，该程序在小麦遗传多样性研究，分了标记鉴定等方面有较高的实用价值。     

茶树RAPD反应系统和扩增程序优化

以龙井43为材料,使用国产PCR仪,对茶树RAPD分析中影响PCR扩增结果的因素进行了研究,确定了茶树RAPD的最适反应系统和扩增程序,即在25μl反应体系中,含25～50ng模板DNA、2mmol／LMgCl2、各0．2mmo／LdNTPs、0．2μmol／L引物和0．5～1．0UTanDNA聚合酶;扩增程序为：94℃预变性180s,94℃变性60s,38℃退火90s,72℃延伸120s,共进行40～45个循环,最后72℃延伸300～600s,这样可以取得较好的扩增结果。     

高粱DNA提取纯化方法的比较及RAPD反应条件的建立与优化

以高粱叶片为试材，采用4种方法提取DNA，并对这4种方法进行比较，选择高粱DNA提取纯化的最佳方法，同时对高粱RAPD反应条件进行研究，从而建立了一个适合高粱RAPD分析的最佳反应系统。     

简单实用的分子标记技术——随机扩增多态性DNA（RAPD）

近几年来,ＲＡＰＤ技术在植物遗传基础的应用研究中取得了很大的进展。通过对ＲＡＰＤ分子标记技术的发展状况,技术特点,应用现状的介绍,揭示了ＲＡＰＤ在农业研究中的巨大应用潜力。     

影响小麦RAPD稳定性的试验技术研究

随着PCR和PAPD技术在生物学业领域的广泛应用，人们在实验中遇到的问题也越来越多，其中PAPD的可重复性差是最主要的一个问题，也是该技术最难克服的特点。作者在利用RAPD技术标记进行小麦的抗病毒基因研究中，对影响扩增结果的模板、底物、引物和扩增程序等进行了实验探索，结果表明：模板的浓度、dNRP浓度、引物浓度及反应程序均对RAPD扩增结果有明显影响。     

马铃薯RAPD标记的PCR技术影响因素的探讨

试验采用不同的马铃薯材料进行ＰＣＲ 技术体系的研究, 建立和完善了马铃薯少量材料的ＤＮＡ提取方法, 研究了ＰＣＲ扩增中Ｍｇ２ ＋ 浓度、引物和底物浓度对ＰＣＲ产物的影响。试验结果表明, 在以引物为１０ ｍｅｒ 的ＰＣＲ反应体系中, 适当提高Ｍｇ２ ＋ 浓度（１－５ ～２－７ ｍＭ） 有利于ＰＣＲ反应的进行, 而引物与底物只有在一个相对适当浓度范围内才能获得理想的结果, 过低会使扩增产物达不到可检测的水平, 过高则会影响扩增产物的特异性。本试验中引物的适宜浓度为０－８ μＭ, 底物为８０ ～１８０ μＭ。所建立的优化马铃薯ＰＣＲ 体系同样适用于水稻、玉米、番茄和油菜等作物。     

十里香茶基因组DNA高效提取与RAPD方法建立

本文以嫩芽和鲜叶为材料,建立了十里香茶高效、微量基因组DNA提取方法,提取的DNAOD260/280在1.7～2.0之间,DNA产率在81.8～483.5 ng/mg之间,能够满足RPAD的需要。同时建立了十里香茶RAPD分子标记方法,25μL PCR反应体系中包含:50 ng DNA模板,1.2μL引物,2.5μL 10×PCR Buffer,2.5μL 25 mMMgCl2,2μL 10 mM dNTP,14.8μL ddH2 O1,U Taq聚合酶。PCR扩增程序为94℃预变性3 min,94℃变性1 min,36℃退火1 min 20 s,72℃延伸2 min4,0个循环后72℃延伸10 min。15个RAPD随机引物以十里香1号DNA为模板,分别扩增出1～7条带。     

咖啡ISSR与RAPD-PCR反应体系优化

以中粒种咖啡部分种质为试材,采用U25（55）均匀设计表,对影响ISSR和RAPD标记的模板DNA、Mg2+、dNTPs、TaqDNA聚合酶和引物浓度5个因素进行优化,分别建立适合于中粒种咖啡ISSR-PCR和RAPD-PCR标记的反应体系。结果表明：2种标记的反应体系相似,20 μL的反应体系中含DNA模板20 ng,Mg2+ 1.5 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,Taq酶1.25 U,引物0.6 μmol/L。利用所确立的体系对13份中粒种咖啡种质进行扩增,结果条带清晰明亮,多态性好     

菰SRAP-PCR反应体系的优化与建立

利用单因素分析法对影响菰SRAP-PCR扩增效果的Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、DNA模板和引物浓度5种因素进行了优化。结果表明:建立了适合菰基因组的SRAP-PCR的体系:1μL 10×Buffer、0.5 U Taq DNA聚合酶、2 mmol/L MgCl2、50 ng模板DNA、0.20 mmol/L dNTPs、正反向引物的浓度各为0.7μmol/L,共10μL。选取5对引物,利用该体系对72份菰样本进行PCR扩增,共获得132条清晰的谱带,其中91条具有多态性,比率为68.9%。菰SRAP-PCR反应体系的优化和建立将为利用该标记进行种质遗传多样性分析和连锁图谱构建等研究提供技术支持。     

苎麻属植物RAPD反应体系影响因子的研究

以苎麻属植物中的4个种为材料，用SDS和CTAB2种方法提取基因组DNA并比较其RAPD分析的效果；对RAPD反应体系中的一些重要参数进行了优化，建立了适合苎麻属植物RAPD分析的反应体系。即在25μL的反应总体积中Mg^2 浓度为1.5mmol/L，dNTPs浓度为0.20mmol/L，40ng模板DNA，Taq酶1.0单位；反应程序为95℃预变性5min；前5个循环为94℃变性1min，36℃结合1min，72℃延伸2min；后40个循环为94℃30s，℃36℃1min，72℃2min（最后1个循环为10min）；共45个循环。该反应体系具有良好的稳定性和重复性。     

瓜尔豆品种RAPD指纹分析优化方法

瓜尔豆是一种短日喜温作物,具有较高的经济价值。对生产上引种的10个瓜尔豆品种进行RAPD指纹分析,揭示出瓜尔豆品种的遗传多样性,指纹聚类分析与依品种的田间生长发育等生物特性归类结果相吻合。10个瓜尔豆品种可分为三大类,G1、G3、G2、G10为一类;G4、G6、G9为一类;G7、G8、G5为一类。     

亚麻抗白粉病RAPD标记的引物筛选与反应体系的建立

本研究对亚麻RAPD反应条件进行了优化,并利用240个随机引物,以亚麻抗病品系9801-1和感病品种DIANE杂交得到F2代分离群体构建的DNA混合池为模板进行RAPD分析.经过三轮的筛选,结果只有OPP02引物能在亲本和抗感混合池间扩增出稳定的多态性,命名为OPP02792.     

小麦显性多子房基因RAPD反应体系的研究

为了建立显性多子房小麦RAPD反应的最佳体系,保证反应结果的稳定性和可靠性,降低反应成本,在相同PCR扩增程序(94℃预变性5min,94℃变性1min,36℃退火1min,72℃延伸2min,45个循环,72℃延伸10min,4℃保存)下,对多子房小麦基因组DNA的RAPD扩增体系各参数进行比较筛选,创建其最佳反应体系为:25μl反应体系中,模板DNA50ng,10×PCR缓冲液2.5μl,dNTPs0.2mmol/L,Taq酶1u,Mg2+浓度为2.0mmol/L,ddH2O12.17μl,随机引物10ng。