陕西省首次发现象耳豆根结线虫危害洛南白菜

采用形态学鉴定、特异性引物鉴定及rDNA-ITS序列分析方法,对采自陕西省洛南县白菜的根结线虫进行了种类鉴定,并结合构建系统发育树,确定了感染洛南县白菜的根结线虫为象耳豆根结线虫。切片观察发现,其会阴花纹整体呈圆形至卵圆形,线纹较密且平滑,背弓较高,为方形或近圆形,无明显侧线。利用象耳豆根结线虫特异性引物进行PCR扩增,得到大小约236 bp的目的条带,说明所鉴定线虫为象耳豆根结线虫。系统发育树结果显示,所鉴定根结线虫与已知的不同地区象耳豆根结线虫聚为同一进化分支,进一步确定陕西省洛南县采集的根结线虫为象耳豆根结线虫。本文首次发现并报道了陕西省有象耳豆根结线虫为害,为该线虫的扩散及防治研究奠定了基础。     

南方、爪哇和花生根结线虫的快速灵敏的PCR鉴定方法

 为了研制南方、爪哇和花生根结线虫快速灵敏的检测和鉴定方法,分别分离了4个南方根结线虫和3个爪哇根结线虫特异性的随机扩增多态性DNA (RAPD)片段。在这些RAPD标记DNA序列的基础上,设计了多对SCAR PCR引物,并用源于国内外的南方、爪哇、花生、北方和象耳豆根结线虫群体验证其扩增特异性和灵敏度。最终确定了3对高效扩增的SCAR引物,它们组合使用可以可靠灵敏地鉴定南方、爪哇和花生根结线虫。3对引物的扩增灵敏度达1/3条的二龄幼虫、雄虫或雌虫,这表明本研究研制的PCR鉴定法可用于生产实践中土样和根样中3种根结线虫快速灵敏的鉴定。     

海南省蔬菜根结线虫发生种类与分布

2014年-2018年, 对海南省蔬菜根结线虫病害进行了田间随机采样调查和病原种类分子鉴定?结果显示, 蔬菜根结线虫病在海南18市县均有发生, 且大部分旱田连作地块病株率达到80%以上?进一步对采集的295份根结线虫样本种类进行了分子鉴定, 共鉴定出象耳豆根结线虫?南方根结线虫和爪哇根结线虫3种病原种?其中, 象耳豆根结线虫单一检出率达到62.37%, 南方根结线虫单一检出率为23.39%, 爪哇根结线虫的检出率仅为5.76%, 象耳豆根结线虫和南方根结线虫复合侵染检出率为8.47%?除五指山市样本以外, 海南其余17市县样本均检测到象耳豆根结线虫侵染为害?本研究显示象耳豆根结线虫为海南省蔬菜上的优势病原根结线虫种类, 该结果对指导品种布局?制定根结线虫病害的防治策略具有重要意义?     

南方、花生和爪哇根结线虫PCR检测方法

为快速、准确、稳定的鉴定南方、花生和爪哇根结线虫,利用已报道的南方和爪哇根结线虫的两对特异性引物,结合本研究设计的花生根结线虫特异性引物,通过优化PCR反应体系,建立了3种根结线虫的PCR检测方法。结果表明,该方法能够特异性扩增以上3种根结线虫,特征片段长度分别为399、335和670 bp,灵敏度达到单条2龄幼虫的水平。研究结果将为以上3种根结线虫的快速鉴定提供技术支持。     

象耳豆根结线虫对抗病番茄品种VFNT的致病性研究

 象耳豆根结线虫是近年在我国发现的一种扩散迅速、寄主广泛、致病性强的根结线虫。为探究象耳豆根结线虫的强致病性原因,本研究用象耳豆根结线虫和南方根结线虫分别接种抗线虫番茄品种VFNT和感病番茄品种Rutgers,30 d后象耳豆根结线虫对VFNT和Rutgers的累计侵入率分别为14.1%和19.2%、虫瘿率为62.5%和81.6%,而此时南方根结线虫累计侵入率为0%和18.8%、虫瘿率为0%和68.5%,象耳豆根结线虫的侵染力和致病力显著强于南方根结线虫;通过侵染抗病番茄品种VFNT的病理切片以及根尖侵染早期胼胝质、活性氧染色发现象耳豆根结线虫的侵染不会激活Mi-1基因诱导的特异性抗性,在侵染早期南方根结线虫引起的胼胝质沉积量在72 h最大,是象耳豆根结线虫的2.0倍;体外H₂O₂应激测试发现,H₂O₂浓度为10～80 μmol·L^-1象耳豆根结线虫对H₂O₂的耐受性显著强于南方根结线虫。象耳豆根结线虫具有强致病性的原因可能是:具有更强的侵染力和活性氧耐受力;侵染不会激活Mi-1基因诱导的特异性抗性且侵染引起的胼胝质的积累量较低。     

湖南省辣椒上首次发现象耳豆根结线虫

应用线虫比较形态学、同工酶技术和IGS-PCR技术,对采自湖南省永州地区辣椒上的根结线虫进行种类鉴定。结果表明,该病原线虫为象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii),这是首次在湖南地区发现象耳豆根结线虫。     

温度和初始种群密度对象耳豆根结线虫侵染番茄的影响

通过室内接种方法,研究了不同温度和接种密度对象耳豆根结线虫侵染番茄能力的影响。研究结果表明,28~30 ℃是象耳豆根结线虫侵染番茄的最适温度。随着温度的下降,其侵染能力明显降低。当象耳豆根结线虫2龄幼虫接种密度大于10条/100 cm3土壤时,番茄的生长会受到显著的抑制,随着线虫接种密度的增加,根结指数显著增加、线虫对番茄的危害也逐渐加重。研究结果将为广东省蔬菜产区制定象耳豆根结线虫防治指标提供理论依据。     

土沉香根结线虫病的病原鉴定

本研究对海南省澄迈县土沉香根结线虫病危害与发生情况进行了调查与研究,并采用比较形态学结合rDNA-ITS序列分析的方法对病原进行了分离鉴定,确定了发生在澄迈县土沉香苗木上的根结线虫为象耳豆根结线虫Meloidogyne enterolobii YangEisenback。这是首次报道海南省澄迈地区土沉香上发生象耳豆根结线虫,为进一步分析土沉香病原根结线虫种群及该病的防治研究奠定了基础。     

象耳豆根结线虫果胶酸裂解酶基因的克隆及其RNAi 效应分析

 从象耳豆根结线虫中首次克隆了果胶酸裂解酶基因Me-pel-1,该基因cDNA 的开放阅读框(ORF)长813 bp,编码270 个氨基酸,具有果胶酸裂解酶第3 家族的4 个保守域特征。ME-PEL-1 与南方根结线虫的果胶酸裂解酶MI-PEL-1 和爪哇根结线虫的果胶酸裂解酶MJ-PEL-1 相似性最高,且系统进化树显示ME-PEL-1 也与它们最为接近。利用RNAi 技术对象耳豆根结线虫2 龄幼虫的Me-pel-1 进行沉默,结果发现Me-pel-1 基因被干扰后,象耳豆根结线虫2 龄幼虫对番茄的侵染率显著降低。该结果表明Me-pel-1 基因在象耳豆根结线虫侵染寄主的过程中发挥重要作用。     

湖南柑橘根结线虫种类鉴定及特异性PCR检测

根结线虫病是严重危害湖南柑橘生产的主要病害,快速准确地进行病原线虫鉴定,从而制定针对性的防治措施,对柑橘产业的稳定发展至关重要。运用形态学和分子生物学技术对湖南永州地区柑橘根结线虫进行病原种类鉴定,确定其为番禺根结线虫Meloidogyne panyuensis。通过引物设计与筛选,建立了番禺根结线虫特异性PCR检测技术。结果表明,该检测方法特异性好,灵敏度高,操作简单,能有效地从多种根结线虫中特异性检测出番禺根结线虫,为柑橘病原线虫的快速检测鉴定提供技术支撑。     

Assessment of PCR-based tools for the specific identification of some temperate Meloidogyne species including M. chitwoodi,M. fallax and M. minor

Several conventional PCR tests have been developed for the identification of the European quarantine root-knot nematodes Meloidogyne chitwoodi and M. fallax but data are lacking for the evaluation of their performance in terms of sensitivity, repeatability, reproducibility and specificity against a large range of populations. This study evaluated the performance criteria of three conventional PCR tests recommended by the consensus diagnostic protocol for Meloidogyne chitwoodi and Meloidogyne fallax published by the European and Mediterranean Plant Protection Organization (EPPO): a species-specific PCR (IGS target), a SCAR PCR, and a rDNA ITS PCR-RFLP. Evaluation was carried out with DNA extracts from juveniles, males and females according to EPPO recommendations for test validation. A minimum of 34 populations of target and non target nematode species were tested to check the specificity of these three PCR assays. The three PCR tests were ranked according to their specificity (with regard to cross reaction with other nematodes species or genus) and their sensitivity (detection of a single juvenile or mixed with other species). The species-specific PCR proved to be more sensitive but less specific than the SCAR PCR. The PCR-RFLP enables the identification of several Meloidogyne species but profile analysis can be difficult when several species are present in the mixture. Specific PCR products and RFLP profiles were also observed for M. arenaria and M. enterolobii, and described for M. minor and M. artiellia.     

淡紫紫孢菌PLHN与甲氨基阿维菌素苯甲酸盐减量复配防治象耳豆根结线虫

象耳豆根结线虫Meloidogyne enterolobii严重威胁热带农业生产,迫切需要寻求一种兼具生物防治和化学农药减施高效双重优势的绿色防治方法。本研究通过杀线剂毒力测定和生防菌耐药测定,设计系列药菌复配组合并筛选出对象耳豆根结线虫活性好的复配方案。结果表明:3%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐(甲维盐)微乳剂对淡紫紫孢菌Purpureocillium lilacinum PLHN的菌丝生长、产孢量及孢子萌发的影响均较小,且对象耳豆根结线虫的LC50为0.107 mg/L, LC99为0.792 mg/L,绝对致死浓度为0.8 mg/L。复配组合中甲维盐0.4 mg/L(减量50%)+75% PLHN和甲维盐0.6 mg/L(减量25%)+50% PLHN对根结线虫2龄幼虫和卵的抑杀作用均优于其他组合。盆栽防效表明:0.6 mg/L甲维盐(减量25%)+50%PLHN复配组合的防效最好,对根结形成有一定的抑制作用,防治效果与全量甲维盐相当,并能促进番茄植株的生长;0.6 mg/L甲维盐+25% PLHN和0.4 mg/L甲维盐+75%PLHN次之。甲维盐和淡紫紫孢菌PLHN的复配使用,不仅甲维盐能减量25%～50%,还能弥补生物防治稳定性较弱、持效期不长等不足,是植物线虫病防治的可选策略之一。     

海南岛葫芦科蔬菜根结线虫种类鉴定

运用比较形态学、同工酶和mtDNA-PCR对采自海南岛4个市县的葫芦科蔬菜根结线虫进行鉴定,结果发现5个种群均存在象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii)。该种线虫是葫芦［Lagenaria siceraria (Molina) Standl］和丝瓜［Luf〖KG-0.5mm〗f〖KG-0.1mm〗a cylindrica (Linn.) Roem］上的新记录种,文昌和陵水属其首次被报道的分布地区。有2个样本表现为象耳豆根结线虫和南方根结线虫(M. incognita)的混合种群。     

Development of a new management strategy for the control of root-knot nematodes (Meloidogyne spp) in organic vegetable production

The nematophagous fungus, Pochonia chlamydosporia (Goddard) Zare & Gams, has been investigated as a potential biological control agent for use in integrated pest management strategies for Meloidogyne incognita (Kof & White) Chitwood in vegetable crops. The release of the fungus as a biological control agent requires a diagnostic method to monitor its spread in the environment and to gain knowledge of its ecology. Only molecular methods are sufficiently discriminating to enable the detection of specific isolates of fungi in soil. A method to extract DNA from soil was developed to increase the efficacy of PCR-based diagnostic tests that use specific primers. A selected isolate of P chlamydosporia var catenulata was applied at densities similar to those that occur naturally in nematode-suppressive soils. The fungus significantly reduced nematode infestations in soil following a tomato crop, in a strategy that combined the use of the fungus with crop rotation. The survival of the fungus in soil was also examined in controlled conditions in which it remained in soil in densities significantly greater than its original application rate for at least 5 months. Hence, it seems that populations of this fungus may be built up in soil and have significant effects on the regulation of root-knot nematode populations.     

南方根结线虫中国分离群体种内变异分析

为调查我国不同地区和不同寄主上的根结线虫Meloidogyne spp.种类分布以及群体变异情况,基于酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶图谱及SCAR分子标记技术对2017—2019年从6省19种植物根部组织分离到的40个根结线虫群体进行鉴定,针对南方根结线虫M.incognita群体分别通过寄主鉴别法进行生理小种鉴别,利用携带Mi抗性基因的番茄进行毒力测试,对2龄幼虫的口针长度和体长进行测量,并对核糖体ITS和线粒体Nad5基因序列进行比较分析。结果显示：根结线虫分离群体经鉴定包括38个南方根结线虫群体和2个象耳豆根结线虫M.erterolobii群体;38个南方根结线虫群体中有35个群体被鉴别为1号生理小种,其余3个群体被鉴别为2号生理小种;发现1个南方根结线虫群体CN19可在携带Mi抗性基因的番茄上侵染繁殖,为毒性群体,其余群体无法进行侵染和繁殖,为无毒群体。南方根结线虫群体2龄幼虫的口针长度和体长均差异较大,而不同寄主来源分离群体的ITS和Nad5基因序列也存在一定变异。基于ITS和Nad5基因序列构建的系统发育树将所有根结线虫群体归为南方根结线虫和象耳豆根结线虫组成的2个独立分支,但不能确定南方根结线虫不同群体的分子进化与其寄主来源和地理分布之间的相关性。