热激启动子控制的FT基因诱导杨树早期开花体系的优化

为实现杨树早期开花,缩短育种周期,利用农杆菌介导的转化方法,探讨影响热激启动子控制的FT1基因转化白杨派杂种无性系的因素,优化其转化条件,并实现FT1基因的转化,采用热激诱导方法诱导2～3个月大的转基因植株早期开花。结果表明:叶盘转化前的预培养、菌液浓度、侵染时间及共培养时间对卡那霉素抗性植株再生率的影响均达到极显著水平;叶盘在愈伤组织诱导培养基上暗培养6天,然后用活化至OD600=0.5的菌液侵染60min,再在愈伤组织诱导培养基上共培养2天,该条件下FT1基因转化白杨派杂种的卡那霉素抗性植株再生率可达29.84%;37℃每天1h持续热激3周可使FT1基因顺利表达,促进转基因植株开花;热激植株大小是影响转基因植株热激诱导开花的限制因素,低于20cm的植株不能诱导开花;热激诱导可产生相对较多的正常花器,但花器变异仍然十分广泛。     

桉树转基因研究进展

综述了桉树转基因研究中,愈伤组织再生、体胚再生、原生质体再生等的再生体系的建立,农杆菌介导法、基因枪转移法等转基因主要方法以及转化植株筛选及检测的研究进展。探讨了桉树转基因育种发展的限制因素,提出了进行栽培无性系的再生技术、转化技术及转基因育种的完善,多种外源目的基因的转化,加强对外源基因表达的时空调控以及建立转基因桉树安全评价系统的发展建议。     

农杆菌介导慈竹4CL基因遗传转化梁山慈竹

以梁山慈竹2种类型成熟胚的愈伤组织为材料,采用农杆菌遗传介导的方法,将已构建好的具有降低木质素含量的PBI121-4CL-RNAi表达载体导入愈伤组织,探讨愈伤组织预培养时间、菌液浓度、侵染时间、共培养时间和温度对遗传转化的影响。研究结果表明,淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织是较好的遗传转化材料。以在愈伤组织培养基上预培养8天的淡黄色、颗粒状、疏松易碎的胚性愈伤组织为转化受体,在菌液浓度为OD600=0.05的EHA105中侵染20min后,在25℃、黑暗条件下共培养2天(共培养基表面加一层无菌滤纸),在含有卡那霉素为55mg.L-1的抗性筛选培养基上筛选30天,抗性愈伤组织率为90%,经PCR检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹愈伤组织中。抗性愈伤组织在芽诱导培养基上诱导30天,可获得丛生芽,待丛生芽长至3～5cm后,在生根培养基上经过20～30天的诱导,可产生1～8条根,获得再生植株。经PCR检测,慈竹4CL基因已导入梁山慈竹再生植株中,获得了转基因植株,转化效率为9%。RT-PCR检测结果表明,转4CL基因的梁山慈竹愈伤组织和植株的内源4CL基因的表达受到抑制,且表达量比对照明显降低。     

农杆菌介导高羊茅基因转化体系的建立

以高羊茅(FestucaarundinaceaSchrebb)品系宾哥(Bingo)为材料,建立了农杆菌介导的基因转化方法。高羊茅种子在9mgL-12,4-D作用下,获得胚性愈伤组织。愈伤组织经农杆菌侵染,在30和50mgL-1的潮霉素浓度梯度下筛选,得抗性愈伤组织。组织化学染色法证实,uidA基因在抗性愈伤组织中表达:抗性愈伤组织在分化培养基中分化得到转基因植株。PCR、Southern杂交法证实外源基因已导入到高羊茅植株中。图5参37。     

不同植物生长素对桉树不同无性系组培生根影响的试验

从再生植株的途径来看 ,不同激素水平组合对愈伤组织诱导、不定芽的发生和根的形成起着重要的作用。通过不同生长素的选择对不同桉树无性系组培生根的影响试验 ,选出 3种无性系最佳生根配方     

三种冷季型草坪草愈伤组织再生体系的建立

对9个不同品种冷季型草坪草进行了愈伤组织诱导及植株再生实验,结果表明:选用CC或NB培养基都能使其愈伤组织出愈率与植株再生率得以提高;2,4-D诱导浓度(2 mg/L)均高于水稻等其它禾本科植物;在分化过程中,6-BA的浓度以2 mg/L为最佳.     

橡胶树胚珠离体培养与体胚植株再生的研究

对8个品种橡胶树未授精胚珠离体培养试验结果,8个品种都诱导出愈伤组织,其中6个品种诱导出胚状体,3个品种获得体胚植株。试验结果表明:不同品种橡胶树未授精胚珠在诱导愈伤组织、继代增殖、胚分化和植株再生培养存在很大差异,热研8-79、云研73-46愈伤组织的诱导率高,但未能分化出胚状体;云研73-477、RRII105等品种,愈伤组织的诱导率低,但继代增殖培养时能诱导出新鲜的胚性愈伤组织,获得体胚植株;云研77-2、云研77-4诱导出的是畸形胚,未获体胚植株,但其胚状体诱导率比用花药诱导的高,有希望通过进一步研究,优化培养方法、培养条件,最终构建出这两个抗寒高产优良品种的体胚植株再生体系。     

Effect of Leaf Position and Pretreatment on the Regeneration of an Eucalyptus grandis × E.tereticornis Clone

以巨细桉无性系DH201-2叶片为材料进行植株再生研究,揭示叶片位置和切除方式对愈伤组织诱导和植株再生的影响,结果表明:叶片位置对叶片培养死亡率与叶片植株再生率、叶片植株再生芽数影响显著,对愈伤产生率基本没影响.以组培生根苗第1～6片叶作外植体进行愈伤培养与植株再生培养效果较好,以第1～2片叶作外植体效果最佳,第7～8片叶不宜作为外植体培养;拉下或剪下全叶两种方式,植株再生率与再生芽数较高,全叶剪除1/3叶尖方式效果最佳,能有效加速叶片的愈伤生长及植株分化,提高叶片植株再生率及再生芽数.全叶剪除叶柄及1/3叶尖方式效果最差,植株再生率、再生芽数效果最低.培养50d,愈伤植株再生率及再生芽数达到高峰期.     

香樟未成熟合子胚体胚发生及植株再生研究

以香樟的未成熟幼胚为外植体进行诱导体胚发生影响因素的研究.成功地从香樟幼胚中诱导出胚状体并获得再生植株,MS为基本培养基,蔗糖是最佳的碳源.经2年对初生胚的继代培养,获得胚性愈伤组织;胚性愈伤组织经体胚诱导、体胚成熟、体胚萌发3个过程的诱导后能够获得再生植株.     

桉树的微繁殖和组织培养

微繁殖具有的短周期遗传增益潜力，可实现所选林木基因型的高繁殖速率。目前，已从种子、实生苗、茎、花和木块茎等外植体建立无菌培养；至少３０个桉树种的各类组织材料诱导愈伤培养成功；从愈伤组织获得再生植株的也有１２种桉树；通过腋芽增殖，或在节上发生不定芽增殖都获得成功。以琼脂为固着剂含低生长素／分裂素比率的ＭＳ培养基被广泛的用于茎尖的分化；玻璃苗和苗的老化问题依然存在；在培养基中加入赤霉酸能刺激茎的伸长，各类培养基被用于离体物根的启动发生；悬浮培养和原生质体培养都已获成功，并从原生质获得再生植株；离体培养技术最近还被用于桉树的基因转移工程。     

榉树叶器官再生植株技术

以榉树（Zelkova schneideriana）叶片为外植体,先诱导愈伤组织的产生,再诱导愈伤组织分化出芽,研究榉树叶器官再生植株技术,结果表明：榉树叶片诱导出愈伤组织很容易,幼嫩叶片的诱导率可达到90％以上,而由愈伤组织诱导芽分化则相对较难,仅有10％左右的诱导率,老叶片诱导的愈伤无法再分化出芽。     

4个桉树无性系愈伤诱导和分化

桉树(Eucalyptus L’Hérit.)是世界三大树种之一,随着生物技术的发展,桉树转基因研究正以前所未有的速度发展,而不同的种、无性系胚性愈伤诱导的难易和植株再生能力的强弱直接影响转基因工程实施的进程。尾巨桉(E.urophylla S.T.Blake×E.grandis W.Hill ex Maiden)无性系DH3229、巨尾桉     

叶片位置和切除方式对巨细桉DH201 2再生的影响

以巨细桉无性系DH201-2叶片为材料进行植株再生研究,揭示叶片位置和切除方式对愈伤组织诱导和植株再生的影响,结果表明:叶片位置对叶片培养死亡率与叶片植株再生率、叶片植株再生芽数影响显著,对愈伤产生率基本没影响。以组培生根苗第1～6片叶作外植体进行愈伤培养与植株再生培养效果较好,以第1～2片叶作外植体效果最佳,第7～8片叶不宜作为外植体培养;拉下或剪下全叶两种方式,植株再生率与再生芽数较高,全叶剪除1/3叶尖方式效果最佳,能有效加速叶片的愈伤生长及植株分化,提高叶片植株再生率及再生芽数。全叶剪除叶柄及1/3叶尖方式效果最差,植株再生率、再生芽数效果最低。培养50 d,愈伤植株再生率及再生芽数达到高峰期。     

粗皮桉再生系统的研究(英文)

该研究在国内外首次报导了粗皮桉的再生系统 .利用粗皮桉的外植体通过两种不同的再生途径建立了高效的再生系统 .首先探讨了粗皮桉的下胚轴和子叶的体细胞胚胎发生 .研究发现 ,下胚轴和子叶在含有 2 ,4 D(添加有BA或激动素 )的培养基上可诱导三种典型不同的愈伤类型 .其中 ,来源于下胚轴的颗粒状的、松脆的胚性愈伤在分化培养基上可获得高频率的再生小植株 .讨论了不同类型的愈伤组织和其对应的分化再生率之间的关系 .此外 ,本研究探讨了来源于粗皮桉的下胚轴、子叶及成熟叶片在添加有一系列BA和NAA的不同浓度组合的B5培养基上的器官发生途径 ,三种不同的外植体在不同的再生培养基上的最高再生频率不同 ,其中成熟叶片、子叶和下胚轴的最高再生率逐渐提高 ,分别为 4 1 6 7%、6 6 6 7%和 83 33% .该文还讨论了两种不同再生系统的意义     

红千层愈伤组织诱导及植株再生

以茎段、芽和叶片为材料,研究了红千层愈伤组织诱导及植株再生的方法。结果表明:红千层的茎段、芽和叶片均可诱导出愈伤组织,通过继代培养愈伤组织可发育成绿色和粉红色2种类型,其中绿色、致密的愈伤组织可以分化出不定芽。培养基1/2M S 6-BA 1.0 m g/L NAA 0.1 m g/L适宜愈伤组织不定芽的诱导,在培养基1/2M S IBA 0.25 m g/L上试管苗的生根率可达95%。     

Plant regeneration of transgenic China Rose (Rosa chinensis Jacq.) from organogenic callus

Different types of explants of China Rose (Rosa chinensis Jacq.) were placed on a Schenk and Hildebrandt (SH) medium containing L-proline and 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D). Organogenesis was observed on callus induced from both whole leaf and petiole and the high frequency of organogenesis was observed on the whole leaf. Shoot regeneration was obtained via organogenesis. The effects of pH and concentrations of antibiotics on maintenance of organogenesis capacity were investigated in subsequent subcultures. The pH value was found to play a critical role in retaining organogenesis capacity. The binary vector pBI121, carrying the gus gene coding forβ-glucuronidase (GUS) and the nptⅡgene mediated by Agrobacterium tumefaciens, was used for transformation of organogenic callus using 50 mg·L-1 geneticin for selection. Six regenerated lines showed GUS activity, of which five were verified for the presence of nptⅡgene by PCR.     

红千层愈伤组织诱导及植株再生

以茎段、芽和叶片为材料,探讨了红千层愈伤组织诱导及植株再生的方法.结果表明:红千层的茎段、芽和叶片均可诱导出愈伤组织,通过继代培养可发育成绿色和粉红色2种类型的愈伤组织,其中绿色、致密的愈伤组织可以分化出不定芽;培养基1/2M S 6-BA 1.0 m g/L NAA 0.1 m g/L适宜愈伤组织不定芽的诱导,在培养基1/2M S IBA 0.25 m g/L上试管苗的生根率可达95%.     

雷公藤胚性愈伤组织再生植株的增殖及其稳定性

以雷公藤胚性愈伤组织为材料,研究继代培养时间对植株再生和基本培养基、生长素浓度及其与细胞分裂素组合对再生苗增殖的影响.结果表明:在继代培养过程中,愈伤组织再生率和再生苗数经历了一个由低到高再到低的过程,以8个月到1年之间的胚性愈伤组织的再生能力最强,达100%,每块愈伤组织平均形成的芽数也比较多,雷公藤胚性愈伤组织在继代20个月后已经丧失再分化能力.愈伤组织再分化过程易发生变异,从叶形上看,再生苗出现6种类型的变化.再生苗茎段增殖以1/2MS为基本培养基附加2.0 mg·L-1IBA为好,以1/2MS+2.0mg·L-1IBA+O.5 g·L-1活性炭的培养基有利于芽苗生根培养,生根率达100%.移栽至珍珠岩与腐殖质土(1:1)的混合基质中成活率达96%.     

尾巨桉愈伤组织诱导与植株再生研究

分别以尾巨桉幼苗的茎段和叶片作外植体进行愈伤组织诱导、不定芽分化及植株再生培养研究。结果表明：在改良H培养基上茎段和叶片两种外植体均能诱导出愈伤组织,7-10d产生愈伤组织,愈伤组织诱导率达90%以上。在改良H＋6-BA1.0mg·L-1＋NAA0.5mg·L-1＋蔗糖5%培养基上,茎段愈伤组织的分化率达22.2%,每块愈伤组织有效芽数达10-20个,并且诱导出了根芽齐全的单生型小苗。     

外植体及培养基对欧洲白桦器官再生的影响

白桦再生不定芽以通过愈伤组织再生不定芽的间接方式为主,无菌试管苗的茎段、根、叶片均可作外植体诱导不定芽再生。不同的基因型其不定芽再生的难易程度不一样。无性系2/86比G1、4N容易诱导愈伤组织进而诱导不定芽发生。诱导无性系2/86茎段不定芽分化的适宜基本培养基为WPM,根段为MCM,叶片为MS。不同外植体不定芽再生能力也不同,叶柄和茎段最容易诱导愈伤组织和不定芽分化,根较难诱导。