新疆梨树上苹果锈果类病毒的检测与全序列分析

[目的]检测并分析新疆和静县223团场多年生早熟梨树上的苹果锈果类病毒(ASSVd).[方法]对采自新疆和静县223团多年生早熟梨的枝条和叶片样品进行RNA抽提,经RT-PCR技术鉴定检测.[结果](1)多年生早熟梨树检测到苹果锈果类病毒,得到2条ASSVd核酸序列(JX861258～JX861259),所得序列与G enBank中已报道的国内外ASSVd序列同源性达86;以上.(2)原位RT-PCR检测进一步表明ASSVd的RNA阳性信号主要位于叶片叶肉组织的细胞核内.[结论]通过序列分析比对,各寄主上的ASSVd分离物核酸序列变异较小,地域和品种间核酸序列无明显差异.建立了优化的RT-PCR检测及原位RT-PCR检测方法,为果树ASSVd的快速检测奠定了良好的基础.     

苹果锈果类病毒内蒙古金红分离物的基因组序列分析

【目的】研究苹果锈果类病毒内蒙古金红分离物的基因组序列,为苹果锈果类病毒的有效防控提供参考。【方法】鉴定内蒙古自治区园艺研究院实验农场果实表现花脸的金红苹果叶片是否被苹果锈果类病毒(apple scar skin viroid,ASSVd)侵染。提取植物总RNA并以获得的总RNA为模板合成cDNA第一链,通过RT-PCR技术检测样品中的ASSVd,并经克隆测序获得ASSVd内蒙古金红分离物全基因组序列。采用MEGA 6.0、DNAMAN软件对不同寄主和不同地区来源的ASSVd分离物核苷酸序列进行分析,利用线上工具RNA Folding Form预测ASSVd内蒙古金红分离物的RNA二级结构。【结果】在疑似感病内蒙古金红苹果叶片样品中检测到ASSVd。ASSVd内蒙古金红分离物的序列长度为330 nt（GenBank登录号MZ476527）,与ASSVd新疆梨分离物（JX861258）的亲缘关系最近,核苷酸序列一致性也最高,为97.9%;其次与ASSVd内蒙古塞外红苹果分离物（MN598205）的亲缘关系较近,序列一致性为97.0%;与ASSVd内蒙古塞外红苹果分离物（MN598204）的核苷酸一致性最低,为87.5%。系统发育分析显示,ASSVd的遗传关系与寄主和地理来源相关性不大。多重对比分析结果表明,ASSVd的变异主要集中在左末端区、致病区和中央保守区。RNA Folding Form预测ASSVd内蒙古金红分离物RNA基因组具有杆状二级结构,自由能为-499.49 kJ/mol。【结论】内蒙古金红苹果样品被ASSVd侵染,获取了其基因组序列相关信息。     

苹果锈果类病毒在7个品种苹果上的分子变异及系统发育关系

【目的】探究不同品种苹果锈果类病毒(apple scar skin viroid,ASSVd)的分子变异及系统发育关系,为进一步揭示ASSVd分子变异机制打下基础。【方法】以富士、斗南、王林、中秋王、金冠、信侬红和信侬黄7个品种的染病苹果组织为材料,通过特异性引物对ASSVd全基因组序列进行扩增,然后进行分子克隆和序列测定,利用生物学软件DNAMAN对变异序列一致性进行分析并利用生物学软件MEGA构建系统发育树。【结果】共获得210个ASSVd的基因组序列,共计17种变体,大小为325—333 nt。将不同苹果品种获得的17种变体与其他已发表代表性分离物进行分析发现,所有变体被分为3组,组Ⅰ包括10种变体,同已报道的保定富士分离物(KR264032.1)亲缘关系较近;组Ⅱ包括6种变体单独聚类;组Ⅲ包括1种变体,与新疆红富士苹果上的分离物(EU031455.1)亲缘关系较近。进一步根据基因组0—3、221、251、284、302这8个位点的碱基变异,将17种变体分为6种类型:1、nt 0—3(GGTA)+nt 41—46(TAAAAT)+nt 221(T)+nt 251(T)+nt 28...     

新疆苹果树上苹果锈果类病毒(ASSVd)的检测与全序列分析

[目的]检测并分析新疆223团场多年生苹果树上的苹果锈果类病毒.[方法]对采自新疆库尔勒223团的多年生苹果树的枝条、叶片、果实((果皮、种子))样品进行RNA提取,利用RT-PCR技术检测鉴定.[结果](1)多年生的‘金冠’苹果树上检测到苹果锈果类病毒,得到4条克隆序列(ASSVd Y1:KC110858;ASSVd Y6:KC110859;ASSVd Y8:KC110860;ASSVd Y10:KC110861),所得序列与GenBank中已报道的国内外ASSVd序列同源性达85;以上.(2)序列比对可知,4条‘金冠’分离物序列之间只有3个碱基变异,与首次登录生物X17696有26个碱基变异,其中有4个碱基缺失和5个碱基插入,且变异多集中在类病毒序列的TL与TR区.[结论]通过序列分析比对,各寄主上的ASSVd分离物核酸序列变异较小,建立了优化的RT-PCR检测方法,为苹果树ASSVd的快速检测奠定了良好的基础.     

阿泰灵对苹果锈果类病毒病田间防效及机制研究

由苹果锈果类病毒引起的苹果花脸病或锈果病在中国发生普遍,目前尚缺乏有效的防治方法.新型蛋白诱抗剂阿泰灵能有效激活免疫,已在大田作物和蔬菜上成功应用.本研究探索阿泰灵对苹果花脸型和锈果型类病毒的防治效果,并分析其提高苹果树抗病性机制.在生长前期,采用阿泰灵对苹果树进行根灌和叶片喷施处理;在果实成熟期,进行发病情况调查.结...     

生物素标记cDNA探针检测苹果锈果类病毒

以含苹果锈果类病毒(ASSVd)全长序列的重组质粒PUC为模板DNA,加入ASSVd类病毒特异性引物,应用聚合酶链式反应技术(PCR)合成了生物素标记的cDNA探针,在斑点杂交反应中,探针最适使用浓度为1/10,探针检测感病的ASSVd类病毒的最大稀释倍数是1/100。利用制备的探针进行田间检测,结果与RT-PCR检测结果一致,阴性对照均无杂交信号出现。     

苹果果锈形成的原因及防治

果皮的外观是衡量苹果品质的重要指标之一。在国际市场上,诱人的外观显得更加重要。在沿海和内陆多湿地区,大多数苹果品种都易发生果锈。我国许多苹果产区的主栽品种之一金冠,果锈最为严重,有些年份锈果率达80％以上。     

苹果锈果病的鉴别与防治

[目的]制定一整套行之有效地防治苹果锈果病的措施。[方法]论述苹果锈果病的诊断、发病规律与防治方法。[结果]应准确诊断、正确认识锈果病的几种症状,并采取正确的防治方法。[结论]该文为苹果锈果病的防治提供了指导。     

生物菌剂防治苹果树重茬效果的研究

[目的]从保护生态环境的角度解决果树重茬问题。[方法]通过盆栽试验,对老果园根区重茬土壤和行间土壤进行不同生物菌剂用量和干鸡粪处理,研究生物菌剂防治苹果树重茬的效果。[结果]各试验处理的苹果幼树生长发育均优于根区重茬土壤处理的苹果幼树,其中以生物菌剂每盆1.0 kg处理效果最好,与其他处理相比各项指标差异显著,株高、干周年增加量、新梢长度、粗度、单叶面积、百叶重、根系活力分别比对照增加41.48%、39.53%、28.82%、26.00%、33.42%、37.38%、33.48%;苹果单叶重、叶片叶绿素含量比对照分别高18.55%、24.19%;且能有效提高土壤养分含量。[结论]生物菌剂抑制苹果树重茬有较好的作用,可在生产中进一步试验应用。     

烟台地区主要苹果种质资源抗锈病能力鉴定初报

对烟台地区保存的苹果品种、砧木和野生种质资源的苹果叶片锈病发生程度进行田间自然发病调查统计。结果表明：所有栽培品种均不同程度地感染苹果锈病,其中新红星、寒富、意大利早红等品种对苹果锈病的抗性较强,而天星、信浓金对苹果锈病的抗性较差;在砧木和野生资源中,贴梗海棠对苹果锈病的抗性最差,沙金海棠、矮花红、窄叶海棠、滇池海棠、草原海棠均未发现有锈病发生,为高抗苹果锈病资源。     

广西北海甘蔗锈病生物学特性研究及防治对策

甘蔗锈病是危害甘蔗叶片的主要病害。对在广西北海蔗区发现的甘蔗锈病病原进行了生物学特性研究。结果表明：黑暗条件和浓度为1.5%的葡萄糖可促进该病菌夏孢子萌发;较适宜萌发温度范围为20～25℃,最适宜温度是25℃;在相对湿度为80%以上的条件下,夏孢子均能萌发,最适宜的萌发湿度是100%＋水滴,萌发率达28.3%;在pH值4.0～11.1范围内,夏孢子均能萌发,最适合萌发的pH值是7.0;常规条件下,夏孢子的存活期最长达120d。防治对策着重在于选种抗病品种和加强栽培管理。     

苹果病毒病的危害及防治技术探讨

为了解决苹果病毒病危害问题,本文将结合文献资料查阅结果和自身工作经验进行总结,归纳了一些苹果病毒病类型,选取隐性ACLSV为例,开展ACLSV相对含量分布试验。本文依据病毒分布情况,将防治技术合理应用至ACLSV防治方案中,旨在改善苹果病毒病危害现状。     

我国苹果病毒病的研究现状

我国从1978年开始对苹果病毒病进行系统研究,目前初步明确了我国苹果主产区主要病毒病的种类及特性,在病毒检测方面也取得了很大进展。介绍了我国苹果上主要病毒的特性,这些病毒包括苹果花叶病毒（ApMV）、苹果锈果类病毒（ASSVd）、苹果绿皱果病毒（AgrCV）、苹果褪绿叶斑病毒（ACLSV）、苹果茎痘病毒（ASPV）和苹果茎沟病毒（ASGV）;阐述了这些苹果病毒病所采用的技术,包括指示植物、电子显微镜技术、血清学方法、分子生物学技术等。     

苹果潜隐病毒快速检测

该文以优系短枝富士为主要试材，采用木本指示植物和间接酶联免疫（ＰＡＳ－ＥＬＩＳＡ）两种方法，对苹果褪绿叶斑病毒（ＣＬＳＶ）、苹果茎沟病毒（ＳＧＶ）和苹果茎痘病毒（ＳＰＶ）进行了检测．试验表明，俄罗斯苹果Ｒ１２７４０－７Ａ、司派２２７和弗吉尼亚小苹果３种指示植物可作为上述３种潜在病毒的鉴定植物．植物生长状况对鉴定结果有重大影响．间接酶联免疫检测速度快，准确度高．该试验所用最佳抗体工作浓度ＣＬＳＶ：第一抗体１／６０００，第二抗体１／２０００；ＳＧＶ：第一抗体１／５０００，第二抗体１／３０００．     

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Westernblot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下基础。     

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得On-derstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Western blot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下了基础。     

苹果茎沟病毒RT-PCR检测技术

用苹果的叶片作为材料,研究比较了两种提取苹果总RNA方法的效果,确定了较好的提取方法。根据苹果茎沟病毒外壳蛋白基因设计引物,通过RT-PCR扩增在苹果叶片总RNA样品中获得了524 bp的特异片断,通过对该片段的序列分析与苹果茎沟病毒外壳蛋白基因源序列比较,其同源性高达93%。通过多次重复实验验证,该方法能很好地检测苹果茎沟病毒。     

生物菌肥对红富士苹果生长、产量和品质的效应研究

采用大田试验方法研究了晋南地区施用中合牌生物菌肥对红富士苹果生长、产量和品质的影响。结果表明,该生物菌肥对苹果树的新梢生长效果明显,产量比单施化肥提高23.5%,果实着色普遍提高0.5～1个级次,含糖度提高1.2度。