迟缓爱德华菌人工感染斑马鱼的致病性及组织病理学变化

用迟缓爱德华菌真鲷分离株(E.t-CD)对斑马鱼进行人工感染试验,观察其发病、死亡以及相关病理学变化。结果表明,该菌对斑马鱼的半数致死浓度(LD50)为2.69×102 cfu/尾;感染发病鱼呈现岀血、溃疡、腹水、败血等症状;病理组织学检查以肝脏水肿变性,肝细胞萎缩、坏死、脱落;脾脏散在增生性结节、充血、水肿、淋巴细胞大量缺失等病变为主。结果表明,斑马鱼可作为研究迟缓爱德华菌致病性的动物模型。     

用Dot—ELISA检测传染性法氏囊病病毒

用从抗传染性法氏囊病高免卵黄液中提取ＩｇＧ包被抗体和酶标记抗体，建立了检测ＩＢＤ病毒的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ方法。经特异性检验，阻断实验及临床应用，证明此法具有良好的特异性，敏感性，病毒的检出率为１００％，与组织病理学方法的符合率达１００％。比免疫琼脂扩散法提高检出率４０％，而且方法简便，节省材料，是ＩＢＤ早期病原学诊断和流行病学调查的有效手段。     

迟缓爱德华氏菌的溶血特性

分析了不同来源的２８株Ｅｔ的溶血特性。分别以平板法（ＰｌａｔｅＡｓｓａｙ,ＰＡ）、接触法（ＣｏｎｔａｃｔＨｅｍｏｌｙｓｉｓ,ＣＨ）及上清法（ＳｕｐｅｒｎａｔａｎｔＡｓａｙ,ＳＡ）检测Ｅｔ的溶血性,阳性率依次为７５％、７５％、５７１４％。ＰＡ和ＣＨ的符合率为１００％。凡ＳＡ检测为阳性的,ＰＡ、ＣＨ检测皆为阳性。培养基中加入螯合剂ＥＤＤＡ造成环境缺铁,结果,约３２１４％Ｅｔ的胞外溶血素显著增加。经胰酶、热处理后,ＡＴＣＣ１５９４７株溶血活性丧失,提示Ｅｔ溶血素是一种不耐热蛋白样物质。     

迟缓爱德华氏菌胞外产物的细胞毒性和动物致病性

分析了２８株迟缓受德华氏菌（Ｅdwardwiella tarda,Ｅt）胞外产物（extracellular puodrcts,ＥＣＰ）的致病性。将Ｅt用覆有玻璃纸的ＴＳＡ培养,１８株（６９．２３％）的 ＥＣＰ使ＨＥp－２细胞产生病认,认圆,脱落。这种细胞毒作用能被ＡＴＣＣ１５９４７株的ＥＣＰ抗体作为探 针进行免疫转印分析,结果显示,不同来源的９株Ｅt的ＥＣＰ在 转印膜上出现３条共同蛋白条带,相对分子质量分别约１４４００、３２、３００、７９、     

用Dot—ELISA检测鸡新城疫病毒的研究

本文建立了检测鸡新城疫病毒的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法。用该法检测自然发病鸡群的粪便样品和脾组织匀浆各８２份,鸡新城疫病毒的检出率（５１．２％,７４．４％）高于血球凝集试验（３６．６％,６１．０％）,且两种方法具有良好的平行关系。该法操作简单,结果明显,直观,适用于基层检测鸡新城疫病毒。     

养殖黑鲷迟缓爱德华菌的分离鉴定

从患病的黑鲷成鱼中分离到一株致病菌,根据其形态学特性、培养特性、生化特性等,鉴定为迟缓爱德华菌。     

迟缓爱德华氏菌检验程序的研究

本试验研究了迟缓德华氏菌（Edwardsiellatrada,Et）的细菌学及致病因子检测,确定了相应检测指标,制定了检验程序。对不同来源的Et作分离及生化鉴定,确定10项生化鉴定指标。用三种方法即平板法（PlateAssay,PA）、接触法（ContactHemolysis,CH）和上清法（SunernatantAs－say,SA）检测Et溶血素,阳性率依次为75％、75％、57．14％。28株Et中,18／26的胞外产物（Extra－cellularProducts,ECP）对HEP－2细胞有细胞毒性,17／28菌株有侵袭力。用ATCC15947株ECP的抗血清进行Det－ELISA,检测阳性率为19／26（73．08％）。     

Dot—ELISA检测减蛋综合征病毒的研究

将辣根过氧化物酶直接标记到ＭｃＡｂ上,建立了检测减蛋综合征病毒的Ｄｏ－ＥＬＩＳＡ方法,可敏感,特异,及早,快速地检测细胞培养物和实验感染难样品中的病毒抗原,某发病鸡场的泄殖腔拭子样品的阳性率为４３．３３％。     

迟缓爱德华菌分子伴侣蛋白GroEL原核表达及免疫特性

GroEL是细菌内分子伴侣蛋白,参与细菌多种生命活动,在布鲁菌、链球菌研究中,GroEL蛋白展示了良好的疫苗潜力。前期利用迟缓爱德华菌抗体Pull-down技术筛选到GroEL蛋白,揭示了该蛋白的潜在应用价值,本试验以迟缓爱德华菌GroEL蛋白作为研究对象,利用大肠杆菌表达系统表达纯化GroEL重组蛋白(rGroEL),进一步通过动物模型评估rGroEL的免疫效果。结果显示,rGroEL能够激发小鼠产生高水平的特异性抗体,具有较好的免疫原性,免疫小鼠对迟缓爱德华菌感染具有较好的抵抗力,相对保护率达95%。斑马鱼感染试验结果表明,rGroEL免疫对迟缓爱德华菌感染具有一定保护效果,保护率为60%。用rGroEL免疫斑马鱼可以产生针对嗜水气单胞菌的免疫保护力,保护率可达45%。本试验初步探索了迟缓爱德华菌重组蛋白rGroEL的免疫特性,为研制迟缓爱德华菌亚单位疫苗和核酸疫苗提供了依据。     

Dot—ELISA检测犬瘟热病毒抗原的研究

用建立的三抗体夹心法Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗原,其抗原最低检出量为１．１５μｇ／ｍＬ（０．５７６２５ｎｇ／点）,经与常规ＥＬＩＳＡ对１０４份自然感染犬的血液白细胞样本,６０份眼结膜分泌物样本,７３份脾、肝、淋巴结等脏器样本进行检出的阳性率分别为９２．３１％、６６．６７％、８３．５６％和９０．７２％、６３．２９％、８１．８６％;两种方法检出的总阳性率分别为８３．５４％（１９８／２     

迟缓爱德华菌菌毛蛋白原核表达及多抗血清制备

为研究迟缓爱德华菌菌毛蛋白PILI的功能和免疫原性,本研究利用PCR方法从迟缓爱德华菌基因组中克隆出pili基因,并将其构建到pET-32a原核表达载体上,重组载体转化BL21大肠杆菌诱导重组蛋白表达,通过SDSPAGE和Western blot方法验证重组蛋白表达。用亲和层析方法纯化蛋白,纯化的蛋白免疫小鼠,所得的多抗血清能够特异性识别迟缓爱德华菌PILI蛋白,为研究PILI蛋白奠定基础。     

用Dot—ELISA检测兔出血症病毒抗体的研究

建立了敏感、特异、稳定的检测兔出血症病毒抗体的Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ，其敏感性比ＨＩ试验高１００倍以上。结果表明，当抗体效价在１：１６０时，攻毒保护率为５０％，在１：３２０以上时保护率为１００％。据母源抗体的动态检测结果，仔兔３０日龄时应进行首次免疫。     

间摘录 法Dot—ELISA检测狸流行性腹泻抗体的研究

使用非洲绿猴肾细胞增殖适应传代细胞培养的猪流行性腹泻病毒,并经聚乙二醇沉淀法分离纯化ＰＥＤＶ抗原,建立斑点酶联免疫吸附试验检测猪流行性腹泻抗体。     

Dot—ELISA检测猪生殖和呼吸综合征抗体的研究

用差速离心法提纯ＰＲＲＳ病毒，利用ＮＣ膜作为载体，在国内外首次成功建立了检测ＰＲＲＳ血清抗体的斑点酶联免疫吸附试验（Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）。抗原包被浓度为１００μｇ／ｍｌ，被检血清工作浓度为１：１０，酶标兔抗猪ＩｇＧ工作浓度为１：６００。对７２份北京地区猪血清分别用Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ和ＩＦ检测，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测阳性率为３３．３％，ＩＦ检测阳履率为３０．６％，与ＩＦ符合率较高，对部分待检血清检测