高质量的小麦种子总RNA的快速提取方法

提取高质量的RNA是从基因表达水平上研究小麦种子发育的必要条件。现有提取方法难以快速得到高纯度的小麦种子总RNA。本试验将冷酚法和Trizol一步法相结合,在5h左右就可得到高质量的总RNA。通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计检测,提取的总RNA具有清晰的28S rRNA、18S rRNA条带,OD260/DO280比值在1．90-2．00之间。将提取的总RNA用于反转录,可获得高质量的cDNA,在cDNA—AFLP分析上可得到清晰的条带。说明这种方法获得的总RNA纯度和完整度非常高,完全满足分子生物学研究的要求。     

一种快速高质量植物总RNA提取方法介绍

植物总RNA的提取方法很多，但是多数步骤烦琐，耗时较长，而且最后RNA的提取质量不高。采用Trizol法虽然所提RNA的质量较高，但是价格昂贵。本实验室在长期实践中摸索出一套快速高质量的植物总RNA的提取方法，现介绍如下：[第一段]     

一种植物总RNA的快速提取方法

为验证NaAc/无水乙醇沉淀法提取植物总RNA的质量,本研究对小麦不同组织及其他不同种属植物花的总RNA进行提取和检验,结果表明,该方法提取的植物总RNA完整性好、纯度高。以Tubulin为参照对其余4个持家基因GAPDH、Actin、Rubisco和Ubiquitin的表达情况进行分析。扩增结果表明,选定的各持家基因在叶锈菌侵染不同时间的小麦叶片中的表达量并不一致,且各基因在小麦叶片中的丰度也存在差异。通过对几种基因的扩增,进一步证实该方法能够满足一般分子生物学下游操作的要求,是一种理想的植物总RNA提取方法。     

改良Trizol法快速高效提取香石竹总RNA

因为多糖等大分子的污染,传统Trizol法难以从香石竹的叶片中获得完整RNA。本研究以香石竹为材料,对传统的Trizol法进行改良,成功地从香石竹花瓣和叶片中提取了总RNA,经琼脂糖电泳,紫外分光光度计测定总RNA完整性好,纯度大,花瓣的OD260/OD280=1.96,每0.1g花瓣可获得RNA61μg,叶片RNA的OD260/OD280=1.94,每0.1g幼叶可获得RNA33μg,花瓣的RNA产量普遍高于叶片。经改良Trizol法提取的被香石竹斑驳病毒侵染的植株的花瓣和叶片的总RNA,经RT-PCR获得了特异性条带,说明用改良Trizol法从香石竹花瓣和叶片中提取的RNA质量好、产率高、完整性强,完全适合于香石竹进一步的分子生物学研究。     

棉花组织总RNA的快速提取方法

棉花组织富含多糖、棉酚等次生代谢物质，较难提取高质量的RNA。本研究在前人方法的基础上对快速提取棉花组织总RNA的方法进行了探讨。利用改进的CTAB异硫氰酸胍裂解缓冲液，获得的RNA完整性好，无DNA污染，含量高，每克鲜组织能提取0．5mg总RNA，OD260／OD280比值均在1．7～2．0之间。该方法不但适用于叶片提取总RNA，而且在根、花冠、种子、发育的纤维中均能提取出高质量的RNA，同时节约成本，相对于试剂盒提取RNA，成本大为降低。     

高粱总RNA的提取

介绍一种高粱总RNA的提取方法。该方法以CTAB为主要提取试剂,成功地提取出了高粱叶片的总RNA。获得的RNA条带清晰,A260/A280在1.8~2.0。这些结果表明提取的总RNA质量好,完整性好,可用于cDNA文库的构建、差异表达等工作。     

一种快速提取盐桦叶片总RNA的方法建立

从植物组织中提取高质量的RNA是进行植物分子生物学研究的必要前提和关键。盐桦细胞中存在大量的胶质和多糖类物质，用Trizol试剂根本不能获得RNA。本研究采用CTAB-LiCl法，提出了一种适合盐桦叶片总RNA的简单快速提取方法。消除了蛋白质、DNA、多糖、多酚等污染。该方法提取的盐桦叶片总RNA，完整性好、纯度高，可用于RT-PCR等实验操作，此法无需特殊试剂和贵重仪器，实验结果稳定，重复性好，适合富含多糖和脂质的植物组织总RNA的提取。     

改良CTAB法提取不同作物总RNA技术研究

为提高操作效率,本研究开发出一种简洁有效的作物总RNA提取方法。研究以油菜、棉花、花生、小麦、马铃薯、玉米、大豆、西葫芦等作物的不同组织为试材,通过CTAB法、改良CTAB法及TanSzol Reagent试剂盒法提取总RNA,检测结果发现,经过改良后的CTAB法提取的总RNA质量较高。在油菜花瓣、小麦、花生、西葫芦叶片中,该方法获得了较高的总RNA得率,分别为24.5、23.7、26.4、17.35μg/mL;OD₂₆₀/₂₈₀和OD₂₆₀/₂₃₀值分别为1.90、1.73、1.72、1.80和2.10、1.50、2.01、1.70。综合比较以上3种方法,改良后的CTAB法适用于油菜、小麦、花生、西葫芦等作物的总RNA提取,为后续分子生物学检测奠定了基础。     

棉花高质量总RNA提取的一种有效方法

棉花抗病虫基因工程和纤维品质改良一直是国内外研究的热点之一,近年来许多实验室又开展了棉花功能基因组学研究,在这些研究中都需要提取高质量的RNA,但目前广为使用的TriZol reagent kit和异硫氰酸胍-酚-氯仿一步提取法从棉花中难以纯化出完整的RNA,尽管许多学者针对棉花也发展出了几种有效的方法,但是这些方法一般都费工、     

甜瓜cDNA-AFLP分析体系的建立

选用新疆甜瓜伽师和皇后为试材,研究了影响cDNA-AFLP反应体系的几个关键因素,建立了适合于甜瓜的cDNAAFLP反应体系.结果表明:适用于甜瓜cDNA-AFLP分析的RNA可以用Trizol试剂提取的总RNA,双链cDNA合成应用置换法,双链酶切用Vsp Ⅰ、Taq Ⅰ和EcoR 、Mse Ⅰ,效果均能达到目标.相比较而言,Vsp Ⅰ、Taq Ⅰ酶切组合更为理想.酶切cDNA用量、连接产物、预扩增产物稀释倍数参照常规AFLP技术中的常用即可满足要求.检测采用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染显色,操作较文献介绍的变性胶方法简单、方便.实验得到了较为理想的甜瓜mRNA指纹图谱,建立的反应体系可以应用于甜瓜差异基因表达分析等方面的研究.     

甜瓜抗病基因的研究进展及其应用前景

甜瓜是世界各地都广泛栽培的重要经济作物,其营养丰富味道美好而备受人们的喜爱。随着甜瓜种质资源商品化,甜瓜病虫害扩散蔓延迅速,已成为影响甜瓜产量和品质的主要因素。本文概述了对甜瓜生产和品质危害较严重的主要病虫害的发病特征、蔓延情况及相应抗性基因的研究进展,目前已有50个甜瓜抗病基因被认知。另外对与抗病性状相关基因的定位、分子标记、分离克隆、甜瓜基因遗传图谱等研究现状进行了总结分析,综合阐述了甜瓜抗病基因在实践中的使用价值和应用前景：利用甜瓜抗病基因的分子标记进行甜瓜抗病育种辅助选择,将抗病基因转化感病品种进行抗病分子育种。     

甜瓜风味物质的研究进展

本文综述了目前国内外甜瓜风味物质的研究进展,以期为甜瓜的栽培、育种及其在食品工业中的应用提供理论依据和参考。     

影响农杆菌介导甜瓜子叶遗传转化的因素

以甜瓜子叶作为根癌农杆菌介导转化的受体,通过GUS基因瞬时表达率的分析,研究此转化体系的最佳实验参数.实验结果表明,预培养时间、预培养后对外植体进行处理、感染时间、共培养时间、农杆菌工程菌的浓度等对转化效率都有一定的影响,但是根癌农杆菌诱导物AS并不能大幅度提高转化效果.对外植体进行重新处理,预培养2 d,用OD560为0.3的农杆菌工程菌感染15～25 min,共培养3～4 d的理想条件下,GUS瞬时表达率可达85%.     

直接扩增甜瓜小卫星DNA指纹图谱

以小卫星DNA YNZ22核心序列为引物,甜瓜DNA为模板,在甜瓜上研究了直接扩增小卫星DNA(DAMD)的优化反应体系,结果表明:在20μL的反应体系中,5种主要成分Taq DNA聚合酶、Mg2 、引物、模板DNA和dNTPs的最适浓度分别为1U,2.5 mmol/L,0.5 mmol/L,30 ng,5 mmol/L。在优化的DAMD-PCR反应体系下,利用该引物在28个甜瓜品种上构建了直接扩增小卫星DNA(DAMD)的指纹图谱,分析结果表明,该引物在28个甜瓜品种上共扩增出13位点,其中9位点具有多态性,多态性条带比率为69%,可一次性从28个甜瓜品种中鉴别出其中的21个,鉴别率高达75%。     

“仙果”哈密瓜晒瓜处理后贮藏及生理特性的研究

以沪产"仙果"哈密瓜为试材,进行采前晒瓜处理,研究在温度3,5,8℃和常温贮藏条件下,哈密瓜采后贮藏期间果实生理代谢的变化。结果表明,晒瓜处理后低温贮藏,能有效地降低哈密瓜果实的腐烂,抑制了总酸、总糖、可溶性固形物含量和果实硬度的下降,显著延长哈密瓜的贮藏时间。以糖、酸含量和果实硬度、腐烂率为评价指标,确定5℃为"仙果"的适宜贮藏温度。     

甜瓜作图亲本相关序列扩增的多态性分析

以中国甜瓜地方品种自交系4G21(香瓜)和3A832(哈密瓜)为作图亲本,利用SRAP(Se-quence-relatedAmplifiedPolymorphism)分析了甜瓜作图亲本的多态性,结果表明:在184个SRAP引物组合中有176个扩增出多态性条带,不同引物组合扩增的多态性条带的变异幅度在1～15之间,共扩增出614个,平均每个引物组合扩增出3.34个,说明SRAP标记揭示甜瓜作图亲本多态性的效率很高。     

甜瓜种子醇溶蛋白的反相HPLC分析鉴定

针对目前国内甜瓜的主栽品种K96-8×6-1、T-5Xred1-28和94×8-1的自交系及杂交种种子醇溶贮藏蛋白进行反相HPLC法分离。结果表明其色谱图明显不同,可以用于该品种（系）的鉴定,认为RP-HPLC技术是一种快速、准确、可信的甜瓜品种鉴定手段。     

Fertility and pollen tube growth in polyploid melons (Cucumis melo L.)

The high sterility of tetraploid melon (Cucumis melo L.) plants is a serious inconvenient to obtain economically useful polyploid lines. In order to study the alterations on diploid pollen tube growth and their influence on sterility, in vitro and in vivo pollen tube growth from three commercial varieties and its tetraploids was observed. Polyploid pollen grains show a lower germination percentage in vitro and a slower germination rate than haploid pollen. Furthermore, diploid pollen grains producing two or three tubes and tube branchings were observed on diploid pollen; this seems to indicate a decrease in its functionality. In vivo and in vitro pollen behaviours are quite similar, but an interaction between the pollen and the pistillar tissues was detected in vivo. In the diploid × tetraploid cross, where fruits were not obtained, pollen tubes showed a slow growth rate at the base of the pistil. The possible effects of these alterations in sterility are discussed in terms of the factors that could affect fecundation. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.     

Inheritance of resistance to systemic symptom expression of Melon necrotic spot virus (MNSV) in Cucumis melo L. `Doublon'

In melon (Cucumis melo L.) a resistance mechanism to Melon necrotic spot virus (MNSV) controlled by a single recessive gene called nsv has been reported. We found that following mechanical inoculation of the virus C. melo cv. ‘Doublon’ shows only local reaction, but it does not develop any systemic symptom and the virus only can be recovered from the local lesions. This reaction could be considered as a new source of resistance to MNSV. In this work,the genetic control of this behaviour in the progenies from the cross ‘Doublon’ × ‘ANC-42’ (a susceptible line) is studied. We report two complete dominant genes, which we propose to call Melon necrotic resistance 1 (Mnr1) andMelon necrotic resistance 2 (Mnr2), controlling this character. The genetic linkage between one of these genes and nsv in the populations derived from the cross between ‘Doublon’ and ‘PMR-5’ (a resistant line) is also reported. The map distance between these two loci was estimated to be 19 cm. This revised version was published online in July 2006 with corrections to the Cover Date.