烟草野火病菌对春雷霉素的敏感性测定及敏感基线建立

从黑龙江和吉林两省烟草主要种植区获得烟草野火病菌(Pseudomonas syringaepv.tabaci)菌株61株,采用抑菌圈法对4％春雷霉素可湿性粉剂进行了敏感性测定.结果表明,不同地理来源的烟草野火病菌对细菌杀星敏感性有一定差异,EC5o值分布在0.41～6.54μg/mL之间,平均为2.18μg/mL;黑龙江省虎林的菌株h16为最敏感菌株,其EC50为0.41μg/mL,而黑龙江亚布力菌株h22敏感性最低,其EC50为6.54μg/mL.确定了两省烟草野火病菌对春雷霉素的敏感基线为2.18μg/mL,可用于烟草野火病菌对春雷霉素的抗药性监测.     

不同烟草品种对云南烟草野火病菌的抗性鉴定

采用采自云南省不同地点、不同生理小种的24株烟草野火病菌对24个不同烟草品种及两个野生种黄花烟和长花烟进行抗病性鉴定分析。结果表明，不同抗性品种对不同生理小种的抗性反应差异显著，根据接种后不同烟草品种的形成的病斑直径，将其划分为4个等级：高抗、中抗、中感、高感。辽烟15，G28对于烟草野火病菌0，1号生理小种均表现为高感，而云南省大面积栽培的K326、红花大金元、云烟87等对于两个生理小种均表现为中感，而两个野生种黄花烟和长花烟均表现为高抗，可以作为烟草野火病抗性育种优先利用的种质资源。     

烟草野火病菌初侵染源的研究

为探明烟草野火病菌的初侵染源，应用SPA－ELISA，间接－ELISA反应试剂盒对从田间及温室中采集的土壤、烟株根围、田间杂草、种子等进行了检测，明确云南烟草野火病的初侵染源主要为种子和根部残体。     

烟草野火病的研究进展

 烟草野火病是世界普遍发生的一种病害,本文对该病害的病原、病害流行、致病机制及综合防治进行了综述。     

烟草野火病菌的快速检测

对采自云南各大烟区的烟草野火病菌株进行了分离、鉴定,用通过筛选致病力强的烟草野火病菌株为抗原,制备了烟草野火病菌特异性的抗血清,建立了一套快速检测烟草野火病菌的方法,制备了SPA-ELISA反应试剂盒,应用玻片凝集或协同凝集反应与SPA-ELISA反应试剂盒相结合的方法,使检测真正做到了简便、快速、灵敏、准确。     

不同烟草品种对云南烟草野火病菌的抗性鉴定*

 采用采自云南省不同地点、不同生理小种的24株烟草野火病菌对24个不同烟草品种及两个野生种黄花烟和长花烟进行抗病性鉴定分析。结果表明,不同抗性品种对不同生理小种的抗性反应差异显著,根据接种后不同烟草品种的形成的病斑直径,将其划分为4个等级：高抗、中抗、中感、高感。辽烟15,G28对于烟草野火病菌0,1号生理小种均表现为高感,而云南省大面积栽培的K326、红花大金元、云烟87等对于两个生理小种均表现为中感,而两个野生种黄花烟和长花烟均表现为高抗,可以作为烟草野火病抗性育种优先利用的种质资源。     

云南烟草野火病菌菌系分化研究*

 研究采用24个采自云南省各大烟区的烟草野火病菌对24个普通烟草品种及2种野生品种长花烟和黄花烟进行致病性接种试验。根据这26个烟草品种对烟草野火病菌株的抗性反应，将接种后形成病斑的直径进行聚类分析，筛选了一套烟草野火病生理小种的鉴别寄主。并以此为依据将24个病原菌株划分为两个生理小种，即0号和1 号,为抗病育种工作提供了依据。     

烟草野火病菌hrpZ基因的克隆及蛋白的原核表达

采用PCR方法从烟草野火病病原菌Psta218中扩增harpin编码基因hrpZ,将其克隆到原核表达载体pGEX-4T-1上,获得重组表达质粒pGEX-hrpZPsta。将重组质粒pGEX-hrpZPsta转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,得到重组大肠杆菌BL21/pGEX-hrpZPsta。经IPTG诱导得到14.7 kD的蛋白质。该蛋白质与其他已发现的harpins一样,能够使烟草等植物产生过敏性坏死反应、富含甘氨酸、热稳定以及对蛋白酶K敏感。     

云南省烟草野火病菌毒素的致病性评价*

 主要通过对烟草野火病菌菌株（Pseudomonas syringae pv. tabaci）致病力与其粗毒素毒力的相关性的研究，评价了烟草野火病菌毒素在致病过程中的作用。结果表明：①野火菌毒素毒力与其菌株的致病力呈极显著相关性，相关系数r达0.928；②高感和中感品种K326,云85对病原菌的感病性与对菌毒素的敏感性在P<0.05的水平上有相关关系；③从病斑处可以分离到该毒素，再接种能重现野火病症状；④抑菌物质对病原菌和病菌毒素的抑制作用相一致。     

拮抗菌Ata 28对烟草赤星病菌的抑制及种类鉴定

从烟草叶片上分离到的细菌Ata28经鉴定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）,通过平板对峙培养,测定其对不同致病力的烟草赤星病菌（Affernaria alternata （Fries）Keissler）均有拮抗作用,抑菌带的宽度达8．4mm;在温室中进一步进行盆栽控病试验,防治效果为75.8％．无菌滤液试验表明,拮抗菌Ata28的无菌滤液在一定浓度范围内均能有效地抑制赤星病菌菌丝生长,减少孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强．     

我国三烟区烟草黑胫病菌对霜霉威的敏感性测定

从我国主要烟区云南、贵州和山东烟草病株上分离到38个烟草黑胫病菌Phytophthora nicotianae var.nic-otianae菌株,采用菌落生长速率法测定了这些菌株对霜霉威的敏感性.结果表明:霜霉威对38个菌株的EC50值呈连续双峰(主峰明显)频次分布,分布在2493.3～19625μg/mL之间,均值为9688.7±1396.4 μ/mL;在离体条件下,烟草黑胫病菌对霜霉威的敏感性高,未出现敏感性下降的抗药性亚群体.频次分析表明,霜霉威对组成连续双峰频次分布主峰的25个菌株的EC50均值为7136.1±929.93μg/mL,可作为烟草黑胫病菌对霜霉威的敏感性基线.     

吉林省烟草野火病菌群体分子多态性分析

为研究烟草野火病菌的群体遗传多样性,采用正交试验方法,对5个多态性引物(REP,ERIC,BOX,J3,IS1112)的Rep-PCR反应体系分别进行了优化,同时优化了体系中的Mg2+、dNTP、rTaq酶等几个因素,并在此基础上对来源于吉林省不同地区的70株烟草野火病菌进行了分子多态性分析。结果表明:优化的PCR反应体系电泳图谱清晰,多态性丰富,重复性好,适合烟草野火病菌群体分子标记研究。通过聚类分析发现,吉林省烟草野火病菌群体存在分子多态性,在遗传相似系数为0.9时,70个菌株被聚为4个类群(G1~G4),其中G1类群最大(39个菌株,占55.71%),而G3类群最小,仅包括2个菌株。G1和G2类群分别包含了5个和3个亚群。不同类群和亚群的菌株地理来源存在多样性。     

烟草赤星病菌对菌核净的抗药性测定

为合理防治烟草赤星病,减少抗药性产生和农药残留,从云南省11个地州分离烟草赤星病菌菌株96株,就分离菌株对菌核净的抗药性进行了测定,结果表明,供试菌株中高抗菌株28个,中抗菌株39个,低抗菌株29个。不同来源的烟草赤星病原菌株的抗药性存在差异,以思茅、大理的菌株抗药性最高,昆明、红河、临沧抗药性最低。不同地州分离菌株高、中、低抗菌株的比例存在明显差别。大理永平昌街七昌村分离菌株AL208#抗药性最强,抗性倍数达20.30,玉溪市红塔区的菌株AL171#抗药性最低。96株烟草赤星病菌菌株对菌核净的EC50值平均为81.34 mg/L,范围在13.28~269.58 g/L。     

烟草野火病菌拮抗细菌的筛选及其应用研究

从牡丹江烟草科学研究所试验田采集不同品种的健康烟叶30份,利用稀释分离法分离到287株细菌,采用平板对峙法筛选出对烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv.tabaci)具有拮抗作用的菌株14株.拮抗性最好且稳定的菌株Y32经生理生化特性和16S rDNA测序鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).为测定拮抗细菌Y32在烟草叶片中的定殖能力,对Y32进行利福平抗性诱导试验.结果表明,利福平抗性诱导后该菌株对野火病菌的抑制作用显著低于原始菌株,并且在培养基上菌落呈透明状,无法计数,因此,利福平抗性标记不适于Y32在烟草叶片中的定殖能力研究.发酵优化试验结果表明,拮抗细菌Y32最佳实验室发酵配方为:氮源1%(酵母膏 蛋白胨=5 3),葡萄糖0.1%,NaCl 0.3%,KNO30.5%;最佳培养条件为:发酵温度28℃,培养基pH 7.0~7.5,接种量4%,装液量为250 mL三角瓶中装液50 mL.田间试验结果表明,发酵条件优化后Y32防效达到71.6%,显著高于发酵条件优化前和对照药剂甜叶桔,具有进一步研究价值.     

烟草赤星病菌生物学特性的研究

１９９１－１９９３年从长春等地采集的标本中分离得到Ａｌｌｅｒｎａｒｉａ菌株。经过对病菌的致病性，形态，生长温度，ｐＨ范围及对不同碳，氮源的利用等项目的测定，确定该病菌为Ａ．ａｌｌｅｒｎａｔａ（Ｆｒ．）Ｋｃｉｓｓｌｅｒ。是引起烟草赤星病的病原菌。病菌在５－３５℃均可生长，但以２５℃，４ｈ条件下萌发率可达１００％，病菌在９种不同的培养基上生长，其中燕麦琼胶培养基，ＰＤＡ，玉米粉琼胶培养基适合于菌丝生长     

拮抗菌Ata 28对烟草赤星病菌的抑制及种类鉴定

从烟草叶片上分离到的细菌Ata 28经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),通过平板对峙培养,测定其对不同致病力的烟草赤星病菌(Alternaria alternata(Fries) Keissler)均有拮抗作用,抑菌带的宽度达8.4 mm;在温室中进一步进行盆栽控病试验,防治效果为75.8%.无菌滤液试验表明,拮抗菌Ata 28的无菌滤液在一定浓度范围内均能有效地抑制赤星病菌菌丝生长,减少孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强.     

拮抗菌Ata 28对烟草赤星病菌的抑制及种类鉴定

从烟草叶片上分离到的细菌Ata 28经鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),通过平板对峙培养,测定其对不同致病力的烟草赤星病菌(Alternaria alternata(Fries)Keissler)均有拮抗作用,抑菌带的宽度达8.4 mm;在温室中进一步进行盆栽控病试验,防治效果为75.8%.无菌滤液试验表明,拮抗菌Ata 28的无菌滤液在一定浓度范围内均能有效地抑制赤星病菌菌丝生长,减少孢子萌发,且浓度越高,抑制能力越强.     

烟草赤星病菌与黑斑病菌生物学特性的比较

比较烟草赤星病菌和黑斑病菌基本生物学特性.结果表明:烟草赤星病菌和黑斑病菌的最适生长温度分别为25～ 30℃和20 ～ 25℃;pH6～9培养条件更有利于烟草赤星病菌的生长;烟草赤星病菌利用葡萄糖和蔗糖的能力明显大于黑斑病菌;两病原菌对硝酸铵、硫酸铵和干酪素的利用情况基本相同,利用能力大小依次为干酪素、硝酸铵、硫酸铵;...     

烟草野火病菌(Pseudomonas syringae pv. tabaci)对烟草细胞内5种防御酶系统的影响

定期测定了感病品种红花大金元接种烟草野火病菌后叶片内5种酶活性的动态变化，研究结果表明：烟草接种病菌后，SOD活性先上升，后在8d下降，低于对照；POD活性接种后在1d略低于对照，后上升较快，10d达到高峰，此后一直高于对照；PPO活性在接种后1d低于对照15.8%，但此后上升，16d达到高峰，18d下降低于对照；CAT活性变化与POD相似，接种1d低于对照，但此后一直高于对照，并于6d达到高峰，10d虽有所下降，但接着升高；PAL活性与CAT、POD变化相似，接种后1d活性低于对照28.3%，其后上升，10d达到高峰，是对照的2.11倍，并维持较高的水平。     

香蕉炭疽病菌和黑星病菌对丙环唑的敏感性基线

用生长速率法测定了杀菌剂丙环唑对香蕉炭疽病菌和香蕉黑星病菌的毒力,测定结果表明,丙环唑对2种病原真菌的有效中浓度EC50分别为(0 1976±0 0148)μg/mL和(0 0092±0 0006)μg/mL.