柞蚕抗菌肽D基因转化桉树培育抗青枯病株系的研究

通过二次正交旋转组合设计对尾叶桉叶盘愈伤组织分化培养基优化 ,获得尾叶桉 (Eucalyptusuro phylia)叶盘外植体的再生植株。将携带外源目的基因的根癌农杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)与尾叶桉U6无性系叶盘共培养 ,经愈伤组织诱导、卡那霉素筛选和植株再生 ,获得 2 0个小芽 ,再将小芽转入附加卡那霉素(Kam) 4 0 μg·mL- 1 的E3-B培养基中诱根 ,获得 8株存活且可再生的转化子。取转化苗叶片作胭脂碱合成酶活性检测电泳后呈阳性 ;分别以γ 32 p dCTP及地高辛标记柞蚕抗菌肽D基因作探针 ,与转化苗DNA作点杂交及Southern印迹杂交检测 ,结果均呈阳性。以上结果表明 ,柞蚕抗菌肽D基因已整合到尾叶桉基因组中。将从桉树青枯病重病区分离的强毒青枯菌 (Pseudomonasspp .)株 (9910 16 )以 1× 10 9cfu·mL- 1 浓度接种转化试管苗 ,以未经转基因的尾叶桉U6 无性系试管苗为对照 ,结果表明转化苗接种死亡率 5 6 7% ,对照死亡率为 86 7% ,由此可推出导入柞蚕抗菌肽D基因的尾叶桉转化苗明显提高了对青枯菌的抗性     

桉树的组织培养

前言桉树组织培养和细胞培养技术的成功,极大地显示出林分增产的潜力,随着这一先进技术的普及和提高,将为我国短周期工业用材林基地建设做出巨大贡献。这是完全可以预料的。工业用材林的发展和技术的进步推动了无性系育种和无性系造林的发展;无性系育种为工业用材林提供优良材料,无性系造林为短周期工业用材林的发展奠定了良好基础。1个无性系就是一个基因型,因而有高度的一致性,优良无性系的快速繁殖,是由1个优良基因型发展起来的无数个体,所以表现出遗传性状稳定,林相极为整齐,生长异常迅速。     

葡萄糖氧化酶基因对桉树的遗传转化

桉树(Eucalyptus spp.)为桃金娘科(Myrtle family)桉属,以其生长快、适应性强、用途广而被世界上百余个国家和地区广泛引种栽培.由于它是目前世界上重要的木纸浆原材料之一,在我国南方地区正以每年营造8万～10万hm2的速度发展,在我国造纸的木桨生产中有着极其重要的位置.     

尾叶桉胚状体植株诱导与增殖研究

本文报导了用尾叶桉种子下胚胎诱导体细胞胚胎发生，获得根苗齐全的胚状体再生植株，经过５～６代增殖培养，获得大量丛生苗，已完成移栽，炼苗的全套生产技术流程，是迄今世界松树组培由下胚轴产生胚状体小苗成功的第三例，在木本植物的同类组培成功研究中也是数例之一，在科学和林木良种快速选育与繁殖上有重要价值。     

桉树抗青枯病品系筛选技术的初步研究和应用

探索出用新的ＷＦＣ接种方法，对生产上应用的桉树优良品种品系进行苗期人工接各测定其抗病力，结合林区实际发病调查，认为室内用ＷＦＣ法接种发病率低于２５％的品系可直接应用于生产。接种发病率高的品系应用前要经过选育。本研究选出的编号为Ｄ－１，Ｃ－２，Ｅ－２的三个抗病无性系，经重病区试验其抗病力强，具推广应用前途。     

桉树品系对青枯病抗性及其稳定性的研究

通过剪顶包扎菌液接种、伤根淋灌菌液接种、 WFT培养接种测定结果与桉树当年新造林分青枯病自然发生率调查结果对比 ,青枯病菌对桉苗的致病力因接种方法不同而异 ,经模糊聚类分析表明 ,WFT接菌培养技术测出的结果更接近自然实际发病情况。试验表明 ,桉树不同品种、同一品种的不同种源、不同无性系 ,对青枯病菌的抗性不同。课题组通过 8年研究 ,在生产单位提供的 10 1个桉树品系中 ,已筛选出高抗品系 12个、抗病品系 14个、低感品系 2 6个。自 1994年起在粤、桂、琼三省区 ,生产上大面积推广这些高抗和抗病品 (种 )系 ,已直接造林 2万多 hm2 ,扩散面积更大 ,造林效果跟踪检查表明 ,这些林分的青枯病株率均在 1‰以下 ,受到生产者和经营者欢迎。试验和应用中发现部分抗病无性系随着在林木组培苗工厂连续繁殖使用年份增加其抗病性逐年出现下降 ,有些抗病无性系使用 3年以后 ,其抗病性就明显下降 ,值得引起重视     

不同因子对白桦组培苗生根影响的研究

本文通过一系列的对比试验,研究分析了培养然,激素,无性系及蔗糖等因子对白桦组培苗生根的影响。结果表明：１／２ＭＳ和ＷＰＭ为最佳培养基,培养基及无性系主要影响组培苗生根率的高低,而激素ＩＢＡ,ＮＡＡ及蔗糖的浓度则主要影响组培苗的根粗,根数及根长。     

EC21号桉树无性系的组织培养技术研究

阐述了 EC_(21)号桉树无性系快速繁殖的基本过程,通过外植体采集、消毒、诱导出芽、扩大繁殖、壮苗、生根、移栽等阶段,培育出完整的植株。     

柠檬桉的组培快繁技术研究

以柠檬桉优株带芽茎段为外植体进行组培快繁技术体系研究。结果表明：晴天＋流水冲洗1h＋0．1％HgCl2（3＋4）min为柠檬桉的最佳外植体采集处理方案。培养基添加VC20．0mg.L-1或PVP2．0g.L-1是褐变控制的有效措施,不同防褐化剂的效果为：PVP=VC〉AC〉DTT〉CA。改良MS＋6-BA1．0mg·L-1＋KT0．2mg·L-1＋NAA0．05mg.L-1是柠檬桉扩繁增殖的最适培养基;改良MS＋6-BA0．5mg.L-1＋NAA0．1mg.L-1是柠檬桉壮苗增殖的最适培养基。自然光培养,光照强度3000～3500Lux是柠檬桉增殖培养的最适光照条件。     

尾叶桉的组织培养及植株再生

研究了以尾叶桉(Eucalyptusurophylla)优树(U6无性系)无菌苗的叶子和茎段作为外植体诱导愈伤组织、丛生芽发生以及植株再生的过程。通过多种生长调节剂不同浓度组合的对比试验,确定了U6快繁体系的最适宜培养条件:(1)愈伤组织诱导培养基:MS 1-2mg/L2,4-D;(2)芽增殖培养基:MS 0.5mg/L6-BA;(3)生根培养基:1/2MS 2.0mg/LNAA。     

赤桉组培快繁技术研究

以赤桉优株的带芽茎段为外植体进行组织培养技术研究,成功建立了赤桉组培快繁体系。研究结果表明：改良MS是赤桉腋芽增殖启动培养的适宜培养基,启动率为77.3%。改良MS＋6-BA1.5mg·L-1＋NAA0.1mg·L-1是赤桉继代增殖培养的适宜培养基,20d后增殖系数可达4.17,平均芽长2.9cm。改良1/2MS＋IBA1.0mg·L-1＋NAA0.5mg·L-1是赤桉生根培养的最适培养基,生根率达99.5%。3000～6000lux是赤桉增殖的最适光照强度,1500～3000lux是其生根的最适光照强度。     

尾叶桉组织培养快速繁殖的研究

以顶芽或茎段为外植体 ,通过 4种基本培养基和生长调节剂不同浓度组合的对比试验 ,筛选出最佳增殖培养基为B1+2 0mg·L-16 -BA +1 0mg·L-1NAA ,生根培养基为B2 +0 5mg·L-1ABT1号。移栽基质选择红心土。     

灰桉(Eucalyptus cinerea)引种栽培的初步研究

本文对对引自澳洲的植物灰桉(Eucalyptus cinerea)进行了初步试验。结果表明,冬季40℃水浸种处理发芽率为最高31.6%。苗期生长需要充足的水分,而喜光性却是从苗期就开始显现。以带腋芽的茎段作外植体进行培养,在适宜的培养基上培养时不定芽的增殖可达1.4倍。     

蓝桉组织培养的研究

用蓝桉（Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓ）离体芽器官诱导培养，分化形成丛生芽，年繁殖系数３￣（１２）。０．１～０．５ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ或０．５～０．８ｍｇ／Ｌ的ＫＴ诱导外植体（带节茎段）腋芽萌动的效果最佳，诱导率分别达８０．３％和８１．５％。１．５～２０ｍｇ／Ｌ的６～ＢＡ或２０～２．５ｍｇ／Ｌ的ＫＴ分别与０．５～１．０ｍｇ／Ｌ的ＮＡＡ组合，对于促进腋芽分化形成丛生芽及继代培养中芽的增殖具有最佳效果。培养基中的无机盐浓度、蔗糖含量对蓝桉试管苗的生根具有显著影响；ＩＢＡ促进蓝桉试管苗的生根。至目前为止，在１／２ＭＳ无机盐培养基＋ＩＢＡ１．２～１．４ｍｇ／Ｌ＋Ｓ５ｇ／Ｌ中诱导生根，生根率最高可达２６．４％。     

巨桉组培育苗技术研究

以巨桉成龄树基部萌芽条的茎段为外植体,通过3种基本培养基和9种生长调节剂不同浓度组合的对比试验,筛选出MS＋6-BA0．4mg／L＋NAA0．2mg／L为诱导培养基,改良MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．3mg／L为继代培养基,B2＋ABT1号生根粉0．8mg／L为生根培养基。应用这些配方进行巨桉组培,芽增殖数达3．26倍,瓶苗生根率达98％,移植成活率90％以上,达到了工厂化苗木生产的要求。     

桉树外植体诱导褐变原因初探

桉树外植体诱导产生褐变的因子很多,在此只讨论不同无性系、不同木质化程度的茎段、不同的消毒处理、不同的光照对外植体褐变的影响。从试验结果得出:不同的无性系外植体产生褐变程度不同,采集半木质化或刚木质化的茎段,用0.1%HgCl2分两步消毒可以减轻褐变,在培养过程中采用全暗光的方法有效控制褐变,萌芽率也高。     

Plant regeneration by somatic embryogenesis in Eucalyptus spp.: current status and future perspectives

Forest tree improvement programs benefit from the emergence of new biotechnological strategies that complement plant developmental biology and discovery of genes associated with complex multigenic traits. Recently, significant progress has been made in the area of plant regeneration via somatic embryogenesis (SE) for economically important tree species (e.g. pines). These advances have opened up new scenarios for deployment of new high-performance clonally replicated planting stock to forest plantations and may also be a valuable tool for the development of efficient gene transfer techniques. Although high rates of plant propagation from axillary shoot proliferation can be achieved easily in many Eucalyptus species, even higher multiplication rates through SE have been recorded in other tree species. If the clonal propagation of Eucalyptus through SE proves to be an effective propagation method, it has the potential to meet the increasing industrial demands for high-quality uniform materials and to rapidly capture the benefits of breeding programs. Since 2002 a reproducible protocol for SE induction from mature zygotic embryos of E. globulus has been available. However, for SE to be useful in E. globulus improvement programs, the frequency of SE initiation, maturation, germination and acclimatisation needs to be improved and controlled. If this technology could be extended to elite germplasm, it would become an economically feasible tool for large-scale production and delivery of improved planting stock. This is one of the greatest current challenges in Eucalyptus tissue culture. In this review we update the most important aspects of SE in Eucalyptus with particular emphasis on E. globulus. We highlight both genetic control and the influence of different environmental factors in the SE process (e.g. medium composition, antioxidants, light and plant growth regulators), from induction to plant acclimatisation in both primary and secondary SE.     

邓恩桉的组织培养

为了满足人们对木材与木质纤维的需求,桉树已成为南方工业原料林的主要造林树种,并不断北移扩大栽植.因大多数桉树不耐寒,限制了许多速生桉树的北移栽植.邓恩桉(Eucalyptus dunnii)原产澳大利亚,抗寒,速生,树干通直,木质粗细均匀,耐干旱,抗病性强,用途广泛,可作刨花板材、纸浆材、木片材等,已成为推广扩大桉树人工林种植范围的首选树种,抗寒性是选择该树种向北引种的重要因子.但从目前市场形势看,国内大面积种植邓恩桉还有很多问题尚待解决.由于邓恩桉在澳大利亚分布有限,产种量少,而国内邓恩桉难以开花结实,不能生产种子,种子价格昂贵,纯度较高的种子平均售价高达7万元·kg-1,且遗传性状不稳定,严重制约了该树种的发展.因此,进行邓恩桉组培快速繁殖对开发和利用桉树资源具有重要的意义.