大白菜游离小孢子胚状体诱导影响因素的研究

研究了影响大白菜游离小孢子胚状体诱导的几个主要因素。结果表明,添加适量活性炭可促进胚状体发育,AgNO3在1~5 mg/L浓度范围内起抑制作用,IBA在0.05 mg/L时显著促进胚状体的诱导,诱导率达56.5%,而6-BA单一添加时效果不明显,而与NAA配合添加,即6-BA 0.05 mg/L,NAA0.5 mg/L时,诱导率提高明显。     

高含油量甘蓝型油菜小孢子培养体系探究

以8个高含油量甘蓝型油菜品系的杂交F1为试验材料,观察小孢子各发育时期的形态,探讨花蕾长度与小孢子发育时期对应关系,培养基中添加不同植物激素及质量浓度配比等因素对小孢子培养出胚量及再生胚生长的影响。结果表明,小孢子不同发育时期的形状差异较大,小孢子单核晚期对应的花蕾长度主要集中在2.5～3.0mm;只有少数膨大细胞最终发育成为胚状体;不同材料出胚量差异较大,有5个材料获得再生胚,其中2003×HZ出胚量最高,为每蕾8.1胚,另3个材料未获得再生胚;不同材料小孢子对激素种类和质量浓度的反应不同,在NLN中添加0.1mg/L 2,4-D+0.05mg/L(或0.1mg/L)6-BA利于2003×HZ、1517×HZ、1485×HZ出胚,而在NLN中添加0.05mg/L NAA+0.05mg/L 6-BA利于1438×HZ、1479×HZ出胚;在B5固体培养基中添加0.1mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA利于胚状体迅速生长。     

组蛋白去乙酰化抑制剂诱导羽衣甘蓝小孢子胚状体发生和植株再生

羽衣甘蓝是2年生植物,2年完成1个有性生殖世代,游离小孢子培养是加快其纯合化的有效途径。但是由于羽衣甘蓝小孢子培养的诱胚率低,使其难以育种应用。组蛋白乙酰化是一种重要的表观遗传学机制,影响小孢子发育途径,促进小孢子胚状体发生。本研究分别用不同浓度的组蛋白去乙酰化抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸和曲古菌素A处理羽衣甘蓝红斑鸠的小孢子,以诱导胚状体发生。结果表明,辛二酰苯胺异羟肟酸浓度为0.075μmol/L时,红斑鸠获得最多胚状体,为每个花蕾获得20.24个胚状体,同时直接成苗率也达到最高,为16.07%。曲古菌素A浓度为0～0.150μmol/L时,红斑鸠的胚状体发生率和直接成苗率都降低。适当浓度的辛二酰苯胺异羟肟酸可以促进羽衣甘蓝红斑鸠小孢子胚状体发生和直接成苗率,而0～0.150μmol/L曲古菌素A对羽衣甘蓝红斑鸠胚状体的发生和直接成苗率有抑制作用。     

2个甘蓝F1小孢子培养中高出胚率的诱导技术研究

以2个优良的F1甘蓝为试材,探讨了高温热激、蔗糖浓度、添加和更换培养液培养、激素种类与浓度配比等因素对提高甘蓝小孢子诱导胚产量的影响.结果表明,2个F1甘蓝材料经24 h 、33℃高温热激处理对小孢子胚胎发生是必要的;小孢子在13%蔗糖浓度培养基(NLN-13)中培养胚产量最高,为1.89胚/蕾;高浓度蔗糖的培养基(NLN-17)培养3 d后添加低浓度蔗糖培养基(NLN-10)培养能大幅度提高胚产量,比一直在13%蔗糖的培养基(NLN-13)培养的胚状体增加255.2%;NLN-13培养基中添加0.1 mg/L 6-BA和0.05 mg/L NAA能够诱导出高胚产量.     

春性甘蓝型油菜胚状体成苗影响因素的研究

【目的】通过对春性甘蓝型油菜胚状体成苗影响因素的研究,以提高胚状体成苗效率,缩短DH群体构建的时间。【方法】以小孢子培养获得的5964个子叶形胚状体为材料,研究了胚状体长度、培养基分装方式、琼脂质量浓度、低温处理时间与胚状体成苗的关系。【结果】胚状体在固体培养基上的放置方式影响其形态发育;长度为3～4mm的胚状体成苗率最高,达到60.1%;分装方式Ⅲ,即分装20min后封口,培养基凝固后表面没有积水的培养基出苗最好,成苗率达到65.2%;随琼脂质量浓度的增加,胚状体成苗率呈先上升后下降的趋势,琼脂质量浓度为12g/L时的成苗率最高,达到61.3%;4℃低温处理14d可使胚状体一次成苗率提高到65.5%。【结论】缺氧和低温处理影响胚状体的形态发育;胚状体发育程度影响成苗率;相对干燥的环境有利于成苗;琼脂质量浓度通过影响培养基中可利用水的分配、培养瓶内湿度以及乙烯浓度影响小孢子胚成苗率;低温可能通过影响胚状体内源激素水平起到提高成苗率的作用。     

培养基成分对黔白大白菜杂交种小孢子胚诱导的影响

以2个黔白大白菜杂交组合为材料,进行游离小孢子培养,探讨了培养基成分对小孢子成胚率的影响。结果表明:NLN培养基添加13%蔗糖的培养效果最好;添加0.05 mg/L 6-BA和0.10 mg/L NAA的培养基显著提高了小孢子胚的诱导率和成熟胚的比例;NLN-13液体培养基中添加适量活性碳可明显促进小孢子胚状体的形成,对胚胎发育的同步性也有很好的作用。     

川滇高山栎体胚诱导关键影响因素研究

【目的】探讨影响川滇高山栎体胚诱导的关键因素,为建立川滇高山栎体胚再生植株体系奠定基础。【方法】以川滇高山栎未成熟合子胚为外植体,研究基本培养基、植物生长调节剂配比、采样时期、抗氧化剂以及培养条件(光培养或暗培养)对其体胚诱导的影响。【结果】川滇高山栎未成熟合子胚在MS、1/2MS、B5和WPM基本培养基上均有体胚发生,其中MS基本培养基诱导效果较好,诱导率达60.0%,显著高于其他培养基,且愈伤组织量最多;以MS为基本培养基,同时添加1mg/L 6-BA和0.5mg/L 2,4-D,诱导率达83.3%,显著高于二者单独添加及其他组合处理;光照强度1 000~2 000lx,每天光照12h的光培养比暗培养更有利于体胚的发生;在林芝地区最佳采样时期为08-10左右;培养基中添加1.0g/L PVP可有效减轻褐变的发生。【结论】初步建立了川滇高山栎体胚诱导的培养体系。     

羽衣甘蓝小孢子胚植株再生的影响因素分析

【目的】建立羽衣甘蓝小孢子胚植株再生体系,完善羽衣甘蓝小孢子培养技术,为高效稳定地获得羽衣甘蓝双单倍体植株奠定基础。【方法】以名古屋-红、白珊瑚、红鸥、白舞、桃舞、帝王-桃红、P3、X18和X35等9个基因型羽衣甘蓝为试验材料,研究基因型、培养基、琼脂质量分数、低温处理、胚龄和激素对羽衣甘蓝小孢子胚状体植株再生的影响。【结果】9个基因型羽衣甘蓝的小孢子胚植株成苗率差异很大,其中‘红鸥’的胚状体成苗率最高,达到88.6%;附加质量分数1.0%琼脂的MS培养基最适合植株再生;低温处理对胚状体的再生有一定促进作用,但影响不明显;25～30d胚龄胚状体的再生能力较强。附加1.5mg/L 6-BA和0.2mg/L NAA激素的MS培养基有利于胚状体的再生成苗,95%以上的植株能够很好地生根,移栽成活率达75%以上。【结论】对羽衣甘蓝而言,基因型不是其小孢子胚再生能力的惟一决定因素,培养基中有一定量的盐分是小孢子胚再生所必需的条件,小孢子胚萌发成苗时需要相对干燥的环境;在小孢子发育过程中增加脱分化阶段,可使畸形胚、鱼雷型胚或心型胚先形成愈伤组织,再分化形成植株。     

黄花芥蓝游离小孢子培养和植株再生

以黄花芥蓝自交品系ZBo-1和ZBo-6为供体材料,研究了培养基添加激素、热激时间、取材时期以及供体植株生长条件对小孢子胚状体产量的影响.结果表明,在32℃热激1 d小孢子胚产量最高,培养基中添加NAA 0.1 mg/L、IAA 0.1mg/L和6-BA 0.1mg/L能促进芥蓝小孢子胚状体的形成.不同时间取材,胚状体产量存在明显差异,胚状体诱导成功率在60%～80%.2个材料在人工春化温室栽培和自然春化温室栽培2种生长条件下都有子叶形胚和鱼雷形胚形成的 能力;ZBo-6在自然春化温室栽培条件下胚产量显著高于人工春化条件下的胚产量,而ZBo-1的胚产量以人工春化条件下较高.试验获得了黄花芥蓝的小孢子再生植株.     

大白菜游离小孢子胚诱导及植株再生

以15个大白菜[Brassica campestris ssp. Pekinensis (Lour.) Olsson]自交系和杂交种为试材进行游离小孢子培养,研究了影响胚状体发生及植株再生的几个主要因素。结果表明,有12个品种的游离小孢子在NLN-13液体培养基上诱导出胚;各品种间小孢子胚产量差别很大,每个花蕾产胚在0.25~65.4个之间;将成熟的子叶形胚及时转移至再生培养基上,对提高植株获得率至关重要;在NLN-13液体培养基上附加0.2mg.L-1的6-BA对胚状体的发生和发育有促进作用;B5+0.2 mg.L-16-BA+0.02 mg.L-1NAA的培养基有利于小孢子胚发育成植株;1/2 MS+0.1 mg.L-1NAA为小孢子植株生根最适宜的培养基。     

马铃薯茎尖组织培养技术研究

[目的]提高离体马铃薯茎尖组织培养的成苗率和脱毒率。[方法]从马铃薯上取生长健壮的芽,经消毒后在显微镜下切取1．0到1．5min长度的茎尖,接种于诱导分化培养基上,研究了不同浓度的GA3、KT与6-BA和不同激素配比以及不同浓度的基础培养基的诱导效果,探讨了茎尖组织诱导分化的最适培养条件。[结果]低浓度的GA3可促进愈伤组织的形成,过高的GA3浓度会抑制愈伤组织的形成;KT比6BA具有更好的诱导效果;在MS＋GA30．1mg/L＋NAA0．1mg／L＋BBA0．5mg／L培养基中激素配比的诱导效果较好。[结论]MS＋0．5mg／LKT＋0．2mg／LGA3＋0．1mg／LNAA是最为适宜的茎尖组织培养基。在28℃、每天光照16h、光照强度〉2000lx的培养条件下,经7d左右即可得到形态良好愈伤组织,经15d左右即可得到分化良好的试管植株。     

植物激素和光暗培养条件对卷丹百合再生体系的影响

【目的】探究植物激素和光暗培养条件对卷丹百合（Lilium lancifolium Thunb）再生体系的影响,为卷丹百合种质资源开发和大面积推广种植打下基础。【方法】以卷丹百合鳞片为外植体,分析培养基中不同植物激素［NAA、6-BA、2,4-D、噻苯隆（TDZ）和毒莠定（PIC）］配比及光（光照时间14 h/d）、暗（全天黑暗）培养条件对卷丹百合鳞片愈伤组织诱导、增殖及不定芽再生的影响,建立卷丹百合组培高效再生体系。【结果】与不添加任何激素的对照（CK）相比,添加激素的培养基均能显著提高卷丹百合鳞片愈伤组织的诱导率（P<0.05）,其中TDZ 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L组合的效果最佳,暗培养条件下其愈伤组织诱导率达65.57%;在TDZ 0.4 mg/L+2,4-D 0.05 mg/L的培养基中暗培养20 d后,再转入TDZ 0.4 mg/L+NAA 0.2 mg/L的培养基中继续暗培养40 d,愈伤组织增殖倍数最高,可达2.45倍。6-BA与NAA组合比6-BA与PIC组合更利于诱导不定芽的产生,芽再生倍数最高的培养基为6-BA 0.6 mg/L+NAA 0.1mg/L,暗培养条件下其再生倍数最高可达6.08倍。与光培养相比,暗培养更利于愈伤组织诱导和增殖,但在愈伤组织诱导不定芽阶段,长时间暗培养不利于芽的生长,暗培养20 d后转移至光培养条件下继续培养40 d,生成的不定芽色泽鲜绿,叶片伸展,长势旺盛,利于壮苗和生根。【结论】卷丹百合组织培养的不同阶段受不同种类和浓度的植物激素组合影响;暗培养条件更利于愈伤组织的诱导和增殖,暗培养结合光培养条件最适合不定芽的再生和分化。     

海南钻喙兰原球茎的形态建成和快速繁殖

[目的]为海南钻喙兰的组培快繁提供依据。[方法]以钻喙兰种子作外植体,研究了不同诱导培养基、增殖培养基、生根培养基在钻喙兰组培快繁中的效果。[结果]诱导类原球茎体以MS附加6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L的激素配比较好,分化时间短。增殖培养基为MS+6-BA0~3.0 mg/L+NAA0~0.2 mg/L,以MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.1 mg/L效果最好,平均增殖系数为3~8,把生长健壮并具有2~3片真叶的单个小芽,转接到生根培养基1/2 MS+NAA1.0 mg/L上,经60 d培养,即可获得生长健壮的完整植株。钻喙兰试管苗的移栽基质以粗椰糠∶河沙=1∶1的比例混合较好,湿度80%~90%,移栽成活率达90%以上。[结论]海南钻喙兰种子在温度(25±2)℃,光照强度1 500~2 000lx,光照时间12 h/d的条件下,最适诱导培养基为MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L;最适增殖培养基为MS+6-BA3.0 mg/L+NAA0.1 mg/L,生根培养基为1/2 MS+NAA1.0 mg/L。     

花叶矮牵牛嵌合体再生体系的建立

以花叶矮牵牛为材料,研究了外植体、激素浓度、光照强度、叶片生理状态、暗培养时间等因素对诱导嵌合体不定芽的影响,建立了花叶矮牵牛嵌合体再生体系。结果表明:无菌苗在2000 lx光照条件下,置于MS 6-BA 0.2 mg/L培养基上,嵌合体诱导率最大达到90.2%;生理年龄为20 d的叶片,在MS 6-BA 0.4 mg/L IBA0.01 mg/L培养基中,嵌合体诱导率最大达到34.8%,暗培养会降低嵌合体的诱导率。     

中国樱桃离体叶片愈伤组织诱导的研究

以中国樱桃试管苗的离体叶片为外植体,MS为基本培养基,研究2,4-D和6-BA以及NAA和6-BA的不同浓度组合,以及叶片的不同部位、暗处理对愈伤组织诱导的影响。结果表明：培养基MS＋2.0mg/L 2,4-D＋2.0mg/L 6-BA＋3%蔗糖对愈伤组织的诱导最好,叶基部（包含部分叶柄）诱导率可达100%,暗处理5d,然后转入光照下培养可提高叶尖部和叶中部愈伤组织的诱导效果。     

桃砧木GF677叶片愈伤组织诱导和保存

[目的]研究桃砧木GF677(Prunus amygdalus×Prunus persica)叶片愈伤组织的诱导和保存技术。[方法]以桃砧木GF677试管苗为材料,研究激素含量、基本培养基、AgNO3、暗培养时间、碳源等因素对其叶片愈伤组织诱导和保存的影响。[结果]选取继代时间为28 d左右的试管苗幼嫩叶片,暗培养21 d后转移至光培养进行愈伤组织诱导,较佳的培养基配方为LP基本培养基+TDZ 1.0 mg/L+6-BA 0.6 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L+AgNO30.5 mg/L,添加山梨醇20.0 g/L,琼脂6.0 g/L;选取继代时间为21 d左右的愈伤组织暗培养保存,保存较佳的培养基配方为LP基本培养基+6-BA 0.5 mg/L+2,4-D 0.5 mg/L+CH 0.2 g/L,添加蔗糖30.0 g/L,琼脂6.0 g/L。[结论]为桃砧木GF677的遗传转化和无性系变异筛选等工作奠定了基础。     

月季“黄和平”体细胞胚诱导的初步研究

以月季(Rosa chinensis)“黄和平”的幼嫩叶片为外植体,研究了不同植物生长调节剂对其愈伤组织和体细胞胚诱导的影响.结果表明,在愈伤组织诱导试验中,MS+3 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA效果最好,诱导率达94.8％;在体细胞胚诱导试验中,其最适诱导培养基为MS+1.2 mg/L TDZ,暗培养8d后转入光下培养,体细胞胚诱导率最高,达33.3％,暗培养超过8d,外植体易形成愈伤组织而不利于体细胞胚的诱导.     

攸县油茶胚状体发生及其组织学观察

[目的]研究以攸县油茶(Camellia yuhsienensis Hu)成熟子叶为外植体的胚状体发生情况。[方法]以子叶为外植体,接种于MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT培养基上,诱导胚性愈伤组织。胚性愈伤组织块转接至以MS为基本培养基,添加不同浓度6-BA和NAA的激素组合的培养基上诱导产生胚状体。取不同发育阶段的组织块制作石蜡切片,进行组织学观察。[结果]成熟子叶块接种于诱导培养基MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT,15d左右开始出现胚性愈伤组织。胚性愈伤组织转接至培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA时胚状体诱导率最高,为87.78%;无激素培养基也能诱导胚性愈伤组织产生胚状体,但诱导率极低,仅为6.67%。组织学观察表明,胚性细胞由愈伤组织表面及其内部邻近的若干细胞分化而来,经过球形胚、心形胚、子叶形胚等不同发育阶段直至成熟胚状体。[结论]诱导胚性愈伤组织分化为胚状体的最佳培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA。     

6-BA、IBA、NAA对桑组培苗继代增殖的影响

通过设计正交试验及设置光照条件等单因素试验,探讨不同种类、不同浓度的植物生长激素、不同光照强度对桑组培苗继代增殖的影响情况。结果表明,桑组培苗继代增殖的最佳生长激素配比配方为：6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L;最佳培养条件为：温度27℃,光照强度2000~2500 lx,先暗培养5天,后光照时间14 h/d,此条件下发芽率为100%。由此可见过高的细胞分裂素和生长素会对组培苗产生不利影响;初期先适量暗培养,发芽率高于直接光照培养,并且能有限减弱褐化现象,同时还能降低生产成本。     

水果型番木瓜组织培养的研究

[目的]研究水果型番木瓜的组织培养。[方法]以经预处理的种子为试材,通过MS基本培养基附加不同浓度的6-BA和IBA,对水果型番木瓜组培快繁技术进行了研究。[结果]无菌条件下用75%酒精均匀擦拭水果型番木瓜果皮表面,取出种子,用无菌水冲洗3次是较好的灭菌方法,种子污染率仅为2.52%;水果型番木瓜种子经1000mg/LGA3＋1mg/L6-BA（等体积混合）浸泡18h后接种于MS培养基中培养,种子发芽率、胚芽长度、胚根长度和苗高达到较高值,分别为68.42%、2.25cm、0.80cm和1.52cm,幼苗整体生长较好;继代增殖培养基为MS＋0.5mg/L6-BA＋0.1mg/LIBA时增殖系数最高（7.92）,幼苗长势较好;组培苗玻璃化随着光照强度的增强而呈减弱趋势,3000lx处理下玻璃化苗比率最低（3.21%）。[结论]该研究为水果型番木瓜的组培快繁研究提供了参考。