解剖采集的珠母贝精子的激活条件

解剖成熟珠母贝（Pinctada margaritifera)并采集其精子，在不同pH、盐度和温度条件下进行激活实验。结果显示，水温25℃、盐度34、pH8.5以下时，珠母贝精子的激活率与活力均很低，pH9.0-10时激活率与活力均较高，pH9.5时的激活率最高；在水温20℃，盐度34时珠母贝精子只能在pH9.5-10激活，且激活率与活力均比25℃时低。在水温25℃，pH9.5时，精子在盐度10-45能激活，盐度25-35时激活率和活力很高；在水温20℃,pH9.5时，精子只能在盐度20-40时激活。当盐度相同，20℃时的激活率与活力比25℃时低，在pH9.5或10的氨海水中，珠母贝精子在水温5-45℃时能激活，在25-30℃时激活率较高。当温度相同，pH9.5时的激活率比pH10.0时高。解剖得到的珠母贝精子的适宜激活pH9.5、适宜盐度为25-35、适宜温度为25-30℃。     

企鹅珍珠贝不同组织同工酶表达的差异

采用垂直板聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳对企鹅珍珠贝[Pteria penguin (Roeding)]的消化盲囊、鳃、外套膜、足部肌肉和闭壳肌肌肉5种组织中的过氧化物歧化酶(SOD)、酯酶(ESF)、苹果酸脱氢酶(MDH)、苹果酸酶(ME)、乳酸脱氢酶(LDH)和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH)同工酶的表达变化进行比较研究。结果表明，企鹅珍珠贝组织内的这6种同工酶存在不同程度的组织特异性，其位点的表达与否和酶活性的强弱方面都表现出明显的组织差异。企鹅珍珠贝的SOD、ESF同工酶在消化盲囊中有较高活性，而MDH、ME在闭壳肌中活性较高。研究中讨论了这些差异与组织生理功能的相关性。     

温度和盐度对企鹅珍珠贝清滤率、滤食率、吸收率的影响

采用实验生态学方法研究了温度和盐度对企鹅珍珠贝清滤率、滤食率、吸收率的影响,结果表明,(1) 在盐度28.3～29.1条件下,温度对企鹅珍珠贝的清滤率、滤食率和吸收率产生极显著的影响(P＜0.01);在实验温度(14～32 ℃)范围内,随温度的升高,企鹅珍珠贝的清滤率、滤食率和吸收率增大,29 ℃时均达峰值,分别为0.87 L/h、4.17 mg POM/h和84.01%;温度为32 ℃时,企鹅珍珠贝的清滤率、滤食率和吸收率较29 ℃时均下降,但3个生理指标仍处于较高水平,表明企鹅珍珠贝属典型热带和亚热带品种,表现出对高温的较强适应性;23～32 ℃为企鹅珍珠贝较适宜摄食温度,29 ℃左右为该贝的最佳摄食温度。(2) 在温度27.4～27.8 ℃条件下,盐度对企鹅珍珠贝的清滤率、滤食率和吸收率影响极显著(P＜0.01);在实验盐度(19～37)范围内,随盐度的升高,企鹅珍珠贝的清滤率、滤食率和吸收率增大,盐度为31时均达最大值,分别为0.36 L/h、1.87 mg POM/h和76.95%;盐度为34和37时均下降;盐度为34时,3个摄食生理指标仍呈现较高水平,表明企鹅珍珠贝属典型的狭盐性贝类,表现出对高盐的较强适应性;企鹅珍珠贝较适宜的摄食盐度范围为25～34,最佳摄食盐度为31左右。     

广东雷州流沙湾养殖企鹅珍珠贝多毛类寄生虫病的调查

对流沙湾养殖的企鹅珍珠贝(Pteria penguin)多毛类寄生虫病进行了调查。结果显示,锥形笼养殖2~4年的企鹅珍珠贝母贝多毛类寄生虫病感染率为39.13%~44.98%,开放式养殖2~4年为26.6%~35.63%,同一养殖方式各龄母贝多毛类寄生虫病感染率之间差异不显著(P>0.05);养殖时间两年时,多毛类寄生虫病的感染率与养殖方式之间存在极显著差异(P<0.01);养殖时间3年和4年时,多毛类寄生虫病的感染率与养殖方式之间存在显著差异(P<0.05)。锥形笼养殖的企鹅珍珠贝左壳较易感染多毛类寄生虫病。企鹅珍珠贝感染多毛类寄生虫病后,其生长与健康贝相比,无显著差异(P>0.05)。     

企鹅珍珠贝珍珠培育技术的研究现状

本文介绍了企鹅珍珠贝的生物学特性,对国内外企鹅珍珠贝人工育苗、养殖、育珠、遗传和病害防治技术研究现状进行了综述,提出了研究建议。     

企鹅珍珠贝游离珍珠颜色与珍珠规格的相关性

在海南省陵水黎族自治县黎安港选择1.5龄企鹅珍珠贝插核培育游离海水珍珠,20个月后收获优质游离珍珠43颗。全部43颗珍珠的聚类分析结果显示,它们共聚为3个类群,类群彼此间珍珠的直径、珠层厚度、重量以及与金珠的色差均存在显著差异;第1类和第2类群珍珠的明度L值、黄蓝特征b值以及与白珠的色差相似,而且均与第3类珍珠之间存在显著差异;第1类和第3类珍珠的红绿特征a值相似,而且均与第2类珍珠之间存在显著差异。相关分析结果显示,珍珠颜色的L值与珍珠的直径、珍珠质层厚度以及珍珠的重量之间均存在极显著的负相关关系,相关系数分别为-0.567、-0.617和-0.523;a值和b值均与珍珠的直径、珍珠质层厚度以及珍珠的重量之间没有显著的相关性。珍珠的直径、珍珠质层厚度、珍珠的重量与白珠色差以及金珠色差之间都有极显著的正相关关系。     

企鹅珍珠贝GLUT1 基因全长cDNA 克隆及其对葡萄糖的表达响应

葡萄糖转运蛋白(GLUTs)是能量代谢的关键因子,为了探索GLUT1(glucose transporter type1)在企鹅珍珠贝(Pteria penguin)中的功能,开展了企鹅珍珠贝GLUT1基因的克隆与功能研究。利用RACE技术克隆出企鹅珍珠贝GLUT1基因,并命名为PpGLUT1。该基因cDNA全长为2 068 bp,编码522 个氨基酸,有2个跨膜螺旋区,N端和C端都在胞质侧,分子量为57.226 4 kD,理论等电点为5.17。不同组织荧光定量结果表明,在肠和外套膜中表达量最高,闭壳肌中的表达量显著低于其他组织。0.5 gmL- 1的高质量浓度葡萄糖注射实验表明,在注射后30 min内,肠PpGLUT1表达量升高,在30 min之后表达量逐渐降低,注射后第2小时表达量最低。不同浓度葡萄糖注射实验表明,当葡萄糖质量浓度为0.1～0.4 gmL-1时,PpGLUT1表达量逐渐上升;质量浓度为0.4 gmL-1 时,PpGLUT1表达量最高;大于0.4 gmL-1之后,表达量逐渐降低。上述结果表明,企鹅珍珠贝PpGLUT1主要在肠和外套膜表达, 并对葡萄糖注射有表达响应,可能在上述组织的葡萄糖转运过程中发挥作用。     

响应面分析法优化黄鳝精子激活条件

在单因素试验的基础上,根据Box-Behnken的中心组合实验设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法,建立了黄鳝精子激活条件的二次多项数学模型,并以黄鳝精子激活百分比为响应值作响应面和等高线,得到黄鳝精子激活的优化条件:盐度为0.2,pH值为7.4.K+:Na+浓度为2:1.在此条件下,黄鳝精子的激活效果最好,实际激活百分比为97.45%.     

企鹅珍珠贝早期养殖生长性状的增长规律及生长曲线拟合研究

该研究对海南新村港养殖17个月的企鹅珍珠贝(Pteria penguin)苗种生长性状进行测量,利用von Bertalanffy、Gompertz 和Logistic 3种生长模型对其生长性状的增长规律进行拟合, 通过Levenberg-Marquardt 迭代法求出各模型中3个生长参数,综合各参数的最优值,得出不同生长性状拟合效果最佳的生长模型。结果表明,Gompertz模型为企鹅珍珠贝各生长性状的最优生长模型。根据生长参数得出壳长、壳高、壳宽和体质量的生长极限值分别为93.519 mm、90.641 mm、39.075 mm和157.755 g, 生长拐点分别为2.86个月、4.04个月、5.63个月和9.61个月;各生长性状间的绝对生长速度在不同生长期内差异较大,但随着月龄的增大均呈现先增加后降低的趋势;性状间相对生长速度存在差异并随月龄的增长逐渐趋于0。研究结果可为企鹅珍珠贝的养殖生态研究、遗传育种及插核育珠提供理论依据和参考资料。     

几种环境因子对合浦珠母贝精子激活的影响

观察了几种环境因子对合浦珠母贝精子激活的影响。NH4^ 是合浦珠母贝精子激活的关键因子。用氨海水激活解剖出的合浦珠母贝精子时,其pH为9．0—11．5,其中pH为9．5—10．0时精子激活率最高。pH9．5时,精子激活的适宜盐度为15—45,最适盐度为30左右。合浦珠母贝精子对温度的适应性强,在15—40℃内精子激活率都很高。     

企鹅珍珠贝镉金属硫蛋白的分离纯化及其多克隆抗体的制备

镉—金属硫蛋白(Cd-MT)是水生环境中重金属镉污染的重要生物标志物,对该蛋白的研究不仅有利于Cd-MT免疫学检测方法的建立,也为水生环境重金属污染监测技术的开发提供理论依据。采用不同浓度CdCl₂(0～0.8 mg/L)胁迫诱导企鹅珍珠贝合成Cd-MT,通过组织捣碎、冷冻离心、热处理、Sephadex G-50凝胶柱层析等方法从企鹅珍珠贝全脏器中纯化得到Cd-MT。紫外吸收显示,在CdCl₂浓度为0.8 mg/L时,MT粗提液中的Cd-MT特征吸收最大,表明贝体内的Cd-MT含量随着CdCl₂胁迫浓度的增大而增加。SDS-PAGE显示纯化后的Cd-MT及其二聚体分子量约为9 ku和18 ku。采用戊二醛法将获得的Cd-MT与牛血清白蛋白(BSA)偶联后免疫家兔,制备了兔抗企鹅珍珠贝Cd-MT多克隆抗血清。通过间接ELISA法检测其抗血清效价为1∶12 800。经饱和硫酸铵法和DEAE-Sephadex A50亲和层析纯化得到分子量约为35 ku的高纯度免疫球蛋白G(IgG)。ELISA免疫鉴定显示,该IgG不仅能识别企鹅珍珠贝的Cd-MT,还与马氏珠母贝的Cd-MT有明显的免疫交叉反应。     

术前处理和珠核规格对企鹅珍珠贝游离珍珠培育效果的影响

本研究比较了不同术前处理方式和不同规格珠核对企鹅珍珠贝(Pteria penguin)游离珍珠培育效果的影响。术前处理方式分别为抑制母贝性腺发育和促进性腺发育排精产卵,珠核规格分别为5.0 mm、6.0 mm、7.0 mm和8.0 mm,手术贝休养期为1个月,育珠期为18个月。结果显示:术前处理和珠核规格对育珠贝成活率、留核率和成珠率存在显著影响(P0.05),促进性腺发育排精产卵处理的育珠贝休养期、育珠期成活率、留核率和成珠率最高(62.0%、54.0%、21.0%和48.0%),未经术前处理的对照组最低(50.0%、38.0%、11.0%和32.0%),珠核直径5.0 mm组休养期、育珠期手术贝成活率、留核率和成珠率最高(64.0%、54.0%、22.0%和45.0%),8.0mm最低(42.0%、33.0%、8.0%和22.0%)。本研究结果表明,通过手术前处理可以显著提高企鹅珍珠贝育珠贝的成活率、留核率和成珠率,企鹅珍珠贝游离珍珠培育的合适的珠核规格为5.0~6.0 mm。     

企鹅珍珠贝组织蛋白酶D的cDNA克隆、序列特征分析和应激表达研究

笔者初步研究了企鹅珍珠贝（Pteria penguin）组织蛋白酶D（cathepsin D,CTSD）的基因克隆和功能,通过同源克隆方法和cDNA末端快速扩增技术（RACE）获得了企鹅珍珠贝组织蛋白酶D基因（命名为pgCTSD）。该基因cDNA全长1 767 bp,其中5＇UTR为38 bp,3＇UTR为553 bp,ORF为1 176 bp,编码392个氨基酸,包括信号肽（Met1-Ala18）、前体域（Leu19-Lys47）和成熟域（Tyr48-Ser392）三部分,分子量为42.3 kDa,等电点为8.04。pgCTSD氨基酸序列与大珠母贝（Pinctada maxima）pmCTSD的相似性最高（79%）,与其他物种的相似性为59%～75%。荧光定量分析表明,空白对照组中pgCTSD mRNA在闭壳肌、性腺、肝胰脏、外套膜和鳃组织中都有表达,且在闭壳肌中表达量最少,肝胰脏中最高。与试验对照组相比,脂多糖（LPS）刺激6 h后性腺和肝胰脏显著下降,闭壳肌的表达量虽不大但增加显著,外套膜和鳃组织变化不显著;哈维弧菌（Vibrio harveyi）刺激6 h后肝胰腺和外套膜显著下降,闭壳肌和鳃显著上升,性腺无显著变化。肝胰腺中pgCTSD对LPS和弧菌刺激的应答反应表明pgCTSD可能参与了免疫反应。     

运输方式对企鹅珍珠贝存活、生长、消化及抗氧化性能的影响探究

为探究运输方式对企鹅珍珠贝(Pteria penguin)稚贝存活、生长、消化及抗氧化性能的影响。本研究以企鹅珍珠贝稚贝为研究对象,分别以有水运输和无水运输2种方式进行8 h实地运输。运输后暂养14 d进行观察。结果显示,在恢复期第14天,有水运输和无水运输存活率(SR)分别为(97.00±1.00)%和(82.00±0.71)%;有水运输组的壳长、壳高和体重均显著高于无水运输(P<0.05);无水运输的皮质醇(COR)含量显著下降;2种运输中淀粉酶活性均呈上升趋势,超氧化物歧化酶(SOD)活性下降。在恢复期第14天,有水运输组酶活性高于无水运输(P<0.05);有水运输后,酸性磷酸酶(ACP)、谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOP)活性上升;无水运输后,ACP活性上升,GPT和GOT活性下降;在恢复阶段,有水运输组ACP活性逐渐下降,无水运输组ACP活性呈先下降后上升的趋势,GOP和GPT活性不断上升。研究表明,运输方式会对企鹅珍珠贝稚贝产生不同影响,有水运输相对无水运输可使企鹅珍珠贝稚贝在后期恢复阶段具有更好的存活效果和生长状态,稚贝运输后需一定时间进行生理恢复从而能更好地适应野外养殖环境。     

斜带石斑鱼精子超微结构及盐度、温度、pH对精子活力及寿命的影响

选取健康雄性斜带石斑鱼(Epinepheluscoioides)亲鱼进行人工采精,以日立H-600型透射电镜观察精子超微结构,同时设定盐度梯度、温度梯度和pH梯度,观察其对精子活力的影响。超微观察显示,精子头部呈圆形或卵圆形,核膜与质膜间的空间较大;近端中心粒的长轴与尾部约成120°的夹角;基体位于鞭毛顶端,长轴与精子头部细胞核长轴平行;袖套位于核后端,呈筒状,两侧不对称,分布着数量、大小不等的线粒体和囊泡。尾部细长,长26.0～31.5μm,其主要结构是轴丝,轴丝为典型的"9+2"微管结构。活力实验显示,精子活力的最适盐度为27～35,盐度33时精子寿命最长,为27min;最适pH为6.5～8.7,pH8.4时精子运动时间最长,为20min;最适温度为25～31℃,29℃时精子寿命最长,为37min。     

4个企鹅珍珠贝F3选育系的生长存活差异及其生长规律

为比较企鹅珍珠贝[（Röding,1798）]海南金唇选育系（GLHH）、海南白唇选育系（WLHH）、广西金唇选育系（GLGG）和广西白唇选育系（WLGG）的生长存活差异,及了解4个选育系的生长规律,自2018年1月底至2018年12月底连续监测养殖于海南陵水黎族自治县新村港的4个企鹅珍珠贝选育系F₃的存活率及其壳长、壳高、壳宽、铰合线长和体重的生长情况。使用单因素方差分析和生长模型拟合等方法对数据进行分析。结果显示,4个企鹅珍珠贝选育系的生长及存活率存在显著差异（<0.05）,海南金唇选育系的生长及存活率最优,广西白唇选育系的生长及存活率最差,表明企鹅珍珠贝的生长存活可能与环境、贝龄、壳色和地理种群有关。SGompertz生长模型为企鹅珍珠贝5个生长性状的通用生长模型。研究表明,4个企鹅珍珠贝选育系的生长规律存在差异,且企鹅珍珠贝5个生长性状的生长规律存在差异,其中壳长和铰合线长的生长拐点出现得最早,分别出现在7.9（GLHH）~8.5（WLHH）月龄和7.9（GLHH）~9.1（WLGG）月龄;其次是壳高和壳宽,生长拐点分别出现在11.6（GLHH）~15.9（WLGG）月龄和11.8（GLHH）~14.3（WLGG）月龄时;体重的生长拐点出现得最晚,在15.8（GLHH）~18.7（WLGG）月龄。该研究结果表明海南金唇选育系早期生长阶段具有高存活率和优良的生长性能,广西白唇选育系可能具有最大的生长潜力（生长性状的生长极限最大）,本研究可为企鹅珍珠贝的良种选育、健康养殖及优质珍珠的生产提供借鉴。     

虎纹蛙孵化条件及蝌蚪培育技术

虎纹蛙（Rana tigrina ruguisa Wiegmann)，又称田鸡，田蛙，水鸡等，为国家二级保护野生动物，其个体大，营养丰富，肉质鲜美，历来是人们喜爱的美味佳肴，在市场上很受欢迎，但近年来由于捕捉过度，生态环境恶化，导致自然界中虎纹蛙数量日趋减少，为了保护自然资源及满足市场需求，开展虎纹蛙的人工养殖已成为必需，关于虎纹蛙的繁殖生理及发育生物学，国内外已有一些研究^[1],但对影响虎纹蛙孵化的环境因素及蝌蚪培育的研究，却甚少报道，本文就温度，盐度，pH值及水中溶氧对虎纹蛙孵化的影响和蝌蚪的培育进行了观察研究，以期为科研和生产提供参考。     

合浦珠母贝精子激活的离子选择性↑（*）

合浦珠母贝(Ｐｉｎｃｔａｄａｆｕｃａｔａ)是我国海产珍珠最重要的母贝,其繁殖生物学有特殊之处,即人工解剖获得的精子在自然海水中不运动,没有受精能力,需用一定的化学物质激活才能受精[1～3]。生产中常用一定浓度的氨海水来激活。但激活过程中有关离子的作用未见有文献...     

盐度、温度和pH对2种篮子鱼精子活性的影响

选取健康成熟的雄性长鳍篮子鱼(Siganus canaliculatus)和点篮子鱼(Siganus guttatus)亲鱼进行人工采精,设定不同的盐度、温度和p H梯度,观察其对精子活力及激烈运动时间的影响。结果表明:随盐度、温度和p H的升高,2种篮子鱼精子的活力都先增强后减弱;随盐度和p H的升高精子激烈运动时间均先延长后缩短,但随温度的升高,2种篮子鱼精子激烈运动时间都呈现下降的趋势。2种篮子鱼精子的最适盐度范围均为30~35,精子活力和激烈运动都较高。长鳍篮子鱼精子最适温度范围为20~25℃,点篮子鱼精子最适温度范围为25~30℃,在25℃时,2种篮子鱼精子的活力都最高,分别为(90±2.67)%和(95±1.5)%。在p H为7~8范围内,2种篮子鱼精子活力较高,激烈运动时间也相对较长;p H为8时,长鳍篮子鱼和点篮子鱼精子活力都最高,分别为(95±4.67)%和(95±3.67)%,精子激烈运动时间也最长,分别为(44±3.89)s和(34±3.67)s。比较而言,长鳍篮子鱼精子对盐度、温度和p H的耐受性均高于点篮子鱼精子。     

环境因子对圆斑星鲽精子活力的影响

研究了温度、盐度和pH对圆斑星鲽精子活力的影响。结果表明,圆斑星鲽精子活力最适宜温度范围为8~12℃,最适宜盐度范围为25~35,最适宜pH范围为7~8。由实验结果可知,20℃以上高温和盐度15以下的低盐度海水对圆斑星鲽精子活力有抑制作用,在适宜环境条件下精子快速活动时间最长为7~8min,精子寿命最长为12~17min。生产操作中,圆斑星鲽人工受精应在适宜的环境条件下、精子活力高的时间内进行,以获取高质量的受精卵。