柱前紫外衍生—高效液相色谱法测定川贝母生物碱贝母素甲的含量

目的:建立川贝母生物碱贝母素甲的柱前紫外衍生—高效液相色谱法的测定方法。方法:以对甲苯磺酰氯为衍生试剂,在60℃的水浴条件下对贝母素甲水浴加热回流,采用HPLC-UV法测定川贝母中贝母素甲的含量。结果:在流动相为1 ml/min的甲醇—水(60∶40,v/v),柱温为35℃,检测波长为240 nm。贝母素甲在0.05～2.50μg/ml范围内线性相关系数为0.9993,方法检出限为0.008μg/ml和定量限为0.017 mg/ml,方法加标回收率为95.67%～100%,方法精密度(n=6)为2.4%。结论:本方法快速简便、灵敏度高、准确性好,适用于川贝母生物碱贝母素甲的含量测定。     

平贝母育种材料的收集与筛选

为了研究不同产地、生长年限平贝母中生物碱变化规律,试验以敦化市、梅河口市、桦甸市和抚松县的2年生平贝母鳞茎及敦化市1年生、2年生和3年生的平贝母鳞茎为试验材料,通过紫外分光光度法对不同产地和生长年限的平贝母有效成分生物碱含量进行测定。结果表明:不同产地的2年生平贝母中生物碱含量以敦化市最高;敦化市不同生长年限的平贝母中生物碱含量以3年生最高。说明产地和生长年限对平贝母中生物碱含量有较大影响。     

不同栽培因素处理对川贝母和暗紫贝母种苗建成的影响动态及比较研究

以川贝母和暗紫贝母为试验材料,探讨不同播种方式、不同覆盖物、不同拌种方式、不同施肥量等栽培因素对川贝母及暗紫贝母种子萌发和种苗建成过程的影响。结果表明,同种处理下,两种贝母种子出苗率大多随播后天数的增加呈“S型”变化,规律性显著,暗紫贝母部分施肥处理的出苗率与播后天数呈幂函数正相关关系。在播后(30±3)d,两种贝母种子基本完全出苗,且同种处理下川贝母种子的萌发出苗生长整体上优于暗紫贝母。不同处理结果表明,条播优于撒播或垄播;覆盖麦草优于覆盖松针或草木灰或羊粪;不拌种处理优于草木灰拌种或羊粪拌种;川贝母和暗紫贝母的最佳施肥量分别为氮2.00 g·m^-2、磷4.90 g·m^-2、钾1.25 g·m^-2及氮0.00 g·m^-2、磷9.80g·m^-2、钾2.50 g·m^-2。     

昆明山海棠蜜中雷公藤甲素降解的研究

昆明山海棠蜜是蜜蜂采集昆明山海棠的花蜜酿造而成的蜂蜜,在这里以HPLC检测存放了不同时间昆明山海棠蜜中的主要毒性成分雷公藤甲素(TW)的含量,即昆明山海棠花期采集的蜂蜜中雷公藤甲素的含量,以及在常温下存放了3个月及6个月后蜂蜜中雷公藤甲素的含量。当昆明山海棠蜜经萃取洗脱后,采用反相C18柱,以乙腈-水(30∶70)为流动相,以218 nm为检测波长,检测昆明山海棠蜜中雷公藤甲素的含量。结果表明,雷公藤甲素花期采集的蜂蜜中雷公藤甲素的含量为0.95±0.09μg/g;存放了3个月和6个月后蜂蜜中雷公藤甲素的含量为0.46±0.02μg/g和0.07±0.006μg/g,雷公藤甲素随着存放的时间降解非常明显。     

HPLC法同时测定参贝补肺丸中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量

采用高效液相色谱法(HPLC)同时测定参贝补肺丸中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素的含量。采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水(72:28)为流动相、检测波长254 nm、流速为1 mL/min、柱温35℃进行测定。结果显示,五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素分别在0.201 44~2.518 0μg(r=0.999 99)、0.0927 2~1.159 0μg(r=0.999 99)、0.066 624~0.832 8μg(r=0.999 99)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为101.00%(RSD=0.81%)、101.00%(RSD=0.59%)、97.92%(RSD=0.50%)(n=9)。说明该研究建立的方法可同时测定参贝补肺丸中五味子醇甲、五味子甲素和五味子乙素3种成分含量,且操作简便、专属性强、结果准确,可有效控制参贝补肺丸质量。     

不同产地当归药材中阿魏酸含量比较研究

目的：考察不同产地当归药材中阿魏酸含量的差异。方法：采用高效液相色谱法对18批不同产地的当归药材中阿魏酸进行含量测定。结果：阿魏酸在0.24-3.12μg/mL范围内线性关系良好;平均加样回收率为100.7%,RSD 1.2%。不同产地当归药材中的阿魏酸含量差异较大,云南产最高,甘肃次之,四川较低,其中道地产区岷县处于中等水平。结论：以单一指标成分阿魏酸来评价当归药材质量不够全面,需要进一步研究多指标成分,以有效评价当归药材质量。     

硫酸黏菌素对原代背根神经元细胞的毒性作用

建立了新生小鼠原代背根节(Dorsal root ganglion,DRG)神经元细胞原代培养的方法,作为评价硫酸黏菌素毒性的体外研究模型.在此模型基础上,使用不同浓度的硫酸黏菌素作用细胞24h后,应用MTT方法观察细胞毒性效应并测定细胞半数抑制浓度(IC50).结果表明,不同浓度硫酸黏菌素处理细胞后,高剂量组DRG神经元细胞出现明显病变,硫酸黏菌素浓度低于10μg/mL时,对DRG神经元细胞存活率无明显影响,硫酸黏菌素浓度达到10μg/mL以上时,细胞存活率降低,出现细胞毒性,且毒性作用强度随药物浓度增加而增强;试验测得硫酸黏菌素对DRG神经元的半数抑制浓度(IC50)为222.7μg/mL.     

HPLC-UV法测定黄芪中黄酮类化合物含量

采用HPLC-UV法同时测定黄芪中毛蕊异黄酮苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷以及芒柄花素含量。样品经浸泡-超声处理，流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液，低压梯度洗脱；流速1.0 mL/min;进样量25μL;柱温30℃;检测波长254 nm。结果显示，毛蕊异黄酮苷在线性范围18.70～187.20μg/mL色谱峰峰面积与浓度线性关系良好，相关系数为0.999 7;毛蕊异黄酮在线性范围1.68～16.80μg/mL色谱峰峰面积与浓度线性关系良好，相关系数为0.999 4;芒柄花苷在线性范围7.50～75.00μg/mL色谱峰峰面积与浓度线性关系良好，相关系数为0.999 5;芒柄花素在线性范围4.90～49.20μg/mL色谱峰峰面积与浓度线性关系良好，相关系数为0.999 8。精密度、稳定性、适应性、重复性试验以及加样回收率均符合要求。该方法简便快捷，精密度高，重现性好，稳定性高，可用于黄芪药材中多成分含量的同时测定。     

L-精氨酸对猪胎儿皮肤成纤维细胞免疫应激参数和β防御素基因mRNA表达的影响

本试验旨在研究L-精氨酸(L-Arg)对猪胎儿皮肤成纤维细胞(PFSF)免疫应激参数和β防御素基因mRNA表达的影响。采用培养至4～5代的PFSF,通过脂多糖诱导建立免疫应激模型,在DMEM/F12培养液中添加不同浓度(0、35、70、140、280和560μg/mL)的L-Arg,培养24 h后,检测培养液一氧化氮(NO)含量及乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)和溶菌酶(LSZ)活性;采用实时定量PCR法检测PFSFβ防御素1(pBD-1)、β防御素2(pBD-2)和β防御素3(pBD-3)基因mRNA表达量。结果表明:1)L-Arg能够降低培养液LDH活性,正常细胞和应激细胞分别在L-Arg浓度为70和140μg/mL时达到最低;2)L-Arg能够极显著提高培养液NO含量(P<0.01),正常细胞和应激细胞均在L-Arg浓度为140μg/mL达到最高;3)L-Arg能够显著或极显著增加正常细胞培养液NOS活性(P<0.05或P<0.01),而对应激细胞无显著影响(P>0.05),L-Arg浓度为35和70μg/mL时,应激细胞显著或极显著高于正常细胞(P<0.05或P<0.01);4)560μg/mL L-Arg可显著提高培养液LSZ活性(P<0.05);5)70μg/mLL-Arg可极显著提高正常细胞和应激细胞pBD-1和pBD-2基因mRNA表达量(P<0.01),140μg/mL L-Arg可极显著提高正常细胞和应激细胞pBD-3基因mRNA表达量(P<0.01)。结果提示,适宜浓度的L-Arg能够降低培养液LDH活性,提高NO含量以及NOS和LSZ活性,上调应激细胞和正常细胞β防御素基因mRNA表达;本试验条件下,L-Arg的适宜添加浓度为70～140μg/mL。     

刺槐素对禽源性大肠杆菌的抑菌作用及耐药性消除的研究

该试验研究刺槐素对鸡源性大肠杆菌的抑菌作用和耐药性消除效果。采用药敏纸片判断刺槐素的抑菌效果,对比前后2次MIC的浓度大小判断刺槐素对大肠杆菌的耐药性消除效果。结果:刺槐素抑菌效果:大肠杆菌①的MIC为32μg/mL,大肠杆菌②的MIC为128μg/mL,大肠杆菌③的MIC为64μg/mL,大肠杆菌④的MIC为16μg/mL,大肠杆菌⑤的MIC为32μg/mL。耐药性消除试验结果:大肠杆菌①的MIC由1024μg/mL下降为128μg/mL,大肠杆菌②的MIC由512μg/mL下降为64μg/mL,大肠杆菌③的MIC由2048μg/mL下降为128μg/mL,大肠杆菌④的MIC由256μg/mL下降为32μg/mL,大肠杆菌⑤的MIC由512μg/mL下降为64μg/mL。结论:刺槐素对鸡源性大肠杆菌具有抑制作用,对头孢耐药性有消除作用。     

不同生产阶段的荷斯坦奶牛血清生化指标变化规律

对不同生产阶段的荷斯坦奶牛的血清生化指标进行测定分析,以探讨在不同生产阶段的变化规律。研究表明,围产后期奶牛血清VA、VE与Ca含量最低,分别为0.23μg/mL、2.00μg/mL和2.27 mmol/L,而血P含量最高,浓度为2.27 mmol/L;泌乳后期血清中VA、VE、尿素氮(BUN)、Ca含量最高,分别为0.49μg/mL、3.43μg/mL、6.19 mmol/L、2.58 mmol/L;泌乳期血清中BUN含量显著高于非泌乳期。     

虫草素体外抗弓形虫的效果及其作用机制的探究

为探究虫草素抗弓形虫的效果及作用机制，本研究将不同浓度的虫草素与弓形虫RH株共同作用48 h后，采用CCK8法筛选对细胞安全的虫草素浓度。结果显示，以1μg/mL～200μg/mL (以对细胞的抑制率均为0判定)的虫草素为细胞的安全浓度。将巨噬细胞接种弓形虫RH-GFP株，同时分别加入1μg/mL～100μg/m L虫草素，根据弓形虫的荧光强度，计算虫草素对弓形虫的半数抑制浓度(IC₅₀)。结果显示，虫草素对弓形虫的IC₅₀为31.24μg/mL，且其对弓形虫的抑制作用与虫草素的浓度呈正相关。将巨噬细胞接种弓形虫RH株，同时加入100μg/mL虫草素，2 h后采用间接免疫荧光试验(IFA)检测并统计黏附与侵入细胞的弓形虫数量，分析虫草素对弓形虫黏附与侵入细胞的影响；24 h后采用吉姆萨染色后统计细胞感染率；收集上述各组细胞样品，一部分细胞采用q PCR检测细胞中弓形虫B1基因的转录水平，分析虫草素对弓形虫增殖的影响；一部分细胞采用IFA检测并统计每孔细胞100个空泡(PV)中的弓形虫速殖子的数量，分析虫草素对弓形虫复制水平的影响。结果显示，与...     

HPLC法测定创伤愈合药喷雾剂中血竭素的含量

建立了高效液相色谱法测定创伤愈合药喷雾剂中血竭素含量的方法。色谱柱为C18柱(5μm,4.6 mm×250 mm),流动相乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(50∶50),流速1.0 mL/min,柱温40℃,检测波长440 nm,血竭素在13.07～45.74μg/mL浓度范围内,峰面积与浓度线性关系良好(r=0.9997,n=6),平均加样回收率为98.29%,相对标准偏差为0.67%,血竭素的平均含量为0.01902 mg/mL。本研究所建立的含量测定方法简便、灵敏、准确、稳定,可用于创伤愈合药喷雾剂的质量控制。     

克洛素隆注射剂在绵羊体内的药物动力学研究

研究了克洛素隆注射剂在绵羊体内的药物动力学过程。以邻甲苯磺酰胺为内标,建立应用RP-HPLC检测绵羊血浆中克洛素隆含量的方法,血浆浓度在0.01μg/mL~1.0μg/mL及1.0μg/mL~20.0μg/mL范围呈良好线性关系,方法回收率和精密度均能满足药物动力学分析的要求。结果表明,绵羊按4mg/kg单剂量皮下注射克洛素隆,体内药物运转符合二室开放模型。主要药物动力学参数分别为:t1/2Ka=1.355h±0.746h,t1/2β=17.924h±9.186h,tmax=3.181h±1.046h,Cmax=5.121μg/mL±0.997μg/mL,AUC=56.730(mg/L)·h±5.248(mg/L)·h。克洛素隆注射剂皮下注射吸收快,消除较慢,适于绵羊临床寄生虫病的防治。     

高效液相色谱法测定柴辛注射液中有效组分含量的研究

为同时测定柴辛注射液中有效组分甲基丁香酚、细辛脂素的含量,建立了以核壳型分离填料为色谱柱,乙腈和水为流动相,检测器波长为287 nm,流量为1.0 mL/min的高效液相色谱方法。结果显示,在0.15～150μg/mL的质量浓度范围内,甲基丁香酚的线性曲线为Y=7243X-258,R²=0.9999,检测限为0.025μg/mL,平均回收率为97.47%～100.53%,RSD为0.92%～2.17%;细辛脂素的线性曲线为Y=18853X-676,R²=0.9999,检测限为0.012μg/mL,平均回收率为88.47%～92.23%,RSD为1.48%～3.55%。该方法操作简单,准确度、重复性、精密度好,可适用于柴辛注射液的质量控制。     

理塘县野生山莨菪中4种莨菪烷类生物碱的含量测定

目的:通过采集和测定理塘县不同产地野生山莨菪药材中4种莨菪烷类生物碱含量,为理塘县山莨菪种植及产业发展提供参考数据。方法:采用高效液相色谱法测定理塘县不同产地野生山莨菪药材中生物碱含量。结果:理塘县不同乡镇的12批野生山莨菪根样品中樟柳碱、山莨菪碱、东莨菪碱和阿托品4种生物碱含量的差异较大,樟柳碱含量在0.001%～0.326%之间、山莨菪碱含量在0.016%～0.124%之间、东莨菪碱含量在0～0.063%之间、阿托品含量在0.038%～0.342%之间、4种生物碱总量在0.066%～0.604%之间。结论:该县具有发展山莨菪特色种植产业的巨大潜力,建议以高塘镇、藏坝乡、濯桑乡等乡镇为核心建立山莨菪种植繁育和示范基地,并结合林草资源特点发展山莨菪仿野生栽培。     

江苏韩信草HPLC指纹图谱及其芹菜素含量测定

为了建立江苏不同产地韩信草高效液相色谱指纹谱图,测定其有效成分芹菜素的含量,试验采用HPLC-二极管阵列检测器,Agilent Eclipse XDB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,0.5%冰醋酸水溶液-乙腈流动相,梯度洗脱,检测波长275 nm的色谱方法对10批江苏不同产地韩信草建立HPLC指纹图谱共有模式,并采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对谱图进行分析。结果表明:江苏10批不同产地韩信草的HPLC指纹图谱中确定15个共有峰,相似度均大于0.91。指认13号共有峰为芹菜素,线性范围为7.00～70.00 μg/mL(r=0.9997),10批样品芹菜素含量均在1.25～1.48 mg/g。说明多批样品具有一致性。所建立的方法灵敏、准确、重复性好,可作为韩信草药材质量控制的参考依据。     

鲎素对仔猪腹泻致病性大肠杆菌的抑杀作用

为探讨鲎素对仔猪腹泻致病性大肠杆菌的杀伤作用,采用琼脂糖弥散试验和试管二倍稀释法检测了鲎素对大肠杆菌K_(88)、K_(99)和F_(41)的杀伤活性、最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC);将鲎素(32μg/mL)与K_(99)37℃共孵育2h,扫描电镜和透射电镜观察细菌形态的变化。结果表明,鲎素对上述细菌均具有较强的抑杀活性,其MIC为1～2μg/mL,MBC为2～8μg/mL;经鲎素处理后的K_(99)细胞壁膜和菌体内部遭到不同程度的破坏。结果提示鲎素具有抑杀断奶仔猪腹泻致病性大肠杆菌的生物功能。     

龙葵生物碱诱导HeLa细胞凋亡的研究

用MTT法观察龙葵生物碱的体外抗肿瘤作用,用TUNEL染色法检测龙葵生物碱对HeLa细胞凋亡的影响,用免疫细胞化学方法研究龙葵生物碱对HeLa细胞PCNA和突变型P53蛋白表达的影响。浓度为100μg/mL～800μg/mL的龙葵生物碱对HeLa细胞的生长均表现出一定的抑制作用;TUNEL染色结果提示400μg/mL的龙葵生物碱处理HeLa细胞48 h后,能够诱导更多的细胞出现凋亡;免疫细胞化学分析结果显示,400μg/mL的龙葵生物碱处理HeLa细胞48 h后,会使HeLa细胞中PCNA蛋白和突变型P53蛋白表达量显著下调。结果表明,龙葵生物碱在体外具显著抗宫颈癌活性,其作用机制是通过诱导更多的细胞出现凋亡而实现的。     

贵州金荞麦块根中表儿茶素含量的测定及分析

为了解贵阳地区不同生长年限的黔中金荞麦和贵州不同产地的野生金荞麦块根中表儿茶素含量,利用高效液相色谱法进行检测分析.结果:2年生黔中金荞麦的表儿茶素含量为349.48μg/g,达到《中华人民共和国药典》要求;贵州不同产地的野生金荞麦表儿茶素含量差异较大,丹寨县的野生金荞麦表儿茶素含量最高,达到590.89μg/g,可作...