兽医实验室酶联免疫吸附试验操作要点

酶联免疫吸附试验(ELISA)是兽医实验室常用检测方法,具有灵敏度高、特异性强以及操作简便等特点。为了刚好地使用ELISA方法进行疫情检测以及疫病诊断,本文总结了常见ELISA试验各个操作步骤的注意事项,为广大实验员提供获得更准确有效的实验结果提供参考。     

阻断酶联免疫吸附试验检测赤羽病

赤羽病(Akabanedisease)又称阿卡斑病,是牛、羊的一种以流产、早产、死胎、胎儿畸形、木乃伊、新生胎儿发生关节弯曲积水性无脑综合症为特征的病毒性传染病。本病的病原赤羽病病毒是布尼安病毒科(Bunvaviridae)、辛波(Simbu)病毒群的成员之一。最早在澳大利亚暴发,后在日本、美国、韩国等国也分离到该病毒。本病的流行对养牛、养羊业的发展构成巨大的威胁,因此该病是我国从澳大利亚进口奶牛必须检测的七种疫病之一。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性鼻炎抗体

应用聚苯乙烯塑料微量滴定板作为固相载体，辣极过氧物酶标记的羊抗鸡IgG为第二抗体，邻苯二胺为底物建检测鸡传染性处炎抗体的间接酶联免疫吸附试验，对大庆市A、B、C三个种禽场的鸡群抽样采血检测，结果在被检的154份血清样品中，IC抗体阳性血样为35份，阳性检出率为22.8%，该方法具有快速、简便、敏感、特异等优点，适合于临床诊断和大批量样品检疫。     

间接酶联免疫吸附试验显色系统主要影响因素的探讨

酶联免疫吸附试验（ELISA）易受多种因素影响,其中包括显色系统。本文就ELISA常用的四甲基联苯胺（TMB）显色系统的成份、含量及反应条件对ELISA显色状态的影响进行了探讨,制订了一种通用的调整包括pH值、底物成份及含量、反应时间等在内的显色系统参量的方法,应用该方法为确定适用于任一特定ELISA的显色系统以及建立稳定的ELISA体系奠定了基础。     

兽医实验室酶联免疫吸附试验操作要点

1样品的基本知识主要介绍样品采集、处理以及保存的知识,ELISA测定样品很多,如血清、尿液、唾液、排泄物等。部分样品可直接开展ELISA检测,比如血清;而部分样品则需要经过预处理,比如粪便。兽医实验室一般根据常规方式采集样品,禽类采心脏、翅静脉血的方式;猪采前腔静脉等处血;羊采颈静脉血;牛采颈静脉、尾静脉血。将血清分离时,避免出现溶血°现阶段,ELISA试剂盒多数使用的辣根过氧化物酶作为标记,红细胞溶解就会释放出较多的过氧化酶活性物质,在ELISA检测中,溶血会造成非特异性显色,导致假阳性,最后很难得到精确的检测结果。     

酶联免疫吸附（ELISA）法测定生猪尿液中的沙丁胺醇

将标准品、样品和和酶标记物一并加入到微孔板中孵育,样品中的游离沙丁胺醇与酶标记的沙丁胺醇竞争结合酶标板微孔中固定相化的沙丁胺醇特异性抗体,通过清洗步骤洗掉未结合的酶标记沙丁胺醇,再通过酶的专一性显色剂显色,微孔显蓝色,加入反应终止液使颜色由蓝色转为黄色。在450nm处测量吸光度（OD）值,并设置标准曲线,通过标准曲线测定样品中沙丁胺醇的含量,结果显示：OD值的大小与样品中沙丁胺醇的含量成反比。     

间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清4型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究

应用超声波裂解珐制备的血清4型鸭疫里默氏杆菌(RA)裂解物作为抗原包被酶标板，成功建立了4型RA抗体检测的间接ELISA法。     

酶联免疫吸附(ELISA)法检测饲料中黄曲毒素B1的探讨

利用三氯甲烷对黄曲毒素B1有较强选择性作用的特点，用它作为黄曲毒素B1的提取液，对浓缩饲料和成分较复杂的配混合饲料进行纯化处理，使测试结果的准确性与重复性都得到提高，取得令人满意的结果。     

诊断猪囊尾蚴病的酶联免疫吸附试验

猪囊尾蚴病又称为猪囊虫病 ,对病猪生前诊断的方法虽然很多 ,但是检出率高、特异性强、稳定性好的方法当推酶联免疫吸附试验 ,简称 ELISA。该法由我校于 80年代建立 ,后来在推广应用中又不断改进 ,形成了现在的操作方法 ,曾获农业部科技进步奖 ,农业部动物检疫规程委员会也通过     

牛布氏杆菌病热酚法脂多糖抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)的研究

采用世界动物卫生组织(OIE)推荐的热酚法提取的脂多糖(LPS)作为抗原，建立了牛布氏杆菌病的ELISA方法，对45份血清进行检测，证明本ELISA方法灵敏性较高，经阻断试验和交叉试验，证明特异性较好。同时对建立的ELISA方法进行了改进，使制备的牛布氏杆菌ELISA试验试剂盒能在4℃条件下长期保存，具有良好的稳定性和重复性。     

牛结核ELISA方法的改进和优化研究

在传统ELISA基础上，对ELISA板的稳定系统、血清稀释液的显色系统、ELISA底物等流程进行了改进，建立了牛结核ELISA方法。阻断试验和交叉反应结果表明该ELISA方法具有较好的特异性；不同人多次重复试验，证明本方法的重复性好。     

牛布氏杆菌病ELISA快速诊断试剂盒与其它三种检测方法比较

牛布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的人畜共患传染病,是国际贸易检疫中必检的传染病。近几年来,随着养牛业的发展,牛及其制品调运越来越频繁,致使牛布氏杆菌病疫情在一些地方有所抬头。加强牛布氏杆菌病监测,扑杀阳性牛是控制牛布氏杆菌病的关键措施之一。经典的牛布氏杆菌病监测实验室方法有SAT、RBT、BPAT、CF等,这些方法有的特异性和敏感性不高,操作繁琐,在实际应用中不方便。随着生物技术的发展,新的快速方便的检测技术不断出现,酶联免疫试验(ELISA)是近几年研制出来的一种快速检测技术。BBAT、CF、ELISA三种检测方法是世界动物…     

酶联免疫吸符试验(ELISA)与平板凝集反应(RBPT)检测鹿布氏杆菌病的对比研究

在 1 995～ 1 997年间本文作者进行了 ELISA法与平板检测鹿布氏杆菌病的研究 ,研究结果表明 :ELISA法比平板法敏感。通过现场 30 0头份鹿血清的检测结果表明 ,前者比后者的检出率高 5.34%。前者的阳性血清中完全包括后者的阳性血清 ,同时在后者的可疑和阴性血清中 ,也可检出 ELISA阳性。     

牛结核γ-干扰素ELISA检测方法在检疫工作中的应用

为评价牛γ-干扰素ELISA检测方法检测牛结核的效果及国产试剂盒的检测效果,本试验首先将国产试剂盒与Prionics试剂盒对42份相对阳性的样品和105份相对阴性的样品进行对比研究。然后对5个规模化牛场的3000头奶牛首先进行国产单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验,3天后选取皮内变态反应阳性和可疑及部分阴性牛共418头,进行牛γ-干扰素试验。结果国产试剂盒对阳性和阴性样品的检测敏感性和特异性分别为95.2%和100%,与Priobics试剂盒的符合率为99.3%。表明国产试剂盒与进口试剂盒的检测能力一致,牛γ-干扰素检测方法准确可靠。5个牛场的3000头奶牛单纯结核菌素颈部皮内变态反应试验阳性为138头,可疑105头。γ-干扰素试验对418头奶牛的检测,其中阳性74头,与颈部皮内变态反应（可疑牛暂时视为阴性）的符合率为60.5%。     

不同包被液对ELISA检测五号病病毒抗体的比较试验

０．０５ＭｐＨ９．６碳酸盐缓冲液和０．０５ＭＰＨ１３ＮａＯＨ溶液作为包被液，分别用于间接ＥＬＩＳＡ检测乙型五号病病毒抗体。结果表明，用０．０５ＭＰＨ１３ＮａＯＨ溶泡包被可完全灭活五号病病毒抗原而用０．０５ＭＰＨ９．６碳酸盐缓冲液却有８７％的五号病病毒抗原未被杀灭；用于检测时，以０．０５ＭＰＨ１３ＮａＯＨ溶液为包被液在敏感性及检测结果的梯度方面都优于用０．０５ＭＰＨ９．６碳酸盐缓冲液。     

蓝舌病灭活疫苗免疫羊ELISA和琼扩监测比较试验

用19只绵羊（注苗前BTV琼扩和ELISA均为阴性）注射BTV灭活苗后7～139天的血清进行BTVELISA和琼扩平行试验，结果表明，注苗后7～30天11只试验丰ELISA阳性，注苗40天13只羊ELISA阳性，注苗90天以后全部试验羊只均为ELISA阳性，而琼扩试验则始终为阴性结果。     

牛病毒性腹泻病毒抗原捕获ELISA方法的建立

用兔抗牛病毒性腹泻病毒(BVDV)多抗作为包被抗体,BVDV NS3单克隆抗体作为捕获抗体,建立了检测BVDV抗原的捕获ELISA方法,对各项反应条件进行优化,最终获得最佳工作条件为兔多抗1∶1 600稀释包被,NS3单抗1∶2 000稀释,酶标抗体工作浓度为1∶4 000稀释。特异性和敏感性试验结果表明,该方法对牛轮状病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛分支杆菌无特异性交叉反应,其最低可检测7.9×103个TCID50的病毒量,与RT-PCR方法的相比较,符合率为100%。所建立的BVDV抗原捕获ELISA方法快速、特异、敏感,可用于BVDV抗原的检测。     

单克隆抗体ELISA检测犊牛粪便中冠状病毒抗原

用两株单克隆抗体混合后包被ＥＬＬＩＳＡ微孔板，加牛冠状病毒抗原，加经白陶土处理过的兔抗牛冠状病毒免血清，再加上辣根氧化物酶标记的羊抗兔ＩｇＧ抗体，加底物质显色间接ＥＬＩＳＡ检测牛冠状病毒抗原获得成功。用此方法检测细胞培养的牛冠状病毒上清液，其敏感度高出血凝试验（ＨＡ）８倍，从武汉市附近３个奶牛场采集犊牛腹泻粪便１０５份，用单抗ＥＬＩＳＡ检测牛冠状病毒抗原，共检出阳性３６份，并与血凝及血凝抑制试验，     

ELISA一步法快速检测牛奶中三聚氰胺的研究

在制备三聚氰胺单克隆抗体的基础上建立了一种用于检测牛奶中三聚氰胺含量的间接竞争酶联免疫检测方法,采用一步法操作,评估了方法的回收率、准确度、精密度和特异性,并利用液相色谱―串联质谱法进行了盲样确证试验。结果显示,该方法的线性检测范围为10~810 ng/mL,灵敏度为10 ng/mL,回收率为84.0%~90.0%,同类似物交叉反应率均小于0.1%。本试验建立的ELISA一步法能满足牛奶中三聚氰胺的检测要求。